हम एक उच्च स्थानिक और लौकिक संकल्प के साथ पूरे मस्तिष्क की न्यूरोएक्टिविटी को रिकॉर्ड और विश्लेषण करने के लिए ऑप्टिकल प्रतिरक्षा प्रणाली और कम्प्यूटेशनल एल्गोरिदम विकसित कर रहे हैं। प्रयोगशाला मछली अनुसंधान के लिए एक आदर्श मॉडल जानवर है। प्रत्येक ऑप्टिकल पारदर्शिता और विविध आनुवंशिक उपकरणों की उपलब्धता के लिए धन्यवाद नमूना माउंटिंग के लिए उपयोग किए जाने वाले अगारोस जेल द्वारा पेश किए गए विचलन के कारण ऑप्टिकल छवि की गुणवत्ता खराब हो सकती है, और रिकॉर्डिंग के दौरान मछली छवियों में गति कलाकृतियों का कारण बन सकती है या छवियों से सटीकता संकेत निष्कर्षण को बाधित कर सकती है।
सार्वजनिक रूप से उपलब्ध प्रोटोकॉल प्रयोगात्मक प्रक्रिया का केवल एक संक्षिप्त अवलोकन प्रदान करते हैं, विवरण के पर्याप्त हिस्सों को जीवित करते हैं, जैसे कि एगारोस ठोसकरण, सटीक माउंटिंग तकनीक और सरल स्थिति। इसलिए, उच्च गुणवत्ता वाले छवि डेटा प्राप्त करने के लिए एक प्रभावी और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रोटोकॉल की आवश्यकता होती है। न्यूनतम शोर और गति के साथ।
हमारा प्रोटोकॉल एक अनुकूलित और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रयोगात्मक प्रक्रिया प्रदान करता है। यह प्रोटोकॉल एक विस्तारित अवधि में विवो पूरे मस्तिष्क इमेजिंग और अधिग्रहित इमेजिंग डेटा के विज़ुअलाइज़ेशन में सक्षम बनाता है। वर्कफ़्लो पूरे मस्तिष्क इमेजिंग पर केंद्रित है, लेकिन इसे आसानी से हमारे ज़ेबरा मछली के अन्य अंगों की इमेजिंग के लिए लागू किया जा सकता है।
हमारा लक्ष्य तंत्रिका गणना के अंतर्निहित सिद्धांतों को उजागर करना है। इसके लिए हम एक पाइपलाइन पर काम करना जारी रखेंगे जिसमें व्यवस्थित मस्तिष्क मानचित्रण के लिए तंत्रिका गतिविधि और संरचना और कम्प्यूटेशनल विश्लेषण के बड़े पैमाने पर इमेजिंग शामिल है।
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यहां प्रस्तुत किया गया है तीन आयामी प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके लार्वा ज़ेबराफिश के विवो पूरे मस्तिष्क इमेजिंग के लिए एक प्रोटोकॉल है। प्रयोगात्मक प्रक्रिया में नमूना तैयारी, छवि अधिग्रहण और विज़ुअलाइज़ेशन शामिल हैं।
Cho, E., Han, S., Kim, G., Eom, M., Lee, K., Kim, C., Yoon, Y. In Vivo Whole-Brain Imaging of Zebrafish Larvae Using Three-Dimensional Fluorescence Microscopy. J. Vis. Exp. (194), e65218, doi:10.3791/65218 (2023).