Identificatie van zeldzame antigeenspecifieke T-cellen uit muizenlongen met peptide: belangrijke histocompatibiliteitscomplextetrameren

Ons laboratorium bestudeert de ontwikkeling van CD4 T-cellen in verschillende contexten van tolerantie en immuniteit. In onze projecten zijn we vooral geïnteresseerd in hoe blootstelling aan antigeen de ontwikkeling van fenotypische subsets van T-cellen stimuleert die een immuungeheugen opzetten dat de tolerantie voor zichzelf of de immuniteit tegen ziekteverwekkers kan verbeteren. Onlangs hebben we ons gericht op de ontwikkeling van regulatie- en geheugen-T-celsubsets die zich in longweefsel bevinden.

Deze weefselresidente T-cellen spelen een belangrijke rol bij het versterken van de tolerantie voor zelf-antigenen tijdens weefselbeschadiging, of het bevorderen van ontstekingsreacties op ziekteverwekkers tijdens herinfectie. Ons laboratorium is gespecialiseerd in de directe studie van antigeenspecifieke T-cellen, maar op maat gemaakte peptide MHC-tetrameerreagentia. Dit stelt ons in staat om deze T-cellen te bestuderen zonder het gebruik van TCR-transgene modellen of andere experimentele manipulaties waarvan bekend is dat ze experimentele artefacten veroorzaken.

Hoewel we antigeenspecifieke T-cellen gemakkelijk kunnen identificeren met tetrameren, zijn deze T-cellen vaak aanwezig op zeer lage frequenties, vooral wanneer ze zich in een naïeve of geheugentoestand bevinden. Het is ook een uitdaging om deze T-cellen te isoleren uit niet-lymfoïde weefsels waar ze zich vaak bevinden na een immuunrespons. Hoewel er verschillende gevestigde protocollen zijn voor het isoleren van T-cellen uit muizenlongen, is het protocol dat we hier presenteren geoptimaliseerd voor de daaropvolgende detectie van laagfrequente antigeenspecifieke T-cellen door tetrameerkleuring.

Binnen dit protocol hebben we ook twee opties voor weefselassociatie opgenomen om bibliotheekbronnen beter te accommoderen. Ons protocol zal onderzoekers helpen het gebruik van tetrameren uit te breiden naar antigeenspecifieke T-cellen in longweefsel. Dit zal leiden tot krachtigere in vivo studies van de ontwikkeling en functie van weefselresidente geheugen-T-cellen, onderwerpen die in het veld van groot belang zijn.