التصوير داخل ستينت عودة التضيق : غير مكلفة ، الموديل ما قبل السريرية موثوقة ، ورابيد

Biology
 

Summary

هذا الفيديو يوضح كيفية استخدام نموذج ما قبل السريرية غير مكلفة ويمكن الاعتماد عليها لدراسة العمليات الفيزيولوجية المرضية pathobiological والتنمية في وعودة التضيق الدعامة. وتتجلى أيضا في رصد فيفو طولية باستخدام أكتوبر (التصوير المقطعي بالاتساق البصرية) ، وتحليل الصور أكتوبر

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Deuse, T., Ikeno, F., Robbins, R. C., Schrepfer, S. Imaging In-Stent Restenosis: An Inexpensive, Reliable, and Rapid Preclinical Model. J. Vis. Exp. (31), e1346, doi:10.3791/1346 (2009).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

نماذج من عودة التضيق قبل السريرية ضرورية لكشف العمليات الفيزيولوجية المرضية التي تؤدي إلى عودة التضيق في والدعامة لتحسين والحالية والمستقبلية من المخدرات يبلغ حجمه الدعامات.

مجموعة متنوعة من الأجسام المضادة والسلالات المعدلة وراثيا وخروج المغلوب متوفرة في الفئران. وبالتالي ، سيكون نموذجا لعودة التضيق في والدعامة في الفئران أن تكون مريحة للدراسات pathobiological والفيزيولوجية المرضية.

في هذا الفيديو ، نقدم الإجراء الكامل وحفرة يقع نموذج الفئران دعامة مناسبة للبحوث عالية الدعامة الإنتاجية. وسوف نعرض لعملية جراحية لنشر الدعامات ، وتقييم في وعودة التضيق الدعامة باستخدام تقنية أكثر أناقة من أكتوبر (التصوير المقطعي بالاتساق البصرية). توفر هذه التقنية دقة عالية في تقييم الاتفاقات الشاملة الخاصة بالضمانات وحة (مناطق المقطع العرضي) ، ويرتبط بشكل جيد مع المقاطع النسيجية ، والتي تتطلب وقتا طويلا خاصة وتضمين sectioning التقنيات. أكتوبر التصوير يسمح مزيد من الرصد الطولي للتنمية في وعودة التضيق الدعامة داخل نفس الحيوان مقابل مرة واحدة لقطات باستخدام الأنسجة.

Protocol

ستينت النشر الأبهر

  1. يتم شراؤها من الذكور سبراغ داولي الفئران وزنها 550-600 غرام من هارلان (انديانابوليس ، IN ، الولايات المتحدة). الفئران منزل في ظل الظروف التقليدية ، وتغذية الفئران القياسية طعام وماء بالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية.
  2. تخدير الفئران مع isoflurane (2 ٪) ، والكيتامين (25 ملغ / كلغ). عرض تحت المجهرية ، وسيطة إجراء العلوي مصغرة البطن لفضح infrarenal الأبهر.
  3. تشريح الشريان الأورطي البطني من الأنسجة المحيطة بها ، من مستوى شرايين الكلى وصولا الى التشعب. تنبيه : لا حاجة لتشريح الشريان الأورطي من IVC.
  4. استخدام microclamps لوقف تدفق الدم الأبهري. ضع المشبك القريبة الأولى ، تليها المشبك القاصي.
  5. فتح الشريان الأورطي مع شق عرضية الصغيرة وتدفق الأبهر مع الهيبارين (200 وحدة).
  6. والمعراة البطانة الأبهر مع مرور قسطرة فوغارتي 2 - الفرنسية استئصال الصمة الشريانية (باكستر للرعاية الصحية ، ديرفيلد ، IL ، الولايات المتحدة).
  7. استخدام أي حجم الدعامات بين الإنسان و8MM 12mm في طولها ، و2.5mm - 3mm في القطر. تنبيه : ينبغي أن قطر الدعامة لا يتجاوز قطرها السفينة بأكثر من 10 ٪ لتجنب ضيق قبل وبعد دعامات. تنبيه : لا تستخدم طول الدعامات داخل نفس الدراسة.
  8. نشر الدعامة باستخدام بالون الضغط المناسبة لتحقيق القطر المطلوب.
  9. إغلاق الأبهر شق صغير مع الغرز Prolene 9-0 (Ethicon ، Norderstedt ، ألمانيا).
  10. إغلاق شق البطن في طبقات مع الغرز Vicryl 4-0 تشغيل (Ethicon ، Norderstedt ، ألمانيا).
    وينبغي أن تزال الغرز الجلد يمكن إزالتها في غضون 7-14 أيام حتى عندما يتم استخدام Viacryl.
  11. تلقى الحيوانات كاربروفين (6mg/KG) intraoperatively وMetamizol لمدة 7 ايام في مياه الشرب.

البصرية بالاتساق التصوير المقطعي (أكتوبر) التصوير

ويتم الحصول على الصور أكتوبر مع نظام التصوير M2 أكتوبر (LightLab التصوير ، وشركة ، ويستفورد ، MA ، الولايات المتحدة). ImageWire هو مسبار التصوير لإيصال الضوء إلى النسيج وتجميع الإشارات. ويتكون من 0،006 ImageWire "(0.15 ملم) الألياف البصرية الأساسية ، داخل غمد مع OD الأقصى من 0.019" (0.48 ملم).

  1. تخدير الفئران مع isoflurane (2 ٪) ، والكيتامين (25 ملغ / كلغ). عرض تحت المجهرية ، تنفيذ إعادة فتح البطن وسيطة لفضح infrarenal الأبهر.
  2. المشبك الشريان الأورطي والداني على حد سواء الشريان الحرقفي.
  3. إجراء بضع الشريان عرضية في نهاية البعيدة من الشريان الأورطي ، مع تدفق 1ml PBS باستخدام القسطرة 28G وتضاف قسطرة أكتوبر وتحيله إلى الشريان الأورطي.
  4. يتم تنفيذ آلية انسحاب أكتوبر التصوير بمعدل تراجع قدره 1.0 ملم في الثانية.
  5. الحصول على صور في 15 لقطة في الثانية الواحدة ، ويتم عرض الصور مع جدول ننظر متابعة الألوان وأرشفتها رقميا.
  6. إغلاق بضع الشريان.
  7. إغلاق الشقوق والبطن مع الغرز Vicryl 4-0 تشغيل (Ethicon ، Norderstedt ، ألمانيا).
    وينبغي أن تزال الغرز الجلد يمكن إزالتها في غضون 7-14 أيام حتى عندما يتم استخدام Viacryl.
  8. سيتم تشكيل neointima تطوير الأقصى في غضون 6 أسابيع بعد زرع الدعامة.

تحليل الصور أكتوبر

يتم إجراء قياسات أكتوبر باستخدام برنامج LightLab التصوير أكتوبر الملكية مع واجهة الفئران مقرا لها.

  1. معايرة نظام لانعكاس السلك التصوير أكتوبر ، والذي هو تقنية المعايرة القياسية لهذا النظام.
  2. تتبع التجويف والدعامات المناطق المقطعية (CSA) يدويا في كل فترات مم 1.0.
  3. حساب مساحة اللوحة مقطعية وكالة الفضاء الكندية الدعامة مطروح من وكالة الفضاء الكندية التجويف. حساب مساحة اللوحة في المئة كما CSA اللوحة مقسومة CSA الدعامات (٪). حساب متوسط ​​المناطق اللوحة في المئة.

المصادقة على تقنية أكتوبر

النتائج أكتوبر ترتبط بشكل جيد مع الأنسجة (الشكل 1). وتحسب لوحة نسيجية الاتفاقات الشاملة الخاصة بالضمانات على النحو المبين أعلاه. تضخم الأنسجة يكشف باطنة مع كثافة عالية من خلايا مغزلية الشكل وسوى عدد قليل من الخلايا التهاب وحيدات النوى. بعد 6 اسابيع ، يتم تغطيتها بالكامل مع الدعامات النسيج الحبيبي neointimal وكالة الفضاء الكندية لوحة التدابير 1.3 ± 0.4 مم 2 في الدعامات 2.5mm.


الشكل 1 : أكتوبر (A) والنسيجية (B ؛ التكبير 16X) صورا لدعامات 6 أسابيع بعد النشر. النتائج التي تم الحصول عليها من وكالة الفضاء الكندية لوحة الصور أكتوبر ترتبط بشكل جيد مع الأنسجة. الرجاء انقر هنا لرؤية نسخة أكبر من الرقم 1.

Discussion

على الرغم من أن الشريان الحرقفي الأرانب والخنازير نماذج الشريان التاجي هي الأكثر استخداما لوضع الدعامة 1 ، وهو مزيج من الإشعاعية والمعدات الجراحية اللازمة ، وتقتصر قدرة الحيوان السكن ، وتكاليف شراء مرتفعة. القيود المفروضة على نموذج الفأر هو استخدام الدعامات اللازمة من الدعامات التي صممت خصيصا للفئران ، ونسبة المعادن إلى الشريان مما أدى إلى إصابة أكثر من الأوعية الدموية 2 ، وحدوث ارتفاع مصطنع للتخثر 3.

نموذج الدعامات الفئران هي بسيطة وغير مكلفة وسريعة ودقيقة 4 نموذج ما قبل السريرية. بعد التقرير الأولي المقدم من الدعامات مباشرة من الشريان الأبهر الفئران التي لوي وآخرون تم 5 ، والجدوى ومدى ملاءمتها لهذا النموذج لتقييم الفيزيولوجيا المرضية من داخل الدعامات بدقة 5،6 أظهرت عودة التضيق. قطر الشريان الأورطي الفئران غير كافية للسماح بتوسيع الدعامات المتاحة تجاريا دون انقطاع من بنية السفينة فيزيولوجي. وقد تبين أن الآليات الفيزيولوجية المرضية ، مثل تكوين خثرة ، والالتهابات ، وانتشار SMC ، وتطوير هذه النماذج في الفئران كما يفعلون في الأرنب والخنزير. ولذلك ، فإن هذه النماذج هي تمثيل جيد من العملية الفعلية لعودة التضيق.

التكنولوجيا أكتوبر التصوير ذات الدقة العالية من المفيد تقييم تضخم باطنة. عمق الاختراق هو فقط 1،5-2 ملم ، ولكن قراره هو أمر من حجم أكبر من أن الموجات فوق الصوتية داخل الأوعية (IVUS) 7،8. دراسات متعددة مقارنة مع أكتوبر IVUS الاستنتاج بأن أكتوبر هو الأسلوب المفضل لتقييم تضخم neointimal بعد زرع الدعامة 80-10. وخاصة في الحيوانات الصغيرة بأقطار السفينة الصغيرة ، وارتفاع القرار من أكتوبر يجعلها أفضل طريقة التصوير لتقييم عودة التضيق.

باختصار ، يظهر أن هذا الفيديو (1) الفئران الدعامات الأبهر ممكنا بسهولة ، (2) الدعامات الفئران الشريان الأورطي البطني هو مناسبة لاختبار الدعامات المصنعة تجاريا و (3) أكتوبر التصوير هو أسلوب دقيق وأنيق لرصد طولية من الدعامات في عودة التضيق.

Disclosures

وتم إيواء جميع الفئران في الحيوان مرفق الرعاية في مركز جامعة ستانفورد الطبي (ستانفورد ، كاليفورنيا) ، تحت درجة حرارة قياسية ، والرطوبة ، وظروف الإضاءة ، وقدمت طعام الجرذان والمياه بالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية. التحقيق يتفق مع دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية التي نشرها المعهد الوطني الأميركي للصحة (NIH المنشور رقم 85-23 ، المعدل عام 1996). تمت الموافقة على بروتوكول الدراسة من جانب الفريق الإداري للرعاية الحيوان المعملية ، جامعة ستانفورد.

Acknowledgements

التمويل
وأيد هذه الدراسة من قبل صندوق البحوث فولك لقسم جراحة القلب في جامعة ستانفورد مدرسة الطب في جامعة ستانفورد ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية. وقد تم تمويل توبياس Deuse من منحة بحثية لجمعية القلب الألمانية. وقد تلقى سونيا Schrepfer منحة بحثية من جمعية الألمانية للبحوث (DFG) (SCHR992/2-1).

References

  1. Langeveld, B., Roks, A. J. M. Commentary: rat restenosis models: means for thorough restenosis research. Journal of endovascular therapy. 12, (3), 343-345 (2005).
  2. Roguin, A., Grenadier, E. Stent-based percutaneous coronary interventions in small coronary arteries. Acute Card Care. 8, 70-74 (2006).
  3. Post, M. J., Waltenberger, J. Small Is Beautiful: A Miniature Stent Model. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 27, 701-702 (2007).
  4. Langeveld, B., Roks, A. J. M., Tio, R. A., Boven, A. J. van, Want, J. J. L. vander, Henning, R. H. Rat abdominal aorta stenting: a new and reliable small animal model for in-stent restenosis. Journal of vascular research. 41, (5), 377-386 (2004).
  5. Lowe, H. C., Chesterman, C. N., Khachigian, L. M. Rat aortic stenting: toward a simple model of in-stent restenosis. The American journal of cardiology. 88, (6), 720-721 (2001).
  6. Groenewegen, R., Harst, R. vander, Roks, R., Buikema, R., Zijlstra, R., Gilst, R. van Effects of angiotensin II and angiotensin II type 1 receptor blockade on neointimal formation after stent implantation. International Journal of Cardiology. (2007).
  7. de Smet, B. J. G. L., Zijlstra, F. A look at drug eluting stents with optical coherence tomography. European Heart Journal. 28, (8), 918-919 (2007).
  8. Pinto, T. L., Waksman, R. Clinical applications of optical coherence tomography. Journal of interventional cardiology. 19, (6), 566-573 (2006).
  9. Matsumoto, D., Shite, J., Shinke, T., Otake, H., Tanino, Y., Ogasawara, D. Neointimal coverage of sirolimus-eluting stents at 6-month follow-up: evaluated by optical coherence tomography. European Heart Journal. 28, (8), 961-967 (2007).
  10. Kawase, Y., Suzuki, Y., Ikeno, F., Yoneyama, R., Hoshino, K., Ly, H. Q. Comparison of nonuniform rotational distortion between mechanical IVUS and OCT using a phantom model. Ultrasound in medicine & biology. 33, (1), 67-73 (2007).

Comments

3 Comments

  1. I would like to use the picture of histology in a publication and would like Dr. Deuse's permission

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 25, 2011 - 6:24 PM
  2. This decision has to be made by JoVe. Please contact the journal to discuss with them the copyrights. As author, we would be happy to supply you with the picture (when using the correct citation) - however, the permission by the journal needs to be obtained first. Thank you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 28, 2011 - 2:00 PM
  3. We are OK if you use a figure from this article for your work. Please make sure you correctly cite the original JoVE article.

    Moshe Pritsker
    Editor-in-Chief
    JoVE

    Reply
    Posted by: Moshe P.
    September 28, 2011 - 2:06 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics