A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
הערכה של סמן ביולוגי אמין במודל של אלח דם של אלח דם של אלח דם הנגרם על-ידי נקב
Chapters
Summary December 9th, 2022
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
פרוטוקול זה מציג את הפרטים האופרטיביים של קשירת cecal ונקב (CLP) במודל עכבר של אלח דם. CLP היא אחת הטכניקות הנפוצות ביותר ליצירת מודל חייתי של אלח דם. לכן, נדרש פרוטוקול CLP סטנדרטי להשגת תוצאות מחקר אמינות.
Transcript
המטרה העיקרית של מחקר זה היא להשתמש במודל עכבר של קשירת cecal ואלח דם המושרה לנקב כדי להעריך סמן ביולוגי אמין בדם של אלח דם. קשירת Cecal ונקב, או CLP בקיצור, הוא מודל רלוונטי מבחינה קלינית של אלח דם. CLP הוא מודל נפוץ במחקר אלח דם.
היסטון H3, או CitH3, מקורו ב- NETosis המושרה על ידי אלח דם. המחקר הקודם שלנו מדגים כי CitH3 הוא סמן ביולוגי אבחוני אמין של אלח דם. בחר עכברי C57BL/6 זכרים.
לשקול את העכבר, ולהרדים את העכבר על ידי שאיפה של 1.5% isoflurane. הנח את העכבר על כרית חימום. יש למרוח קרם דפילציה על הבטן ולהשאיר לא יותר מדקה אחת לפני הסרת הקרם והשיער.
הכינו כלי ניתוח סטריליים המתאימים לניתוח בעלי חיים מכרסמים. לחטא את עור הבטן עם יוד לפחות שלוש פעמים. יש לכסות את אזור הניתוח הניתוחי בעזרת וילונות כירורגיים סטריליים מתאימים.
השתמש במספריים כירורגיים סטריליים כדי לבצע חתך של כשני סנטימטרים בדופן הבטן, לאורך הלינאה אלבה. לזהות ולבודד את cecum מתוך חלל הצפק עם פינצטה סטרילית. ליגייט 75 נפח של cecum עם 4-0 תפר משי.
אין לנעוץ את כלי הדם המזנטריים. יש לציין, אחוז שונה של cecum ligated קובע את חומרת אלח דם. 25% מוביל לאלח דם בדרגה נמוכה, 50% מוביל לאלח דם בדרגה בינונית, ו-75% מוביל לאלח דם בדרגה גבוהה.
נקבו את הצקום על ידי ניקוב אחד דרך ודרך עם מחט 21 מד בנקודת האמצע שבין קצה הזנב לקשירה. סוחטים בעדינות את הצואה מתוך הצואה דרך חורי חדירה. יש לציין, כמות הצואה שנדחקה לתוך חלל הצפק צריכה להיות עקבית, שכן צואה קובעת גם את חומרת אלח דם.
החלף את הצקום כמו גם צואה לתוך חלל הבטן בעדינות. סגור את שכבת שרירי הבטן ואת שכבת העור עם 6-0 תפר משי. יש לחטא את החתך ביוד.
הזרקה של ketoprofen, חמישה מיליגרם לקילוגרם, צריך להתבצע על הרביע השמאלי התחתון של הבטן, כדי למנוע את cecum. הניחו את העכבר על כרית חימום עד להתאוששות מלאה. העכבר שוכן בחדר עם בקרת טמפרטורה ומקבל גישה חופשית למזון ולמים.
בעלי חיים יומתו על ידי מנת יתר של פחמן דו חמצני עם תסמינים של אלח דם, הרלוונטיים לנקודות הקצה המוגדרות מראש שלנו בהתבסס על המחקר שלנו שהוצג. עכברים מחולקים באופן אקראי לקבוצת ה-sham, לקבוצת CLP ולקבוצת הטיפול CLP בתוספת Cl-amidine או YW3-56. עכברים בקבוצת בושה מקבלים את כל הליכי CLP למעט קשירת cecum ונקב.
קצירת דם היקפי 24 שעות לאחר הניתוח והכנת סרום באמצעות צנטריפוגה. ריכוז CitH3 נקבע על ידי כתם מערבי וערכת ELISA שפותחה בעצמה. כפי שניתן לראות באיור 2, לא זוהה CitH3 בקבוצת ה-sham.
רמות CitH3 היו גבוהות לאחר החדרת CLP, אשר נחלש על ידי עיכוב PAD באופן משמעותי. בהתבסס על הנתונים שלנו, אנו מסיקים כי מחזור CitH3 הוא סמן ביולוגי אבחון אמין של אלח דם.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
