Наше исследование сосредоточено на том, как митохондрии чувствуют и адаптируются к метаболическим стрессорам. Одним из ключевых метаболических стрессоров является гипоксия, которая возникает, когда клетки испытывают кислородное голодание. Мы разрабатываем более совершенные анализы для изучения функции митохондрий в средах с низким содержанием кислорода.
Масс-спектрометрия с более высоким разрешением использовалась для изучения уровней клеточных и тканевых метаболитов. Мы использовали исследования по отслеживанию стабильных изотопов, чтобы отследить судьбу конкретных метаболитов и выявить новые метаболические пути, относящиеся к здоровой и больной физиологии млекопитающих. Группа обнаружила, что митохондрии млекопитающих могут поддерживать критические функции в средах с низким содержанием кислорода.
Механистически они используют фумарат в качестве альтернативного электронного скипетра для цепи переноса электронов. Этот протокол содержит несколько анализов, которые исследователи могут использовать для лучшей оценки функции митохондрий в клетках млекопитающих. Важно отметить, что эти протоколы могут быть использованы для изучения функции митохондрий при гипоксии, поскольку классических экспериментов по респирометрии будет недостаточно.
Summary
Automatically generated
Здесь мы представляем компиляцию анализов для непосредственного измерения функции митохондрий в клетках млекопитающих независимо от их способности потреблять молекулярный кислород.
Tseyang, T., Valeros, J., Vo, P., Spinelli, J. B. Oxygen-Independent Assays to Measure Mitochondrial Function in Mammals. J. Vis. Exp. (195), e65184, doi:10.3791/65184 (2023).