Voorbereiding en immunofluorescentiekleuring van bundels en enkelvoudige vezelcellen uit de cortex en de kern van de ooglens

De lens is een transparant ellipsoïde orgaan in de voorste oogkamer en is verantwoordelijk voor een fijne focus van licht op het netvlies om een helder beeld te creëren. De functie van de lens is afhankelijk van zijn biomechanische eigenschappen, complexe interdigitaties tussen de lensvezelcellen zijn onlangs belangrijk gebleken voor de stijfheid van de lens. Hoewel de gespecialiseerde morfologie van lensvezelcellen eerder is beschreven door elektronenmicroscopie, is er weinig bekend over de eiwitten die nodig zijn voor deze in elkaar grijpende membranen.

Eerdere studies waren gebaseerd op lensweefselsecties, die geen duidelijke visualisatie van complexe celarchitectuur mogelijk maken. We hebben een nieuwe techniek ontwikkeld en geperfectioneerd om de complexe membraaninterdigitaties tussen lensvezelcellen getrouw te bewaren voor kleuring en confocale microscopiebeeldvorming van specifieke eiwitten. In dit protocol is er ook een nieuwe methode om de vezelcellen vanuit het midden van de lens te kleuren, ook wel de lenskern genoemd.

Deze methode opent de deur naar het begrijpen van de differentiatie en rijping van vezelcellen door de mechanismen van vorming en veranderingen in membraaninterdigitaties te bestuderen.