Идентификация редких антиген-специфических Т-клеток из легких мышей с помощью пептид:Тетрамеры основного комплекса гистосовместимости

Наша лаборатория изучает развитие CD4 Т-клеток в различных контекстах толерантности и иммунитета. В наших проектах нас в первую очередь интересует, как воздействие антигена стимулирует развитие фенотипических подмножеств Т-клеток, которые устанавливают иммунную память, способную повысить толерантность к себе или иммунитет против патогенов. В последнее время мы сосредоточились на разработке субпопуляций регуляторных Т-клеток и субпопуляций Т-клеток памяти, которые находятся в легочной ткани.

Эти тканевые резидентные Т-клетки играют важную роль в усилении толерантности к аутоантигенам во время повреждения тканей или стимулировании воспалительных реакций на патогены во время повторного заражения. Наша лаборатория специализируется на непосредственном исследовании антиген-специфических Т-клеток, но не на заказе пептидных реагентов тетрамера MHC. Это позволяет нам изучать эти Т-клетки без использования трансгенных моделей TCR или других экспериментальных манипуляций, которые, как известно, вызывают экспериментальные артефакты.

Хотя мы можем легко идентифицировать антиген-специфичные Т-клетки с тетрамеров, эти Т-клетки часто присутствуют на очень низких частотах, особенно когда они находятся в наивном состоянии или состоянии памяти. Кроме того, сложно выделить эти Т-клетки из нелимфоидных тканей, где они часто находятся после иммунного ответа. Несмотря на то, что существует несколько установленных протоколов для выделения Т-клеток из легких мыши, представленный нами протокол был оптимизирован для последующего обнаружения низкочастотных антиген-специфичных Т-клеток путем окрашивания тетрамером.

В этот протокол мы также включили два варианта ассоциации тканей для лучшего размещения библиотечных ресурсов. Наш протокол поможет исследователям расширить использование тетрамеров на антиген-специфические Т-клетки в легочной ткани. Это приведет к более мощным исследованиям in vivo развития и функции Т-клеток памяти резидентов тканей, которые являются темами повышенного интереса в этой области.