Препарирование 6,5 Эмбрионы DPC мышь

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Выделение постимплантационных стадии эмбрионов позволяет исследовать геном структурирования и анализа клеточных линии процессах принятия решений во время эмбрионального развития, но надлежащего вскрытия раннего эмбриона может оказаться непростой задачей. Этот протокол описывает метод выделения ранних примитивных-штрих стадии эмбрионов (~ 6,5 дней после coitum [DPC]).

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Shea, K., Geijsen, N. Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos. J. Vis. Exp. (2), e160, doi:10.3791/160 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Анализ моделей экспрессии генов на ранних стадиях эмбрионального развития млекопитающих может предоставить важную информацию о функции гена, межклеточных взаимодействий и сигнальных механизмов, которыми руководствуются эмбриональных кучность стрельбы. Тем не менее, рассечение эмбриона мыши с децидуальной вскоре после имплантации может быть сложной процедурой, а также подробные шаг за шагом документации этого процесса отсутствует.

Здесь показано, как после имплантации (6,5 DPC) эмбрионы выделяли первых рассекает матку беременных мышей (обнаружение вагинальные плагин был назначен день 0,5 poist coitum), а затем рассекает эмбриона от материнского децидуальной. Рассечение мембраны Reichert это описано, а также удаление ectoplacental конуса.

Protocol

Препарирование репродуктивных органов у женщин мыши

  1. Беременных животных усыпляют СО 2 удушение с помощью сжатого газа.
  2. Положите животное на спине на абсорбирующую прокладку и положите его в 70% этанола, чтобы уменьшить риск загрязнения вскрытия с помощью мыши волос.
  3. Сожмите кожу и сделать небольшой боковой разрез на средней линии с регулярными хирургические ножницы. Держите кожу твердо выше и ниже разреза и потяните кожу в разные стороны в сторону головой и хвостом, чтобы разоблачить живота.
  4. Возьмитесь брюшины щипцами и сократить, чтобы разоблачить брюшной полости.
  5. Найдите репродуктивных органов в грудном отделе полости тела: два рога матки, маточных труб и яичников.

Примитивные подряд стадии (6,5 DPC) Препарирование

  1. Удалить рога матки, держа матки ниже яйцевода и разрезать его свободным вдоль mesometrium. Место расчлененный матки в ледяной PBS.

    Рисунок 1

    Рисунок 1

  2. Отдельные каждого эмбриона, сокращая между имплантации участков вдоль рога матки.

    Рисунок 2

    Рисунок 2


  3. Возьмитесь мышечной оболочки матки, сдвинув пинцетом часовщика в период с окружающим слоем мышц и тканей децидуальной окутан. Пил назад мышечного слоя, обнажая децидуальной.

    Рисунок 3

    Рисунок 3

  4. Клип от части обнаженной децидуальной на вершине (примерно 1 / 5 часть децидуальной ткани), которая подвергнет midventral или дистального кончика заключен зародыш.

    Рисунок 4

    Рисунок 4

  5. Эмбриона могут быть обстреляны с помощью кончиков пинцета. Пирс децидуальной щипцами окружающих эмбрион и открытые щипцы рвать децидуальной друг от друга.

    Рисунок 5

    Рисунок 5

  6. Как только эмбрион удаляется, мембранные Reichart может все еще быть прикреплен, а также конус ectoplacental (трофобласта). Эмбриона можно разрезать дальнейшего тщательного вскрытия.

    Рисунок 6
    Рисунок 6

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Постимплантационных у мышей происходит между 4,5 DPC и рождения. Это рассечение метод может быть применен, по существу, как описано, чтобы изолировать раньше или поздней стадии эмбрионов на 5.5-8.5 DPC.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Micro Dissecting Forceps serrated, straight Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5130 2 pairs
Micro Dissecting Tweezers Pattern #55 INOX Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5010 2 pairs
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (1X) Reagent Invitrogen 14190
Fisherbrand Sterile Polysytrene Petri Dish Tool Fisher Scientific 08-757-12
4% Paraformaldehyde in PBS Reagent
Straight Sharp-Pointed Dissecting Scissors Tool Fisher Scientific 08-940
Pregnant female mice Animal
Dissecting Microscope Microscope

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Nagy, A., et al. Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. (2003).

Comments

6 Comments

  1. How you set the exactly time of embryos stage?
    thanks.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 6, 2008 - 12:47 PM
  2. One option for obtaining pre-implantation embryos is to set up natural matings.  To set up matings, females (6 weeks to 4 months of age) are placed with males (one or two females in each cage with one male) overnight.  The morning after mating, the females can be checked for the presence of a copulation plug in the vagina.  The presence of the vaginal plug indicates that the mating occured, but it dŒs not always mean that a pregnancy will result.  The convention for timed pregnancy assumes that fertilization takes place around midnight during a 7pm to 5am dark cycle, then at noon on the following day (i.e., the day on which the vaginal plug is found), the embryos are aged "0.5 dpc (days post coitum)".  At noon on the next day, the embryos are 1.5 dpc, and so on. It is important to check for plugs early in the morning because they fall out or are no longer detectable ~1² hours after mating, or sometimes earlier.  It is important to note that embryos within a litter can vary with regard to stage of development.  Therefore, morphological criteria are used when more precise embryo staging is required such as the "Theiler Staging Criteria for Mouse Embryonic Development". 

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 19, 2008 - 7:59 PM
  3. I just want to thank you for posting this video, it was extremely useful.  I am a high school student in Wisconsin and I am doing research in stem cells and I'm trying to perfect my dissection method.  I love learning new methods and new information on this subject.  Thank you again. Sara

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 6, 2008 - 6:35 PM
  4. HI! How do you dissect the embryo out of Reichardt's membrane and ectoplacental cone (passage Fig 6A to B)? Thanks - Delphine

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 19, 2009 - 11:36 AM
  5. Do you know if there are any workshops for isolating e5-e9 mouse embryos? You're video was very helpful.

    Reply
    Posted by: Monika L.
    January 14, 2010 - 6:12 PM
  6. I have the same question. How do you dissect the embryo out of Reichardt's membrane and ectoplacental cone (passage Fig 6A to B)? Are their any tricks? Thanks

    Reply
    Posted by: Zhuoqing F.
    December 27, 2012 - 5:34 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics