Imaging ATG9A, a Multi-Spanning Membrane Protein

Alexander R. van Vliet; Stefano De Tito; Eugenia Almacellas; Sharon A. Tooze

doi:10.3791/65349

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ATG9A、マルチスパン膜タンパク質のイメージング

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Imaging ATG9A, a Multi-Spanning Membrane Protein

ATG9A、マルチスパン膜タンパク質のイメージング

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07:20 min

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June 16, 2023

DOI:

10.3791/65349-v

DOI:

10.3791/65349-v

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07:20 min

June 16, 2023

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Alexander R. van Vliet*^1,2, Stefano De Tito*¹, Eugenia Almacellas*¹, Sharon A. Tooze¹

¹Molecular Cell Biology of Autophagy,The Francis Crick Institute, ²MRC Laboratory of Molecular Biology

Transcript

私たちの研究室では、どの脂質とタンパク質機構がATG9A小胞の輸送に関与しているかを理解することに興味を持っています。ATG9Aは、ファゴフォアの形成と成熟のためのオートファジー経路において重要です。しかし、私たちは最近、細胞小器官の恒常性におけるATG9Aの影響を研究しています。

最大の課題は、タンパク質とタンパク質機構がどのように機能するかについて、分子の詳細を明らかにすることです。現在、AlphaFoldや高分解能in-situクライオ電子顕微鏡をベースとしたタンパク質エンジニアリングなどの技術が、最も進歩しています。私の研究室の研究は、オートファゴソームがどのように形成されるかについての基本的な洞察を確立しました。

これらの知見は、本稿で紹介したような高度な分子細胞生物学技術によって裏付けられています。特定のタンパク質タグを使用することのいくつかの欠点と、タグの局在化に応じてATG9Aの挙動がどのように変化するかを説明します。したがって、N末端またはC末端のいずれかです。

また、これらの欠点を検出する方法とそれらを回避する方法も提案します。これに加えて、ATG9Aの分散を再現性のある方法で定量するワークフローも提供します。ここでは、免疫蛍光法やライブイメージングから画像取得、異なる細胞区画間でのATG9の分散を解析するためのワークフローを提供します。

また、画像解析のパイプラインの標準化は、細胞生物学者が結果の信頼性と再現性を高めるための優先事項であると考えています。