Een heterotopisch muismodel voor het bestuderen van larynxtransplantatie

Larynxtransplantatiemodellen werden beschreven bij muizen en ratten. Het eerdere werk van Senior alter was gericht op het bedenken van een efficiëntere methode met behulp van de donorcarotisslagaders voor anastomose, waardoor de noodzaak om de superieure schildklierslagaders te ontleden werd vermeden. In deze video beschreven we deze procedure bij muizen.

Met dit larynxtransplantatiemodel voor muizen kunnen immunologische studies gemakkelijk en tegen lage kosten worden uitgevoerd. Hoewel technisch uitdagender vanwege de kleinere omvang van de vaten in vergelijking met een rattenmodel, kan deze procedure in ongeveer drie uur worden uitgevoerd als vertrouwdheid met de chirurgische stappen wordt verkregen. Nadat het dier volledig is verdoofd, brengt u de muis over naar het scheergebied waar 1,5% isofluraan met één liter per minuut zuurstofstroom wordt geleverd via een gezichtsmasker voor onderhoud van de anesthesie.

Bevestig de diepte van de anesthesie met een teenknijper. Scheer de borst en nek van de muis tot aan de kaaklijn en breng ontharingscrème aan. En veeg na 30 seconden de crème af en breng de muis over naar het operatiegebied.

Immobiliseer de muis en bereid het chirurgische gebied driemaal voor met povidon-jodium en alcohol en drapeer vervolgens de muis. Maak een kleine horizontale incisie net superieur aan de suprasternale inkeping. Til met een fijne schaar de huid bilateraal op via die incisie tot aan de onderkaak en snijd een trapeziumvormig huidsegment weg.

Snijd de bilaterale speekselklieren weg met behulp van cautery op het superieure deel waar een kleine ader die door de klier reist wordt gevisualiseerd. Ontleed de bilaterale sternocleidomastoïde spieren uit de omliggende weefsels en trek ze lateraal in. Maak een middenlijnincisie op de riemspieren en snijd ze bilateraal weg, waarbij u ervoor zorgt dat de onderliggende schildklier niet wordt beschadigd en deze op het laryngotracheale slokdarm- of LTE-complex achterlaat.

Na deze stap zijn bilaterale halsslagaders zichtbaar. Ontleed de gemeenschappelijke halsslagaders inferieur tot het niveau van het sleutelbeen en tot het niveau van de halsslagader bifurcatie superieur. De nervus vagus en de interne halsader worden ontleed vrij van de halsslagaders en niet opgenomen in het verkregen transplantaat.

Ontleed de interne en externe halsslagaders ver genoeg om te kunnen ligateeren en verdelen. Gebruik een 10-0 nylon hechting om de interne halsslagaders te ligateeren die twee tot drie millimeter superieur zijn aan de halsslagadersplitsing. Ligate de externe halsslagaders die minstens drie millimeter superieur zijn aan het vertakkingspunt van de superieure schildklierslagader en ligate de gemeenschappelijke halsslagaders ter hoogte van het borstbeen.

Knip alle ligaatschepen bilateraal af. Houd de vasculaire pedikels bovenop het LTE-complex om onbedoelde schade tijdens verdere dissectie te voorkomen. Om gaslekkage of onbedoeld verlies van anesthesie te voorkomen, moet u ervoor zorgen dat het dier is verlopen voordat u luchtwegsneden maakt.

Transect de luchtpijp onder de vijfde tracheale ring en draag de incisie door de slokdarm naar de prevertebrale fascia om het LTE-complex inferieur te bevrijden. Bevrijd de luchtpijp en slokdarm van de onderliggende prevertebrale fascia van inferieur naar superieur. Maak een anterieure faryngectomie die net inferieur is aan het tongbeen.

Draag de incisie naar de voorwervel fascia om het LTE-complex superieur te bevrijden. Verdeel eventuele resterende lymfoïde of bindweefselaanhechtingen tussen het LTE-complex en het omliggende weefsel. En tot slot, verwijder het transplantaat.

Plaats het verkregen transplantaat in een steriele petrischaal en was met een normale zoutoplossing om eventuele bloedstolsels te verwijderen. Verwijd de bilaterale halsslagaders met behulp van microdilatoren van één millimeter. Injecteer met behulp van een stompe naald met een stompe punt ongeveer twee milliliter gehepariniseerde zoutoplossing in elke halsslagader om het transplantaat te spoelen.

Bloed en zoutoplossing zullen worden gezien spoelen uit de contralaterale halsslagader en kleine vrije vaatuiteinden die intacte superieure schildklierslagaders bevestigen. Het transplantaat kan worden achtergelaten in heparinized zoutoplossing en een korte pauze kan tot drie uur worden genomen voordat het in de ontvanger wordt getransplanteerd. Bereid de ontvangende muis voor op exact dezelfde manier als beschreven voor de donor na inductie-, scheer- en chirurgische voorbereidingsstappen.

Injecteer de ontvangende muis met analgeticum met verlengde afgifte subcutaan 30 minuten voor aanvang van de operatie. Maak met behulp van een scalpel een middenlijnhalsincisie die zich uitstrekt van de kaaklijn superieur tot het borstbeen inferieur. Til de huid aan de linkerkant op en trek deze zijdelings in.

Snijd de linker speekselklier dichtschroeiende de superieure vaten zoals eerder beschreven. Snijd het vetweefsel en het lymfoïde weefsel weg door zichtbare vaten met een lage temperatuur cautery te delen. Zorg ervoor dat de onderliggende externe halsader niet wordt beschadigd.

Ontleed de uitwendige halsader omtrek. Gebruik ten minste vijf millimeter heldere lengte van het vat voor anastomose. Ontleed de sternomastoïde spier en trek deze zijdelings in.

Ontleed de gemeenschappelijke halsslagader van het sleutelbeen inferieur tot aan de halsslagader bifurcatie superieur. Plaats het achtergrondmateriaal onder de externe halsader en breng de dubbele benaderende B-3 vatklemmen aan. Plaats een 10-0 nylon hechtdraad door de voorste wand van de externe halsader op de locatie van de gewenste monotomie en gebruik de hechting om het vat anterieur te trekken.

Snijd net diep tot aan de hechting met een microschaar om het creëren van de juiste maat enkele spleet venotomie te vergemakkelijken en om ervoor te zorgen dat de snede volledig door de veneuze wand is. Gebruik een stompe naald van 30 gauge en spoel de binnenkant van de ader met gehepariniseerde zoutoplossing. Plaats het LTE-complex van de donor tussen de linker halsslagader van de ontvanger en de linker externe halsader.

Lijn het vrije uiteinde van de linker halsslagader van de donor uit naar de linker externe halsader van de ontvanger en schuin het uiteinde af met een scherpe schaar. Met behulp van vier 10-0 nylon onderbroken hechtingen, anastomose de donor verliet halsslagader en ontvanger verliet externe halsader op een end-to-side manier. Schuif het achtergrondmateriaal onder de gemeenschappelijke halsslagader van de ontvanger en breng de dubbele benaderende A-3-vatklemmen aan.

Maak een arteriotomie op dezelfde manier als de venotomie. Anastomoseer de rechter halsslagader van de donor naar de linker halsslagader van de ontvanger op een end-to-side manier. Het gebruik van zes onderbroken hechtingen met 10-0 nylon is ideaal voor de arteriële anastomose.

Verwijder de klemmen aan de veneuze kant. Als er bloedingen optreden, oefen dan zachte druk uit met katoenen tips. Verwijder de klemmen op de slagader en oefen onmiddellijk zachte druk uit met katoenen uiteinden.

Er wordt enige bloeding verwacht bij de stap die meestal stopt na een minuut met zachte druk. Controleer de integriteit van de bloedstroom in de slagader in de ader. Bij intacte arteriële stroming wordt meestal pulsatie van de donorslagader gezien en zal de donor schildklier veranderen van zijn gespoelde transparante kleur terug naar zijn oorspronkelijke roodachtige kleur.

Rode kleuring van de kleine vaten op het LTE-complex kan ook worden waargenomen. Sluit de huidincisie met 5-0 monofilament hechting op een lopende manier. Breng een huidlijm aan op de incisie.

Injecteer een milliliter warme zoutoplossing subcutaan om rekening te houden met vochtverlies tijdens de operatie. Stop de anesthesie en breng de muis over naar een herstelkooi. Observeer de muis op een verwarmingskussen totdat deze volledig wakker is om onderkoeling te voorkomen.

Chirurgisch succes kan onmiddellijk na het verwijderen van de vatklemmen worden beoordeeld. Figuur A is representatief voor een succesvolle operatie omdat de bloedstroom kan worden gevisualiseerd in de halsslagaders van het strottenhoofd van de donor en de schildklier rood wordt. Figuur B is representatief voor een mislukte operatie omdat de bloedstroom niet kan worden gevisualiseerd in de halsslagaders van het strottenhoofd van de donor en de schildklier bleek bleef.

Na 15 dagen bij afwezigheid van immunosuppressie hebben de meeste ontvangers geen bloedtoevoer naar de transplantatie. De doorgankelijkheid van de slagader kan macroscopisch worden beoordeeld door het laryngotracheale complex vrij van het omliggende ontvangende weefsel te ontleden en de end-to-side anastomose te visualiseren. Bedankt. Na het bekijken van deze video moet u begrijpen hoe u een larynx tracheo-oesofageaal complex in ongeveer drie uur van de ene muis naar de andere kunt transplanteren.

Dit haalbare en relatief goedkope model biedt een aanzienlijk potentieel bij het bestuderen van de rol van het immuunsysteem bij de afstoting van het laryngotracheale complex, waardoor het potentieel voor nieuwe therapieën bij orgaantransplantatie wordt geboden.