Journal
/
/
Aktuell anvendelse Bioassay å kvantifisere insektmiddel toksisitet for mygg og frukt fluer
JoVE Journal
Biology
This content is Free Access.
JoVE Journal Biology
Topical Application Bioassay to Quantify Insecticide Toxicity for Mosquitoes and Fruit Flies

Aktuell anvendelse Bioassay å kvantifisere insektmiddel toksisitet for mygg og frukt fluer

5,135 Views

09:37 min

January 19, 2022

DOI:

09:37 min
January 19, 2022

17 Views
, , , , ,

Transcript

Automatically generated

Ved å bruke insektmiddel direkte på insektet i stedet for gjennom overflatekontakt, er det minimal variasjon i insektmiddeleksponering, og dette gjør at vi kan måle følsomhetsprofilen til myggpopulasjoner mer nøyaktig. Den største fordelen med denne teknikken er at den lar oss beregne masse-relativiserte dødelige doser av et insektmiddel i stedet for dødelige konsentrasjoner, noe som i stor grad forbedrer sammenligninger av motstandsforhold. Vær forsiktig med å lagre insekticidene riktig, unngå å forurense verktøyene dine, og sørg for at sprøytedelene er i god form.

Dette vil hjelpe deg med å oppnå konsistente resultater. Til å begynne med, fjern de nødvendige insektmiddelløsningene fra fryseren. Virvel straks løsningen eller inverter fem ganger, og legg den i en lysbestandig beholder ved romtemperatur for å la insekticidene varme til romtemperatur før bruk.

Sett ut fem mikrocentrifuge rør med 0,5 milliliter aceton hver. Fyll sprøytefatet helt med aceton fra det første røret. Deretter utviser du acetonen i en avfallsbeholder ved raskt å skyve ned på stempelet, og gjenta fire ganger til for å fullføre totalt fem acetonvasker fra samme aceton aliquot.

Fyll deretter sprøytefatet helt med luft, og utvis luft og potensielle acetonrester inn i avfallsbeholderen. Gjenta to ganger til for å fullføre tre vasker med luft. Lag en luftlomme i fatet mellom sprøytestempelen og toppen av nålen ved å trekke stempelet omtrent fem millimeter opp i fatet.

Merk plastholderkoppene med tilfeldig ID for blind dødelighetsvurdering. Ved hjelp av en aspirator drevet av sug fra innånding, aspirer ønsket antall tre til fem dager gamle voksne mygg. Plasser spissen av aspiratoren i røret med bomull viklet rundt spissen.

Pust forsiktig ut, og trykk på aspiratoren for å overføre myggene til et konisk rør. Bruk bomullen til å koble til røret når aspiratorspissen er fjernet, og deretter hette med lokket. Slå kort ned myggene i rørene ved å plassere dem i minst 10 minutter ved fire grader Celsius eller begrave dem under isen i et isbrett.

Overfør de bankede myggene til insekthåndteringsteltet. Vipp myggene forsiktig ut på et plastbrett plassert på isen, og hell rundt 50 mygg om gangen for å sikre at hver berører den kjølige skuffen under den og forblir slått ned. Sorter myggene etter kjønn ved å forsiktig plukke dem opp av bena eller vingene med tang, etterfulgt av å plassere hvert kjønn i en separat holdekopp, og stopp når ønsket nummer er nådd.

Mens du sorterer, fjern mygg som er skadet eller er ekstra store eller små. For å registrere vekten av myggkoppen, legg en tom kopp med en Petri-tallerken som lokk på skalaen, og tjære skalaen. Hell myggene i beholderen, og legg lokket på toppen.

Plasser beholderen på skalaen, og registrer den endelige vekten, sammen med antall mygg. Plasser straks koppen av prøver tilbake på isen for å holde dem immobilisert til alle kopper av prøven er veid. Del de tilberedte myggene i fem til ti separate kopper plassert på is, merket med tilfeldige ID-er.

Bruk pinsett og en håndholdt teller for å oppnå 20 til 25 mygg per kopp. For å sortere fruktfluene, bedøv fluene ved hjelp av karbondioksid i syv sekunder. Hell fluene på en ispakke innpakket i benkpapir.

Bruk en fin tippet pensel, skille og telle menn og kvinner. Bruk penselen til forsiktig å plukke opp de valgte fluene, og legg dem i en ren, tom lagerflaske. Etter å ha valgt like mange mannlige og kvinnelige fruktfluer, merk lagerflaskene med stammenavnet og fruktfluen totalt.

Bedøv flasken med fruktfluer ved hjelp av karbondioksid i syv sekunder. Hell fruktfluene på veiepapir, og bruk papiret som en trakt for å introdusere fluene i et tared hetteglass merket med en tilfeldig ID.Etter å ha plassert Petri-parabollokket på toppen av hetteglasset med fruktfluer, plasser det på skalaen. Registrer den kombinerte vekten og antall prøver på resultatarket.

Plasser straks hetteglasset med fruktfluer i et brett med is med lokket fortsatt på toppen for å forhindre at fluene rømmer. Last sprøyten med riktig insektmiddelkonsentrasjon, start med den minst konsentrerte dosen og arbeid mot den mest konsentrerte dosen med hver gruppe organismer. Tipp prøvene på veiepapir plassert på toppen av et brett på isen.

Skill prøvene som er tett sammen ved hjelp av en ren insektmiddelfri pensel eller bomullspinne for å gi enkel tilgang til hver prøve for dosering. Bruk sprøyten, bruk en dråpe insektmiddelløsning på ventral thorax og mageområde for mygg og dorsum for fruktfluer. Hell straks prøvene tilbake i den merkede plastkoppen.

Dekk koppen med netting og et gummibånd. Legg merke til en oppdatert prøvetelling på koppen hvis noen prøver ble drept, skadet eller rømt i denne prosessen. Plasser den ferdige koppen i en holderbrett.

For den første koppen registrerer du tiden når doseringen er fullført. Gjenta dosering for hver kopp til alle prøvene er dosert med riktig insektmiddelkonsentrasjon, og registrer sluttidspunktet når alle prøvene er dosert. Gi 10% sukroseløsning til hver kopp via en våt bomullskule, og lagre mygg og fruktfluer ved ønsket temperatur og fuktighet.

Registrer prøvedødelighet ved 24 timer etter starten av insektmiddeleksponering. Klassifisere mygg som levende hvis de kan fly og holde seg oppreist og døde hvis de er immobile eller ataxic, som beskrevet av WHO. Følg samme dødelighetsvurdering for fruktfluer.

Etter å ha utført bioassay, dose respons data ble innhentet med to stammer som er Rockefeller og IICC genotype for mannlige og kvinnelige Aedes aegypti. Den masse-relativiserte median dødelige dosen for Rockefeller og IICC var henholdsvis 0,008 og 0,336 nanogram per milligram. Resultatene viste ingen forskjeller mellom doseresponskurvene til kvinnelige og mannlige mygg innenfor hver stamme.

Derfor ble data fra begge kjønn kombinert for å beregne median dødelige doseverdier. Siden 95% konfidensintervaller for median dødelig dose av disse to stammene ikke overlappet, ble disse verdiene ansett som betydelig forskjellige. I tillegg, når du beregner de motstandsdyktige forholdene, var IICC-stammen over 40 ganger mer motstandsdyktig enn den mottakelige Rockefeller-stammen.

Doseresponsdata for fruktflue, Drosophila melanogaster, Canton-S-stamme, ble også innhentet, og den masse-relativiserte median dødelige dosen ble funnet å være 0,213 nanogram per milligram. Konsistens er kritisk, spesielt når du lagrer og bruker insektmiddelet og vurderer dødelighet. Vær også forsiktig når du håndterer prøven for å unngå skade eller død som ikke er indusert av insektmiddelet.

Med denne metoden kan vi nå nøyaktig bestemme den tekniske motstanden til en myggpopulasjon og hvordan miljøforholdene påvirker motstand eller hvordan teknisk motstand forutsier praktisk motstand.

Summary

Automatically generated

Vi beskriver metodikken og betydningen av den aktuelle applikasjonen bioassay for å måle insektmiddel mottakelighet i mygg og fruktfluer. Den presenterte analysen er høy gjennomstrømning, utnytter insektmasse- og tillater dermed beregning av en masse-relativisert dødelig dose i stedet for konsentrasjon - og har sannsynligvis lavere variasjon enn andre lignende metoder.

Read Article