Fare Adrenal Kromafin Hücre İzolasyonu

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

Adrenal medüller kromafin hücre kültürü sistemleri, in vitro ortamda bir uyarım-salgılanması kaplin çalışması için son derece yararlı. Bu protokol adrenaller incelemek ve sonra Adrenal korteks uzak sıyırma medüller bölgede izole etmek için kullanılan yöntemi göstermektedir. Tek kromafin hücrelerine medulla sindirim sonra gösterilmiştir.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Kolski-Andreaco, A., Cai, H., Currle, D. S., Chandy, K. G., Chow, R. H. Mouse Adrenal Chromaffin Cell Isolation. J. Vis. Exp. (2), e129, doi:10.3791/129 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Adrenal medüller kromafin hücre kültürü sistemleri, in vitro ortamda bir uyarım-salgılanması kaplin çalışması için son derece yararlı. Bu protokol adrenaller incelemek ve sonra Adrenal korteks uzak sıyırma medüller bölgede izole etmek için kullanılan yöntemi göstermektedir. Tek kromafin hücrelerine medulla sindirim sonra gösterilmiştir.

Protocol

Kısaltmalar:
TKK - Adrenal Kromafin Hücreler, E. Soln - Enzim Çözüm, E. DMEM - Zenginleştirilmiş Dulbecco'nun Modifiye Kartal Orta

  1. Hazırlık
    1. E. Soln (40 adet papain / 1 ml E. Soln.) Istenilen miktar papain ekleyin.
    2. Carbogen ile yaklaşık 15 dakika boyunca buz üzerinde papain etkinleştirin. Oxygenate Locke buz tampon olarak.
  2. Diseksiyon
    1. 8-10 hafta fareyi kullanın.
    2. Kaldırmak sindirim önce Locke'un tampon ve buz üzerinde yer oksijenli.
    3. Diseksiyon işlemi için video bakın.
    4. Eksize sonra, yer bezleri Locke'un tampon oksijenli.
  3. Bezinin hazırlanması
    1. Yağ bezi çıkarın.
    2. Bezinin korteks Şeridi'nde.
  4. Enzimatik Sindirim
    1. Steril filtre papain oksijenli.
    2. Petri oksijenli papain dört havuzları olun.
      1. 3 havuzları 100uls ilgili olmalıdır.
      2. Havuzlarının 1 400uls ile ilgili olmalıdır.
    3. Medullae havuzları ile yıkayın
      1. 1. 3 100ul havuzları ile.
      2. Bundan sonra 400ul havuzu ile
      3. Mikrofuge'de tüpe 400ul havuzu Pippette 300ul E. Soln ve medulla adet.
      4. Mikrofuge'de tüp ve yer Qrap parafilm 37 ° C su banyosunda 20 dk.
      5. Papain içeren oksijen kalan E. Soln devam etmeyi unutmayın.
      6. 20 dakika sonra steril filtre E. Soln.
      7. Yeni süzülmüş E. Soln eski E. Soln banyo medullae değiştirin.
  5. Triturations
    1. E. Soln aspire edin ve atın.
    2. 1ml E. DMEM medullae yıkayın.
    3. E. DMEM aspire edin ve atın.
    4. 1ml ucu 300ul E. DMEM ve çiğnemek 20X ekleyin.
    5. 200ul ucu steril bir jiletle kesin.
    6. Kesme 200ul ucu ile 5-10X Karışım.
    7. E. DMEM banyo medullae parçaları atın. Orta enkaz içerecektir.
    8. Adet medullae 300uls taze E. DMEM ekleyin.
    9. 200ul ucu 20x ile Karışım
    10. Pippette E. DMEM tüp withough medullae adet mikrofuge'de. Orta ücretsiz TKK içerecektir.
    11. Adet medullae 300uls taze E. DMEM ekleyin.
    12. 23.5 göstergesi şırınga iğnesi 20x medullae Karışım.
    13. E. hem triturations DMEM birleştirin. Medullae parçaları olmamalı ve şimdi bir kuş tüyü bir görünüme sahip olmalıdır.
  6. Kaplama
    1. 3.7g s 2.5 dakika için son iki öğütme adımları mikrofuge'de E. DMEM
    2. 50uls-200 E. DMEM sonraki deneyler bağlı olarak yeniden süspanse pelet.
    3. Plaka, bir cam lamel 10-30uls.
    4. Uymaları hücreleri için 15 dakika bekleyin.
    5. E. DMEM 750uls ekleyin.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Comments

3 Comments

  1. Excellent!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 27, 2007 - 11:27 AM
  2. Nice and clear video! What is the reason that the Locke's has to be oxygenated? In 4.1 you talk about oxygenated papain, dŒ you mean here (and in other points) carbonated? Can the E. Soln also be buffered with Hepes, why dŒs it has to be carbonated? Thanks in advance!   Cheers, Tony

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 12, 2008 - 8:24 AM
  3. I would like appreciated receiving the protocols to obtain adrenal chromaphin cells

    Reply
    Posted by: Asunción C.
    April 29, 2013 - 9:48 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics