Dextran의 황산 나트륨 (DSS)를 사용 Murine 대장염 모델링

Biology

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Summary

식수에서 실시 Dextran 황산 나트륨 (DSS)은 급성 대장염의 설립 murine 염증성 손상 모델입니다. 이 프로토콜은 DSS 치료와 조직의 준비를 위해 방법을 설명합니다.

Cite this Article

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Whittem, C. G., Williams, A. D., Williams, C. S. Murine Colitis Modeling using Dextran Sulfate Sodium (DSS). J. Vis. Exp. (35), e1652, doi:10.3791/1652 (2010).

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Abstract

- Crohn의 대장염 궤양성 대장염 특히 및 Crohn의 질병의 colonic 변종, 대장염은 바이러스 또는 박테리아 감염, 허혈성 모욕, 또는자가 면역 질환에서 발생할 수 있습니다. 급성 대장염은 복부 통증과 팽창, 흡수 장애, 설사, hematochezia 및 배설물에 점액과 함께 제공됩니다. 우리는 환경, 유전 및 대장염의 염증성 장 질환과 동물 모델에서 상피 장벽 부전이 질병의 우리의 이해를 발전에 필수되었습니다 사이의 복잡한 상호 작용을 이해하기 시작하고 있습니다. 하나의 인기있는 모델은 몇 일 지속 상피 손상과 콜론의 강력한 염증 반응의 결과로, 낮은 분자량 Dextran 나트륨 황산 (DSS)와 생쥐의 식수를 보충 포함

Protocol

1 부 : 상해 - 복구 대장염 모델

  1. 기준 무게 DSS 치료를 시작하기 전에 각각의 마우스에 대한 취득해야합니다.
  2. 3 % (W / V) Dextran의 황산 나트륨 소금물에 솔루션과 0.45 μm의의 셀룰로스 아세테이트 필터와 필터를 확인하십시오.
  3. 나흘 동안 3 % DSS 솔루션 마우스 케이지에서 식수를 교체합니다. 쥐를 물의 다른 소스 (자동 급수 시스템에 위치 즉, 제외 팁)에 액세스할 수 없습니다.
  4. 일 4 층에 일부 colonic 상피 복구를 허용, 추가로 3 일 동안 물을 DSS 솔루션을 대체합니다. 생쥐는 대장염의 체계적 결과를 계량하기 위해 일 넷 무게해야합니다. 체중 감소는 심각한 부상 일반적입니다.
  5. 일 7, 무게 및 생쥐를 희생. 마우스가 isoflurane, 또는 institutionally 상대방의 inhalational 과용으로 euthanized 수 IACUC이 방법을 승인했다.

2 부 : 검시와 콜론의 착취

  1. 복부에 가리지 액세스를 보장하기 위해 마우스 및 보안 다리 복부 측면을 폭로. 70 % 에탄올로 완전히 복부가 젖었어.
  2. 티슈 포셉와 복부의 정중선을 파악하고 tenting 피부를 따라서 위쪽으로 연장. 따라서 복부 내용을 노출 복부를 절개하는 미세 밀고 가위를 사용합니다. 정중선에서 xyphoid 과정의 끝에으로 절개를 확장하고 양자 늑골 여백의 하부 측면 따라 연장.
  3. 소장, 맹장 및 결장을 식별합니다. 신중하게 해부하다 / 주변 장간막에서 콜론을 괴롭혀. 말초 콜론과 직장을 무료로 골반 깊은 콜론을 가로로 쪼개다. 근위 대장을 무료로 colonocecal 여백에 콜론을 가로로 쪼개다. 케어는 천공이 발생하는 경우에는 콜론이 문제가 될 청소로 콜론을 손상하지 않도록이 과정에서 촬영해야합니다.
  4. 20G 먹이를 바늘과 10 ML의 주사기를 사용 intubate 및 eluate가 대변을 완전히 명확 때까지 얼음처럼 차가운 PBS로 콜론을 플러시.
  5. 해부 현미경으로 매크로 분석 원하는 경우이 시점에서, 콜론은 "소시지"으로 해결할 수 있습니다. histologic 분석은 4 "급성 대장염의 Histological 분석을 위해 스위스 롤스 만들기"부분으로 진행보다 원하는 경우.

3 부 : 전체 대장의 매크로 해석에 대해 "소시지"으로 처리

  1. 그것은 콜론의 올바른 방향을 유지하는 것이 중요하다, 따라서, 운영자에 가장 가까운 콜론의 말초 끝을 유지. 비 흡수성 봉합사 두 조각 (SP116 1.5 통계 꼰 실크), 길이 한 약 1 인치, 다른 2인치 컷.
  2. 여전히 좋은 도장을 유지하면서 가능한 한 여백에 가까운 말초 끝을 묶을 봉합의 2 인치 조각을 사용합니다.
  3. 10 % 5 ML을 포함 20G 먹이 바늘은 결장의 근위 끝에 포르말린 인산염을 버퍼 플레이스. 대충 먹이 바늘의 전구 즉시 근위 봉합의 나머지 부분을 묶어. 먹이 바늘의 전구에 단단히 콜론을 파악하고 콜론이 확장 때까지 포르말린 달이다. 당신은 따라서 "소시지"으로 주입 확장 콜론을두고, 먹이를 바늘을 철회로 봉합에 매듭을 조인다.
  4. 10 % 포르말린 인산염을 버퍼와 튜브에 콜론을 장소와 15 ML 원뿔 튜브를 입력합니다. 24 시간 동안 수정.
  5. 포르말린을 붓고 및 추가 24에 대한 70 % EtOH로 바꿉니다. (콜론은 상온에서 무한정 70 % EtOH에 저장할 수 있습니다.)
  6. 원뿔 관에서 콜론을 제거하고 대장을 손상하지 않도록주의하고, 메스 각 끝에있는 문자열을 잘라. 말초 끝이 문자열의 가장 긴 부분을했다는 것을 기억 하여라. 그것은 긴 시트를 형성 있도록 결장의 근위 끝에 말초에서 길이 방향 컷. 이 시점에서 콜론은 해부 현미경으로 볼 수 있습니다.

4 부 : 급성 대장염의 Histological 분석을 위해 스위스 롤스 만들기

  1. 그것은 콜론의 올바른 방향을 유지하는 것이 중요하다, 따라서, 운영자에 가장 가까운 콜론의 말초 끝을 유지.
  2. 콜론의 길이를 측정합니다. 이 통계는 부상의 심각도의 또 다른 지표이다. 대장염은 부종을 증가 시키며, 전체 대장의 길이를 단축.
  3. 세부적으로 밀고 가위를 사용하여 콜론의 근위 끝에 말초에서 길이 방향 절개. 따라서 평면 시트로 콜론을 표시 절개 중 가장자리를 파악하고 distally -> proximally 길을 작업을 옆으로 열어 좋은 밀고 집게를 사용하십시오.
  4. 콜론 롤링 것은 포셉 한 켤레, 두 손으로 기술을 필요로합니다. 포셉와 말초 여백 중 하나 가장자리를 파악. 순차적으로 근위 여백을 진행 포셉를 회전하고 공개하여 콜론을 롤로 진행합니다. 따라서 3 차원 또는 "스위스 롤"로 나선형을 생성.압연 양식을 유지하려면, 집게로 단단히 롤을 파악하고 27G1 / 2 바늘로 그것을 가로로 쪼개다. 그것이 출구 롤로 바늘을 절곡하여 바늘을 고정합니다.
  5. 10 % 병에 적절하게 표시 조직 카세트과 장소에 롤 장소는 조직 고정을 위해 24 시간을위한 상온에서 포르말린 인산염을 버퍼.
  6. 포르말린을 붓고 및 추가 24에 대한 70 % EtOH로 바꿉니다. (콜론은 상온에서 무한정 70 % EtOH에 저장할 수 있습니다.)
  7. 샘플가 해결되면, 그것은 파라핀 - 임베디드, sectioned 및 histologic 분석을위한 슬라이드에 장착할 수 있습니다.

제 5 부 : 대표 결과

급성 대장염에 대한 DSS 모델은 연구자가 얻을 수정, 그 모델 급성 대장염 콜론을 분석할 수 있습니다. (그림 1) 정상적으로 압연하는 경우 스위스 롤을 절단하고 장착하면, 그것은 전체 결장의 대표 슬라이스를 형성한다. 장착 롤은 말초 (내부) 끝에서 근위 (외부) 끝 (그림 2), 콜론 손상의 범위를 결정하기 위해 H & E 물들일 수 있습니다. Immunohistochemistry 또한 염증성 infiltrates를 파악하고 계량하는 스위스 롤을 수행할 수 있습니다. 소시지 방법이 올바르게 수행되고있다면, 고정 콜론이 확대되고 전체 점막 표면이 쉽게 해부 현미경 (그림 3)에서 조작하고 볼 수 있습니다.

그림 1
그림 1. 적절한 실행 "스위스 롤". (A) 콜론은 근위 끝에 말초에서 굴러 바늘로 가로와 바늘의 끝을 굽힘에 의해 보안됩니다. 그것은 다음 고정을위한 조직 카세트에 배치됩니다. (B) H & E는 DSS (D = 말초 콜론 P = 근위 대장)를 취급 마우스 콜론 만든 스위스 롤 5 μm의 부분을 얼룩.

그림 2
그림 2. DSS 취급 콜론은 급성 대장염의 흔적을 보여줍니다. 염증과 토굴 손상이 물 처리 제어에 비해 DSS - 처리 대장에 분명 있습니다.

그림 3
그림 3. "소시지"의 예. 소시지는 포르말린과 함께 주입하고 완전하게 확대했습니다. 약간의 각도는 결장의 자연 굴절률이 존재 보조 것입니다. 열린 소시지가 평평 거짓말을한다.

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Discussion

이 프로토콜은 급성 부상, 부상 - 수리, 또는 만성 colonic 부상 프로세스를 모델로 수정할 수 있습니다.

급성 상해 변경 :

즉각적인 희생 뒤에 4~6일에 대한 DSS 처리 광고 lib과

상해 - 수리 수정 :

3-4일과 희생의 복구 기간 (위의 프로토콜에서 설명) 다음 DSS 치료 4-6일로 부상.

만성 대장염의 변경 :

생쥐는 각 사이클 사이에 회복 명이나 일 3 % DSS의 세 5 일주기에 게재됩니다. 생쥐는 마지막 16 일 휴식 기간 이후에 희생됩니다.

연구자들은이 모델로 인식하고 있어야 할 몇 가지 문제가 있습니다 :

  1. 부상 사이트의 다양성이 : 우리 손에, 우리는 근위 대장과 맹장의 상대적인 살려주과 함께 주로 말초 부상 패턴을 참조하십시오. 기타 부상 패턴에 더 근위 우위를보고있다.
  2. 환경 변화. 중대한 환경 변화가있다. 이것은 부분적으로 장내 microflora, 다이어트 및 기타 환경 고려 사항의 차이로 인해 가능성이 높습니다.
  3. 높은 분자량의 DSS는 (예 : 500,000 다) 사용하는 경우이 모델은 효과가 있습니다.
  4. 이 모델 4 상당한 변형 변화가 있습니다.

콜론의 생화학 분석은 근위 또는 말초 여백에서 샘플을 채취하여 수행할 수 있습니다. 부상의 정도에 따라이 histologic 부상 점​​수를 생성하는 능력에 영향을 수 있습니다. 생체내 BrdU에서 증식을 측정하기 위하여 분류하는 것은 α - BrdU IHC 처리 뒤에 희생하기 전에 16.7 μg / kg BrdU 2 시간의 intraperitoneal 주사로 얻을 수 있습니다.

'소시지'에 대한 대안으로서, 콜론 완전히 평평 해결할 수 있습니다. 왓먼 종이와 유리 섬유 복합 용기의 하단에와 10 %로 종이를 발라 라인 포르말린 인산염을 버퍼. "검시와 콜론의 착취 제 2 부"에 설명된대로 콜론을 해부하다. 다시, 운영자에 가장 가까운 콜론의 말초 끝을 유지. 세부적으로 밀고 가위를 사용하여 콜론의 근위 끝에 말초에서 길이 방향 절개. 좋은 밀고 포셉은 절개 중 가장자리를 파악하므로 평면 시트로 콜론을 표시 작업을 옆으로 열려있는 상태. 사전 절어 왓먼 신문이 플랫 시트를 전송합니다. 10 % 포르말린 인산염을 버퍼로 왓먼으로 젖은 채 다른 조각으로 평평 콜론을 커버. 왓먼 완전히 포르말린로 덮여 있지만 콜론을 리프트 너무 많이 안한다. 유리 섬유 복합을 봉쇄하고 24 시간 동안 수정. 유리 섬유 복합에서 콜론을 제거하고 15 ML 원뿔 튜브 10 ML 70 % 에탄올에 놓으십시오. (콜론은 상온에서 무한정 70 % EtOH에 저장할 수 있습니다.)

colonic 부상 5,6,7를 quantifying 여러 가지 방법이 있습니다. 염증, 어느 정도의 참여, 재생, 지하실 손상 및 퍼센트 참여 8 한 가지 방법은, 예를 들면, 포함하는 다중 매개 변수 크기를 사용합니다.

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Disclosures

동물 실험은 밴더빌트 IACUC에 의해 명시된 지침과 규정에 따라 수행되었다.

Acknowledgements

NIH (1 K08 DK080221 - 01)와 밴더빌트 기관 개발 기금에서 제공하는 자금.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Dextran Sulfate Sodium Salt USB Corp., Affymetrix 9011-18-1 mol wt 40,000-50,000
10% Buffered Formalin Phosphate Fisher Scientific SF100-4
Isoflurane, USP Phoenix Pharmaceuticals, Inc. NDC 57319-474-06
TISSUE PATH Macrosette Cassettes Fisher Scientific 15182706
BD 10 ml Syringe BD Biosciences 309604
Ethyl Alcohol Pharmco-AAPER E190 Dilute to 70% with distilled water
20G Straight Feeding Needle VWR international 20068-612
27G1/2 PrecisionGlide Needle BD Biosciences 305109
Dissecting Scissors Sharp/Blunt Tip VWR international 82027-588
Waugh Forceps VWR international 82027-428
Non-absorbable Suture LOOK Surgical SP116
Whatman Blotting Paper VWR international 28298-020 Cut as needed
Nalgene Surfactant-Free Cellulose Acetate (SFCA) Filter Cole-Parmer EW-06731-2
Carbon fiber composites digital caliper Fisher Scientific 15-007-958

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Okayasu, I. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 98, (3), 694-702 (1990).
  2. Martinez, J. A. Deletion of Mtgr1 sensitizes the colonic epithelium to dextran sodium sulfate-induced colitis. Gastroenterology. 131, (2), 579-588 (2006).
  3. Moolenbeek, C., Ruitenberg, E. J. The "Swiss roll": a simple technique for histological studies of the rodent intestine. Lab Anim. 15, (1), 57-59 (1981).
  4. Mahler, M. Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis. Am J Physiol. 274, G544-551 (1998).
  5. Aharoni, R. Immunomodulatory therapeutic effect of glatiramer acetate on several murine models of inflammatory bowel disease. J Pharmacol Exp Ther. 318, (1), 68-78 (2006).
  6. Hahm, K. B. Loss of transforming growth factor beta signalling in the intestine contributes to tissue injury in inflammatory bowel disease. Gut. 49, (2), 190-198 (2001).
  7. Green, B. T. Adrenergic modulation of Escherichia coli O157:H7 adherence to the colonic mucosa. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 287, (6), G1238-1246 (2004).
  8. Dieleman, L. A. Chronic experimental colitis induced by dextran sulphate sodium (DSS) is characterized by Th1 and Th2 cytokines. Clin Exp Immunol. 114, (3), 385-391 (1998).

Comments

55 Comments

  1. what kind of mice you used in the experiment? hao ole of the mice when you treatment with DSS

    Reply
    Posted by: echo r.
    March 18, 2010 - 8:43 PM
  2. We use both 1²9 and C57BL6 mice in this experiment but the protocol can be used in any background. The mice are at least 6 weeks old before we begin treatment with DSS.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    March 19, 2010 - 10:27 AM
  3. what kind of mice you used in the experiment? hao ole of the mice when you treatment with DSS

    Reply
    Posted by: echo r.
    March 18, 2010 - 9:36 PM
  4. what happens if we keep the colon more than ²4 hours in 10%formalin ?

    Reply
    Posted by: peyman m.
    May 23, 2010 - 6:17 AM
  5. Leaving them in the 10% formalin shouldn't be a problem. We have left them over the weekend. For counts, longer fixation shouldn't be problematic, but I would put them in 70% ethanol before the end of 3 days.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    May 23, 2010 - 6:38 PM
  6. should DSS be prepared daily? and why it need be filtered?&#²9²59;Is the coulor of the solution&#²9²59;(DSS solute in filter water ) yellow

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 15, 2010 - 8:50 AM
  7. The DSS dŒs not need to be prepared daily. You can fill a water bottle enough for the four days on DSS. It needs to be filtered because you will be handling it before filtering and it can harbor bacteria, etc. that you don't want to feed to your mice. Yes, the color of the solution is slightly yellow.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    June 15, 2010 - 11:52 AM
  8. should I store the solution in routine temperature or in the fridge?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 16, 2010 - 2:50 AM
  9. It is stored at room temperature.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    June 16, 2010 - 12:54 PM
  10. should I change the solution containing dss daily ? dŒs it influence the result if i do not change the solution daily?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 16, 2010 - 9:48 PM
  11. There is no need to change the solution daily. Just put enough DSS solution in the water bottle on day one to last for the duration of the first cycle of DSS.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 17, 2010 - 12:02 PM
  12. In our animal facility ,autoclaved tap water is used for all the mice. can I prepare DSS solution in tap water and then filter , or only distilled water shuld be used.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 17, 2010 - 12:57 AM
  13. You can prepare the solution in tap water and then filter.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 17, 2010 - 12:03 PM
  14. Dear Drs Whittem, Williams and Williams:

    Hello, I am writing a protocol to my University's IACUC to perform DSS induction of colitis, and was hoping that you may be willing to answer some of my questions regarding the animals subjected to DSS. I will be using the acute injury and injury repair models mentioned in your article. Could you please provide additional details of the stress that the mice might experience throughout the course of the experiment? The signs stated on the tutorial included weight loss, bloody stools, and diarrhea. Do these mice have additional issues such as an inability to retrieve food from an overhead feeding dish/water bottle, anorexia, inability to groom, contractures (i.e. 'hunching' in response to pain) or additional signs that may be useful to note when submitting my protocol? Also, should I expect mortality during treatment? As recommended, I will use mice older than six weeks, but likely not several weeks older as I want to avoid age-related issues. Finally, would you recommend the use of any type of analgesic drug during the course of DSS-colitis experiments to minimize discomfort in these animals? If so, would you happen to know the effect the analgesic has on factors such as barrier function, healing, infection rate, overall survival etc.? As I do not yet have any personal experience with this model, any insight will be greatly appreciated. Thank you.

    Reply
    Posted by: Elle F.
    June 28, 2010 - 8:03 AM
  15. For the acute injury and injury repair models you should only see the stresses mentioned in the article, weight loss, bloody stool, and diarrhea. There are no additional issues and you should not expect mortality during treatment. I would not recommend the use of an analgesic drug because, for example, NSAIDs will injure the gut and they should not be needed. Good luck!

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    June 28, 2010 - 10:52 AM
  16. How do you utilize the sausages? I assume you slit them lengthwise after fixation and then stain (with what?) and examine them enface in a dissecting scope. What can you learn from this type of examination? Do you have a preferred method for quantitation of the resultand data?

    Reply
    Posted by: John W.
    July 30, 2010 - 3:05 PM
  17. You are correct, the sausages are cut lengthwise and stained with methylene blue and analyzed for aberrant crypt foci and polyp burden. The data is collected as and quantified as numbers of ACF/colon or number or size of polyps per colon.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    July 30, 2010 - 3:19 PM
  18. Read the abstract,
    "Mice are euthanized at the conclusion ... and at necropsy ... and can be 'Swiss rolled" 3 to allow microscopic analysis of the entire colon or infused with formalin as "sausages" to allow macroscopic analysis. Tissue is then embedded in paraffin, sectioned, and stained for histologic review."

    "Swiss roll" is for histological analysis, while "sausage" is for macroscopic analysis of the ENTIRE colon.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 6, 2010 - 11:21 AM
  19. is dextran a reliable model for colitis...?do i use the drug for treatment before or after colitis using dextran?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 12, 2011 - 7:20 AM
  20. DSS is one of the better models for colitis. The papers found at the following sites as well as those that we cite in our paper give good information on the topic. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9844047?dopt=Citation http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8881816?dopt=Citation http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14611673?dopt=Citation We have not performed treatments on mice on DSS. We mainly use it to analyze the response of knockout models to experimental colitis. Treatment times would depend on whether you would like to prevent or treat colitis.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    June 15, 2011 - 6:24 PM
  21. I'm working with this model, but using ²% DSS as described. We bought our chemicals from another company, but the molecular weight is the same. Can you tell me more about the bloody diarrhea. I have finished the DSS water, but did not notice any blood. There was a bit of an excessive amount of feces, but I did not see the mice hair (white) or bedding stained with dried blood. I've read in other papers that not all the mice have it, but dŒs the fact that I did not see any mean that something went wrong?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 17, 2011 - 1:21 PM
  22. There can be considerable variability in the severity of colitis induced by DSS. This depends on manufacturer, lot #, environment, differences in enteric flora. We typically track weights, DAI which includes stool consistency, blood, etc, measure colon length and weight at necropsy and for us, we consider the histology observed from reviewing the H+E's as the gold standard for injury. I would recommend reviewing the histology with a GI pathologist.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 20, 2011 - 3:00 PM
  23. I am submitting a protocol for DSS to the IACUC. They want to know how I "will deal with the diarrhea with occult blood". Is there anything that we can administer to the mice to make the IACUC happy? They want to know how long I will let these symptoms go on before removing the mouse from the study. Unfortunately, all of these things are facets of the disease.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 18, 2011 - 10:09 AM
  24. Hello Jesse,
    We insure that IACUC knows that mice that drop below ²0% weight loss are sac'd. The amount of time that mice are on DSS results in diarrhea and blood for only 4-6 days and mice recover well. You should not have to worry about mice having symptoms for more than a week.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    August 18, 2011 - 12:00 PM
  25. Thank you for your response. Another question...if the mice are in distress(eg. bloody diarrhea) but we don't give them any analgesic, then the IACUC will make them go down as Category E by USDA standards. DŒs anyone else have experience with this? DŒs anyone else list them as Category E?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 18, 2011 - 2:00 PM
  26. Ours are Category E

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    August 18, 2011 - 6:19 PM
  27. The water to be used with the DSS should be autoclaved water?

    Reply
    Posted by: Lilian N.
    August 18, 2011 - 10:50 PM
  28. DŒs anybody do anything to combat dehydration in these mice?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 19, 2011 - 10:56 AM
  29. Sucrose 6%.
    http://farncombe.mcmaster.ca/documents/Ghiaetal.GastrŒnterology²0091367²²80-²²88.pdf

    Reply
    Posted by: Lilian N.
    August 19, 2011 - 12:57 PM
  30. The water used with DSS dŒs not need to be autoclaved. You should filter it after making the DSS solution. We do IP saline injections.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    August 19, 2011 - 1:39 PM
  31. DSS will be degrade or not in water. How DSS solution will be filtered what is procedure for that.can u elaborate thanks

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 24, 2011 - 3:11 AM
  32. We have not officially tested whether DSS degrades in water over extended periods of time. We make fresh DSS solutions for each cycle of DSS that is administered and do not reuse the DSS that is remaining in the water bottles after each cycle. As mentioned in the protocol, we make a 3% (w/v) Dextran Sulfate Sodium Salt solution in water and filter with a 0.45 μm cellulose acetate filter (Nalgene Surfactant-Free Cellulose Acetate (SFCA) Filter, Cole-Parmer, catalog number: EW-06731-²). The directions for this filter come with it but it is simply a vacuum filtration system as pictured in the video (seen at 0:5², "Injury-Repair Colitis Model").

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    September 25, 2011 - 3:50 PM
  33. Has anyone used buprenorphine in the DSS model?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 27, 2011 - 1:29 PM
  34. Question: In this mouse model of DSS colitis, do we have to to remove the colon contents (stools) before histological analysis? How is this done? Thank you!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 14, 2011 - 10:49 AM
  35. At 3:17 in the video the removal of stools is shown. The colon is flushed with PBS using a ²0G straight feeding needle.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    October 17, 2011 - 4:38 PM
  36. In some protocols, people sacrifice the mice 3 or 5 days after DSS treatment. What is the purpose of this? How is this different from killing the mice after 4 days of DSS treatment.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 16, 2012 - 4:52 PM
  37. The number of days that you sac after DSS treatment will determine the amount of time the mice have to heal. we generally use 4 days because, in wild type mice, this is usually the best amount of time to see the beginnings of recovery while still noting damage in the mice of interest used in our lab. Basically, this is the point at which we see the most difference between the two groups. If you have a mouse that you expect to heal more quickly, 3 days may be suitable, and vice versa.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    January 18, 2012 - 1:21 PM
  38. Regarding the step 7 of part 4 in the protocol mentioned above, how do you remove a needle from a swiss-rolled tissue before going forward to paraffin-embedding? Just pull out? Do you have a specific way to do that?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 17, 2012 - 6:05 PM
  39. Once the tissue is formalin fixed, the tissue will be stiff enough that you can either unbend or clip the needle and slide it out of the roll without altering the shape of the Swiss roll. Our tissue processing core knows how to handle our tissue, but if you need to do it yourself, insure that the tissue has been in 70% ethanol at least overnight and then use gloves and forceps to remove the needle from the roll.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    January 18, 2012 - 1:24 PM
  40. What are the strains of mice used for this model? And what is the health status of the animals?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 10, 2012 - 11:16 AM
  41. We use C57Bl6 mice for our experiments. Our mice are healthy before treatment with DSS.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    December 13, 2012 - 1:04 PM
  42. Hello, I am writing a protocol to my University's IACUC to perform DSS induction of colitis.Should I put DSS in Hazardous material form?Is there any method to detect the DSS excretion in feces and urine?How can we deal with the waste from DSS (unused solution)?

    Thanks,

    Reply
    Posted by: Jinggang L.
    December 13, 2012 - 11:22 AM
  43. Our IACUC protocol dŒs not include DSS as a hazardous material and we pour waste DSS down the drain. As far as I know, there is not a method to detect DSS excretion in feces and urine.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    December 13, 2012 - 1:06 PM
  44. Hi
    In the materials you list Dextran Sulfate Sodium Salt USB Corp., Affymetrix 9011-18-1 mol wt 40,000-50,000.
    However when I check Affymetrix website, this catalog number belongs to a MW: 500,000 product (http://www.affymetrix.com/esearch/search.jsp?pd=131111&N=4²94967²93) . is this what you used or otherwise what is the correct catalog number. thanks!

    Reply
    Posted by: selcen o.
    May 6, 2013 - 10:50 AM
  45. I am so sorry for the confusion. The number listed in the protocol is the CAS# which is similar between the 500,000 and 50,000 M.W. DSS. The actual catalog number is 14489. This number should get you what you need (http://www.affymetrix.com/estore/browse/brand/usb/product.jsp?productId=130²61#1_1).

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    May 6, 2013 - 12:00 PM
  46. Thanks a lot for the catalog number!
    Could you please explain the injection of saline to prevent dehydration? How often and how much should it be injected? I guess all mice should get the same amount at the same time, right?
    And when the mice get sick, should we put some food on the bottom of the cage, or are they usually capable of getting the food themselves? thanks again.

    Reply
    Posted by: selcen o.
    May 13, 2013 - 3:44 PM
  47. We usually only inject mice that are not looking healthy and we generally do this as needed. I will only inject a 1ml bolus on a single day. You can repeat this the next day, but this is really just a last resort. We sacrifice them once they reach ²0% weight loss so they don't have undue stress. When the mice get sick, I do tend to try and put food in the bottom of the cage in case the mice aren't able to reach up into the food distributor. If the mice are getting so sick that you need to inject with PBS or move the food down, you may want to try a smaller concentration of DSS (²% or 1%) or perform the treatment for a shorter time. We have had several genotypes that don't handle the DSS as well and decreasing the concentration or treatment time really helps them. There is also facility to facility variability dependent on mouse microbiomes so my mice may be less sensitive than your mice to DSS and even your WTs might have different responses than mine. In short, we often need to tweak the protocol so that we can get injury while insuring survival for the extent of the protocol that we need to perform.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    May 13, 2013 - 4:29 PM
  48. thanks a lot, Caityln, you are really helping a lot because we have no experience in that.

    Reply
    Posted by: selcen o.
    May 14, 2013 - 4:56 AM
  49. Inducing colorectal cancer in rats: I am in a predicament; instead of the DSS Mw 40,000, I have ordered DSS (Mr 5,000) by accident. Unfortunately I noticed this too late and have a very limited time. I have read that the Mw of DSS does play a role in inducing colitis, whereby 5 kDa could induce milder form of colitis. I plan to inject my rats with AOM (12 mg/Kg), expose the rats to 2 cycles of 1 week of 2% DSS following 2 weeks of water. These rats are quite old, 12 weeks to be exact. They are also Wistar rats so at this time they are prone to develop cancer easily. However, I would like to know is using 5 kDa DSS worth it? Could you please provide me with some advice?

    Reply
    Posted by: Lynn C.
    February 16, 2014 - 6:30 AM
  50. Unfortunately, I do not think that Mr 5,000 will work.

    Reply
    Posted by: Christopher W.
    February 19, 2014 - 9:21 AM
  51. can we use dss with m.w 500.000 for induce colitis?

    Reply
    Posted by: flora s.
    January 29, 2015 - 9:41 PM
  52. Is there a difference between female and male mice? Which would should i choose?

    Reply
    Posted by: stu a.
    February 17, 2015 - 11:42 AM
  53. We have not noticed a difference with gender; however, as the environment is a strong contributor to the severity of colitis, I would recommend test experiments with male and female WT mice in your facility.

    Reply
    Posted by: Christopher W.
    February 17, 2015 - 12:24 PM
  54. Would you also have an advice on how to minimize the variability between the cages? I was considering to mix treated and not treated animals in the same cage (our treatment is injected). However I am afraid that the groups will have cross effects on each other.
    Thank you

    Reply
    Posted by: stu a.
    February 17, 2015 - 2:25 PM
  55. Is it plausible to use 500,000 mw DSS? 1-2% for induction oftumours with AOM, I thank all advice.

    Reply
    Posted by: VERONICA M.
    May 14, 2015 - 5:04 PM

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