فحوصات Neurocircuit عن المضبوطات في المسوخ من الصرع ذبابة الفاكهة

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

ويمكن استخدام التحفيز الكهربائية عالية التردد ، والاستيلاء على غرار النشاط أن يتسبب في

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Howlett, I. C., Tanouye, M. A. Neurocircuit Assays for Seizures in Epilepsy Mutants of Drosophila. J. Vis. Exp. (26), e1121, doi:10.3791/1121 (2009).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

ذبابة الفاكهة السوداء البطن هو أداة مفيدة لدراسة مثل مصادرة النشاط. مجموعة متنوعة من المسوخ التي يمكن أن يتسبب إما عن طريق المضبوطات صدمة جسدية أو التحفيز الكهربائي يتوفر لدراسة مختلف جوانب النشاط الضبط والسلوك. وسوف يطير جميع ، بما في ذلك نوع البرية ، والخضوع لضبط مثل حفز النشاط إذا كان في الجهد بما فيه الكفاية العالية. مصادرة مثل النشاط هو استجابة كل شيء أو لا شيء ، ولكل الوراثي له الاستيلاء على عتبة معينة. ويمكن تغيير عتبة الاستيلاء على النمط الوراثي للذبابة محددة إما عن طريق العلاج مع المخدرات أو عن طريق القمع وراثية أو تعزيزها. يقاس بسهولة عتبة بواسطة الكهربية. يمكن أن يتسبب الاستيلاء على غرار النشاط عبر التحفيز الكهربائية عالية التردد وتسليمها مباشرة الى الدماغ وتسجيلها من خلال عضلات طولية الظهرية (DLMs) في القفص الصدري. ومعصب وDLMs بواسطة جزء من نظام الألياف العملاقة. بدءا من انخفاض الجهد ، والتحفيز التردد العالي ، ورفع في وقت لاحق من الجهد بزيادات صغيرة ، يمكن قياس عتبة الاستيلاء على ذبابة واحدة.

Protocol

عينة التحضير :

في الليلة التي سبقت التجربة ، والذباب الذكور من النمط الجيني المرغوب فيها تخدير ووضعها في قنينة مع المكونات النايلون الناعم. ومن شأن الكرة القطن العمل أيضا. بعد التخدير ، هو الاستيلاء على عتبة تغيير ، لذا من الأفضل تركها الذباب لا يقل عن 6 ساعات ، على الرغم من ليلة مثالية.

في يوم من التجربة ، هي التي شنت على الذباب في وقت واحد على الشرائح الزجاجية بطبقة من الشمع الأسنان على جانب واحد.

يتم اختيار واحد تطير من قبل رئيس باستخدام إبرة قياس 23 (مع طرف حاد قطع) تعلق على خط فراغ.

والملصقة ثم يطير الى الشمع على الشريحة بالضغط على الأرجل والأجنحة في الشمع.

بمجرد يجمد الذبابة ، يتم دفع الشمع حتى حول الرقبة والعينين بالكامل لشل حركة الرأس.

الكهربية :

مجموعة الطاير ، الذي هو الآن ، والتي شنت على استعداد للذهاب يتم وضعها في أعلى الكهربية.

مجموعة الكهربية يتكون من ثلاث مجموعات من micromanipulators ، كل واحد إلى قطبين التنغستن شحذ المرفقة. يتم توفير الجهد من قبل مشجعا التي يتصل بها وحدة العزلة التي تعلق على تحفيز كهربائي. توصيل كهربائي تسجيل إلى ما قبل أمبير الذي بدوره يعلق على الذبذبات التخزين الرقمي. في حين أنه ليس من الضروري ومن المفيد أن يكون المتكلم التوصيل إلى الذبذبات بحيث يمكن جعل الاستجابات مسموعة.

يتم إدخال إلكترود الأرض في بطن الذبابة.

يتم إدراج القطب تسجيل في واحدة من العضلات الطولية الظهرية في القفص الصدري للطيران.

يتم إدراج الأقطاب تحفيز في الرأس. واحد إلى جانب كل عين.

ينبغي أن يكون مشجعا الإعدادات التالية لبدء العمل : بالنبض الفاصل المستمر مع 2 ثانية بين كل نبضة. يجب أن يكون هناك أي تأخير النبض. وينبغي أن يكون العرض نبض 0.2ms.

يجب على الذبذبات وميزة تشغيل وتخزين والإعدادات التالية : ينبغي ضبط الوقت / DIV إلى 1ms/DIV. يجب تعيين فولت / DIV إما 0.1V/DIV أو 50 فولت / DIV.

يتم تحديد عتبة الألياف العملاقة من خلال توفير البقول واحد والحد الأدنى من الجهد مشيرا الى ان المطلوب للحصول على الرد. هذا الجهد هو عادة حوالي 2 V.

مرة واحدة وقد تم تحديد عتبة الألياف العملاقة ، توقف النبض الذبابة وتغيير الإعدادات على الذبذبات ل: 0.2 S / DIV

يجب تغيير الإعدادات على مشجعا ل: يجب تعيين الفاصل الزمني لنبض واحد. وينبغي تشغيل القطار على وتعيين إلى 3 ثوان. المعلمات الموجي هي : 0.5 مللي البقول في 200Hz لمدة 300 مللي ثانية. يتم تغيير الجهد المطلوب لإعداد وتدريب عالية التردد من البقول وتسليمها الى دماغ الذبابة.

إذا لم يتم بفعل نوبة ، وسوف تتبع الذبذبات يظهر خط مستو بعد القطار. إذا تم تعيين بسرعة الإعدادات إلى إعدادات بدء التشغيل ، والبقول واحد يؤدي إلى استجابة في نظام الألياف العملاقة.

إذا كان يشتمل على الحجز ، وسوف تظهر الذبذبات النشاط بعد الاستيلاء مثل القطار. إذا تم ضبط وسرعان ما تحول إلى الإعدادات الأصلية ، سوف تفشل البقول واحدة لتنشيط استجابة في نظام الألياف العملاقة.

الذباب لديها فترة الحرارية بعد wavetrain التحفيز عالية التردد التي لا يمكن ضبطها مثل النشاط يكون محرضا. إذا لم يحدث ضبط الذباب الحرارية لحوالي 7 دقائق. إذا كان يشتمل على الاستيلاء ، والذباب لديها فترة الحرارية حوالي 17 دقيقة.

عند تحديد العتبة ، يمكن تسليمها إضافية عالية التردد المحفزات لنفس الذبابة (بعد الوقت المناسب لفترة الحرارية) حتى يتم تحديد عتبة أو حتى استجابة الألياف العملاقة تصبح ضعيفة جدا لرؤيته.

بعد اكتمال التجربة ، ويتم إزالة يطير من إعداد الكهربية ، أفرج عنه من الشمع ، والتخلص منها.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

وقد أثبت هذا الفيديو الخطوات الأساسية في تحديد عتبة الاستيلاء على ذبابة دروسوفيلا الفردية. بدلا من استخدام الذبذبات الرقمية ، قد أيضا التحويل الرقمي المحوسب استخدامها. هذه التقنية مفيدة لتحديد الآثار المترتبة على المخدرات أو التعديل الوراثي على عتبة الاستيلاء على ذبابة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح البحوث ، ومنحة مؤسسة الصرع ومنحة مؤسسة ماكنايت لتجارب على ذبابة الفاكهة MT ذبابة الفاكهة أجريت وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح التي وضعتها لجنة جامعة كاليفورنيا في بيركلي استخدم الحيوان.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Digital oscilloscope Hitachi VC-6523
Stimulator Cornerstone S-900
Preamplifier World Precision Instruments, Inc. Electro 705
Micromanipulators Narishige International various

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kuebler, D., Tanouye, M. A. Modifications of seizure susceptibility in Drosophila. J Neurophysiol. 83, 998-1009 (2000).
  2. Kuebler, D., Zhang, H., Ren, X., Tanouye, M. A. Genetic suppression of seizure susceptibility in Drosophila. J Neurophysiol. 86, 1211-1225 (2001).
  3. Song, J., Tanouye, M. A. Seizure suppression by shakB2, a gap junction mutation in Drosophila. J Neurophysiol. 95, 627-635 (2006).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics