Immunology and Infection
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Дрозофила меланогастер Протокол инжекции личинок
Chapters
Summary October 19th, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Взрослые мухи Drosophila melanogaster широко использовались в качестве модельных организмов для исследования молекулярных механизмов, лежащих в основе врожденных иммунных реакций хозяина противомикробных препаратов и стратегий микробной инфекции. Для продвижения стадии личинки D. melanogaster в качестве дополнительной или альтернативной модельной системы описана методика личиночного впрыска.
Transcript
Этот протокол решает трудности и проблемы с микроинъекцией личинки, описывая точный метод, который позволит использовать личинку Drosophila melanogaster в качестве модели для различных иммунных и молекулярных исследований. Это простая инъекционная техника, которая представляет собой эффективный, экономичный и быстрый метод многократной доставки различных веществ единообразным образом, что позволяет получать последовательные и надежные результаты. Начните с выбора личинок третьей стадии и мыть их раствором Рингера в небольшой чашке Петри.
Поместите фильтровальную бумагу в чашку Петри и смочите ее 5 мл раствора Рингера. Затем поместите личинки на фильтровальную бумагу. Подготовьте капилляры, используя 3,5-дюймовые стеклянные капиллярные трубки в съемнике микропипетки.
Откройте стеклянный капилляр с помощью прямых зазубренных среднеточечных щипцов. Наполните открытый капилляр минеральным маслом с помощью пластикового одноразового шприца. Затем выбросьте масло из капиллярной трубки с помощью нанолитрового инжектора.
Наполните капилляр нужным бактериальным препаратом для инъекций. Переложите обезболенные личинки на фильтровальную бумагу, смоченную раствором Рингера. С помощью щипцов оказывайте сильное давление на спинную сторону заднего конца личинок, где заметны дыхальца трахеи.
Затем вставьте иглу горизонтально, к заднему концу личинок, и введите бактериальные запасы. Удалите щипцы, чтобы избежать разлива гемолимфы или кишечника. Затем извлеките иглу, предварительно вставленную в личинки.
Заражайте 20 личинок для каждого экспериментального состояния. С помощью кисти аккуратно перенесите введенные личинки в отдельную влажную фильтровальную бумагу. Добавьте решение Рингера по мере необходимости, чтобы предотвратить высыхание.
Инкубировать чашку Петри в инкубаторе при 25 C.Личинки Drosophila melanogaster, инфицированные Photorhabdus asymbiotica, демонстрировали 57%-ную выживаемость в течение 24 часов после инъекции, в то время как личинки, введенные кишечной палочкой, показали 85% выживаемость в тот же момент времени. Важность этого метода заключается в том, что игла держится примерно параллельно личинке. Давление, прилагаемое для удержания личинки, очень мало, что снижает вероятность утечки гемолимфы, смертельной травмы или неадекватной доставки желаемого вещества.
Эта техника может быть усовершенствована с практикой.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
