ثقافة العصبية الماوس السلائف الخلايا الجذعية

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

هذا الفيديو يصف الطريقة المستخدمة لعزل neuroprecursors من القشرة النامية من الفئران الجنينية. ويرد الإجراء لإزالة الأجنة من الرحم ، وتشريح الانسجة القشرية ، وهضم القشرة الدماغية المعزولة.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Currle, D. S., Hu, J. S., Kolski-Andreaco, A., Monuki, E. S. Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors. J. Vis. Exp. (2), e152, doi:10.3791/152 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

الخلايا الجذعية العصبية الأولية الثقافات مفيدة لدراسة الآليات الكامنة وراء تطور الجهاز العصبي المركزي. أبحاث الخلايا الجذعية سوف تزيد فهمنا للنظام العصبي ويمكن أن تسمح لنا لتطوير علاجات لأمراض الدماغ المستعصية حاليا وقوع اصابات. وبالإضافة إلى ذلك ، يمكن استخدام الخلايا الجذعية لأبحاث الخلايا الجذعية التي تهدف إلى دراسة مفصلة لآليات التمايز والعصبية transdifferentiation والاشارات الوراثية والبيئية التي توجه تخصص الخلايا في أنواع الخلايا معين. هذا الفيديو يوضح التقنية المستخدمة لتصنيف الخلايا من أجنة اليوم 12.5 الماوس الدماغ الأمامي الظهري. الإجراء يشمل حصاد تشريح أجنة الفئران E12.5 من الرحم ، وإزالة "الجلد" مع غرامة ملقط تشريح وأخيرا عزل قطعة من قشرة الدماغ. بعد التشريح ، يتم هضمها والأنسجة وفصلها آليا. ثم يتم استزراع الخلايا تنفصل معلق في وسائل الاعلام "الخلايا الجذعية" التي تحبذ نمو الخلايا الجذعية العصبية.

Protocol

  1. وقد تم عزل السلائف الماوس العصبي (الشخصيات) من القشرة E12.5 الجنين.
  2. تمت إزالة طبقات الجلد والوسيطة من حويصلات الدماغ الانتهائي تشريح.
  3. وحضنت الحويصلات في التربسين 0.05 ٪ مع EDTA 0.02 ٪ وبنسبة 0.2 ٪ في جيش صرب البوسنة لمدة 20 دقيقة HBSS عند 37 درجة مئوية.
  4. أوقف Trypsinization بواسطة حجم مساو من 1 ملغ / مل فول الصويا مثبط التربسين (سيغما # T6522) في HBSS.
  5. الأنسجة ويساعد على هضم فصلها باستخدام عدة جولات من سحن مع ماصات باستور النار المصقول.
  6. وجرفت المياه خلايا مرة واحدة مع جيش صرب البوسنة 0.2 ٪ في HBSS ومطلي على 50000 خلية / مل على laminin المغلفة coverslips في وسائل الإعلام مع 20 نانوغرام / EGF مل و 10 نانوغرام / مل FGF2 (R & D أنظمة أو Peprotech) ، و 2 ميكروغرام / مل الهيبارين ( سيغما).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

وقد تم إحراز تقدم كبير في فهمنا للتنمية الجهاز العصبي المركزي وبيولوجيا الخلايا الجذعية بفضل قدرتنا على الحصاد ، عزل والثقافة الخلايا الجنينية الجذعية العصبية. هذا الفيديو يوضح تشريح القشرة الدماغية E12.5 الماوس وتفصيل لاحق وزراعة الخلايا الجذعية الجنينية من العصبية. وقد الأخرى أساليب أخرى كثيرة مماثلة استخدمت بنجاح من قبل باحثين آخرين.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Straight Iris Scissors Tool Fine Science Tools 14060-11
Medium Scissors Tool Fine Science Tools 15024-10
Micro Scissors Tool Fine Science Tools 15002-08
Bent Forceps Tool Fine Science Tools 11251-35

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation. Development. 132, (15), 3549-3559 (2005).
  2. Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).

Comments

3 Comments

  1. There are lots of mistakes about working in a steril conditions, the cap of the bottles should be plased upsode down.  No good lab practoce !

    Reply
    Posted by: Maryam M.
    April 20, 2009 - 2:31 PM
  2. Thanks, but no contamination in 6 years.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 20, 2009 - 4:34 PM
  3. I think it would be better to say "Culture of Mouse neural Stem (precursor) cells". You can not use both stem and precursor terms together.

    Reply
    Posted by: Hassan A.
    July 13, 2010 - 9:25 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics