Modélisation colite murin en utilisant du sulfate de sodium Dextran (DSS)

Biology

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Summary

Dextran sulfate de sodium (DSS) administré dans l'eau potable est un modèle murin établie blessures inflammatoires de colite aiguë. Ce protocole décrit la méthode pour le traitement de DSS et la préparation des tissus.

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Whittem, C. G., Williams, A. D., Williams, C. S. Murine Colitis Modeling using Dextran Sulfate Sodium (DSS). J. Vis. Exp. (35), e1652, doi:10.3791/1652 (2010).

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Abstract

Colite peuvent survenir des infections virales ou bactériennes, ischémique ou de troubles auto-immunes; colite ulcéreuse et plus particulièrement la variante du côlon de la maladie de Crohn - maladie de Crohn. La colite aiguë peuvent présenter des douleurs abdominales et une distension, une malabsorption, diarrhée, rectorragies et de mucus dans les selles. Nous commençons à comprendre les interactions complexes entre l'environnement, la génétique et le dysfonctionnement de la barrière épithéliale inflammatoire modèles de maladies animales et l'intestin de colite ont été essentielles pour faire progresser notre compréhension de cette maladie. Un modèle populaire implique complétant l'eau potable des souris du sulfate de sodium à faible poids moléculaire Dextran (DSS), entraînant des dommages épithéliaux et une réponse robuste inflammatoires dans le côlon de plusieurs jours

Protocol

Partie 1: modèle de colite blessures-Réparation

  1. Poids à l'inclusion devrait être obtenue pour chaque souris avant de commencer le traitement du MAS.
  2. Faites un 3% (p / v) Sulfate de Dextran Sodium solution de sel dans l'eau et le filtre avec un filtre de 0,45 um d'acétate de cellulose.
  3. Remplacer l'eau potable dans la cage de la souris avec la solution DSS 3% pendant quatre jours. Les souris ne devraient pas avoir accès à toute autre source d'eau (à savoir l'exclusion des conseils mis sur les systèmes d'arrosage automatique).
  4. Le quatrième jour, remplacer la solution SSD avec de l'eau pour une période supplémentaire de trois jours, permettant une certaine reprise du côlon épithéliales. La souris devrait être pesé sur quatre jours afin de quantifier les conséquences systémiques de la colite. La perte de poids est commun avec des blessures graves.
  5. Au jour 7, peser et le sacrifice des souris. Les souris peuvent être euthanasiés par surdose par inhalation d'isoflurane, ou d'autres institutionnellement, IACUC méthodes approuvées.

Partie 2: autopsie et la récolte de Colon

  1. Exposer la partie ventrale de la souris et les jambes sécurisé afin d'assurer un libre accès à l'abdomen. Mouiller l'abdomen complètement avec 70% d'éthanol.
  2. Saisissez la ligne médiane de l'abdomen avec une pince tissus et s'étendent vers le haut donc tentes de la peau. Utilisez des ciseaux à pointe fine pour inciser l'abdomen exposant ainsi le contenu abdominal. Prolonger l'incision à la pointe de l'appendice xiphoïde à la ligne médiane puis s'étendent le long de la face inférieure de la marge côtière bilatéralement.
  3. Identifier l'intestin grêle, le caecum et du côlon. Soigneusement disséquer / taquiner le côlon du mésentère entoure. Transect du côlon profonde dans le bassin afin de libérer le côlon distal et du rectum. Transect du côlon à la marge colonocecal pour libérer le côlon proximal. Des précautions doivent être prises lors de ce processus pour ne pas endommager le colon que le nettoyage du côlon sera problématique si la perforation se produit.
  4. En utilisant une aiguille d'alimentation 20G et une seringue de 10 ml, intuber et rincer le côlon avec PBS glacé jusqu'à la éluat est totalement claire des selles.
  5. À ce stade, si l'analyse macroscopique avec un microscope à dissection est souhaitée, les colons peuvent être fixés comme «saucisses». Si l'analyse histologique est seulement désiré que de procéder à la partie 4 «Faire Rolls suisse pour l'analyse histologique de la colite aiguë".

Partie 3: Traitement de «saucisses» pour l'analyse macroscopique de l'ensemble du côlon

  1. Il est important de maintenir l'orientation correcte du côlon, par conséquent, garder l'extrémité distale du côlon proche de l'opérateur. Coupez deux morceaux de suture non résorbable (SP116 1,5 soie tressée métriques), l'un d'environ 1 pouce de longueur, les 2 autres pouces.
  2. Utilisez le morceau de 2 pouces de suture pour attacher l'extrémité distale aussi près que possible de la marge, tout en conservant une bonne étanchéité.
  3. Placer une aiguille 20G d'alimentation contenant 5 ml de 10% tamponné phosphate de formol dans l'extrémité proximale du côlon. Librement attacher le morceau restant de suture immédiatement en amont de l'ampoule de l'aiguille d'alimentation. Saisir fermement le côlon au niveau du bulbe de l'aiguille d'alimentation et laisser infuser le formol jusqu'à ce que le colon est élargi. Serrez le noeud de la suture que vous retirez l'aiguille d'alimentation, laissant ainsi la infuse, du côlon élargi comme une "saucisse".
  4. Remplir un tube de 15 ml conique avec 10% tamponnée de phosphate de formol et le lieu du côlon dans le tube. Correction pour les 24 heures.
  5. Décanter le formol et le remplacer par EtOH à 70% pour un 24 heures supplémentaires. (Colons peut être stockée dans EtOH à 70% indéfiniment à température ambiante.)
  6. Retirez le côlon du tube conique et couper les cordes à chaque extrémité avec un scalpel, en faisant attention à ne pas endommager le côlon. Rappelez-vous que l'extrémité distale a la plus longue ficelle. Couper longitudinalement à partir de l'extrémité distale à l'extrémité proximale du côlon de sorte qu'il forme une longue feuille. À ce stade, le côlon peut être considérée sous un microscope à dissection.

Partie 4: Rendre Rolls suisse pour l'analyse histologique de la colite aiguë

  1. Il est important de maintenir l'orientation correcte du côlon, par conséquent, garder l'extrémité distale du côlon proche de l'opérateur.
  2. Mesurez la longueur du côlon. Cette métrique est un autre indicateur de la gravité des blessures. Colite augmente l'œdème et raccourcit la durée du côlon globale.
  3. En utilisant des ciseaux à pointe fine, incisez longitudinalement de distal à l'extrémité proximale du côlon. Utilisez une pince à pointe bien à saisir un des bords de l'incision et ouverte latéralement travailler votre chemin distal-> proximale, affichant ainsi le colon comme un drap plat.
  4. Rouler le côlon nécessite une paire de pinces et d'une technique à deux mains. Saisissez l'un des bords de la marge distale avec une pince. Passez à rouler de façon séquentielle du côlon en tournant et en libérant les pinces de procéder à la marge proximale. Générant ainsi une spirale avec une troisième dimension ou "Roll suisse».Pour maintenir la forme enroulée, saisir le rouler fermement avec une pince et il transect avec une aiguille 27G1 / 2. Fixez l'aiguille par flexion de l'aiguille à sa sortie du rouleau.
  5. Placez le rouleau dans une cassette tissus étiquetés correctement et placez dans un pot de 10% tamponnée de phosphate de formol à température ambiante pendant 24 heures afin d'assurer la fixation des tissus.
  6. Décanter le formol et le remplacer par EtOH à 70% pour un 24 heures supplémentaires. (Colons peut être stockée dans EtOH à 70% indéfiniment à température ambiante.)
  7. Une fois l'échantillon a été fixé, il peut être inclus en paraffine, coupés et montés sur des lames pour l'analyse histologique.

Partie 5: Résultats Représentant

Le modèle SSD pour la colite aiguë permet au chercheur d'obtenir, corriger et analyser un colon qui la colite aiguë modèles. Quand le rouleau suisses est coupé et monté, il devrait former une tranche représentative de la totalité du côlon en cas de roulement correctement (figure 1). Le rouleau peut être montée colorés avec H & E, afin de déterminer l'étendue des dommages au côlon, de la partie distale (à l'intérieur) fin à la partie proximale (extérieur) fin (figure 2). L'immunohistochimie peut également être effectuée sur la liste suisse pour identifier et quantifier des infiltrats inflammatoires. Si la méthode la saucisse a été effectuée correctement, le côlon fixe sera dilaté et toute la surface des muqueuses peuvent être facilement manipulées et visualisées sous le microscope à dissection (figure 3).

Figure 1
Figure 1. Le bien-exécuté "roulé". (A) Le côlon est roulé de la partie distale de l'extrémité proximale, sectionné avec une aiguille et fixés par flexion de l'extrémité de l'aiguille. Il est ensuite placé dans une cassette de tissu pour la fixation. (B) H & E teinté section 5 um d'un rouleau Swiss made dans le côlon d'une souris traitée avec DSS (d = p = côlon distal du côlon proximal).

Figure 2
Figure 2. Virgules DSS traités montrent des signes de colite aiguë. Inflammation des dommages et la crypte sont apparentes dans le côlon DSS-traités par rapport à un contrôle de l'eau traitée.

Figure 3
Figure 3. Un exemple d'une «saucisse». La saucisse infusé avec du formol et complètement développé. Un léger angle seront présents secondaire à la courbure naturelle du côlon. La saucisse a ouvert doit être à plat.

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Discussion

Ce protocole peut être modifié pour modèle de lésion aiguë, blessure-réparation, ou chronique du côlon processus blessures.

Modification des traumatismes aigus:

Lib DSS ad traitement pendant 4-6 jours, suivie par le sacrifice immédiat

Blessure-Réparation de modification:

Blessure avec 4-6 jours de traitement DSS suivie par la période de récupération de 3-4 jours et le sacrifice (comme décrit dans le protocole ci-dessus).

Chronique de modification Colite:

Les souris sont placées sur trois cycles de cinq jours de DSS 3% avec seize jours de récupération entre chaque cycle. Les souris sont sacrifiées après la période de repos de 16 jours finale.

Il ya plusieurs questions que les chercheurs doivent être conscients de ce modèle:

  1. La variabilité dans le site de la blessure: Dans nos mains, nous voyons un type de blessure à prédominance distale, avec une épargne relative du côlon proximal et le caecum. D'autres ont signalé la prédominance proximale de la type de blessure.
  2. La variabilité de l'environnement. Il ya une importante variabilité de l'environnement. Cela est probablement, en partie, due à des différences dans la microflore intestinale, l'alimentation et autres considérations environnementales.
  3. Ce modèle est inefficace si haute DSS poids moléculaire est utilisé (c'est à dire 500 000 Da).
  4. Il existe une variabilité des tensions considérables avec ce modèle 4.

L'analyse biochimique du côlon peut être effectuée en prélevant des échantillons à partir des marges proximales ou distales. Selon la gravité des blessures ce qui peut influer sur votre capacité à générer un score de lésion histologique. In vivo marquage BrdU pour mesurer la prolifération peut être réalisé par injection intrapéritonéale de 16,7 mg / kg de BrdU 2 heures avant le sacrifice suivie par α-BrdU IHC traitement.

Comme une alternative à la "saucisse", le côlon peut être fixé complètement plat. Tapissez le fond d'un récipient Tupperware avec du papier Whatman et tremper le papier avec 10% tamponné phosphate de formol. Disséquer le côlon comme décrit dans "Partie 2: autopsie et la récolte de Colon". Encore une fois, garder l'extrémité distale du côlon proche de l'opérateur. En utilisant des ciseaux à pointe fine, incisez longitudinalement de distal à l'extrémité proximale du côlon. Avec de fines pinces à pointes saisir un des bords de l'incision et ouverte latéralement de travail, affichant ainsi le colon comme un drap plat. Transfert cette feuille à plat sur le papier pré-imbibé Whatman. Couvrir le côlon aplati avec un autre morceau de papier Whatman et humide avec 10% tamponné phosphate de formol. Le Whatman devrait être complètement couvert dans le formol, mais pas tant que cela soulève du côlon. Sceller le Tupperware et fixer pendant 24 heures. Retirez le côlon du Tupperware et le placer dans 10 ml d'éthanol à 70% dans un tube de 15 ml conique. (Colons peut être stockée dans EtOH à 70% indéfiniment à température ambiante.)

Il existe plusieurs méthodes pour quantifier les lésions coliques 5,6,7. Une méthode, par exemple, utilise une échelle multi-paramètres, notamment: l'implication inflammation, l'étendue, la régénération, les dommages crypte, l'implication et 8 pour cent.

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Disclosures

Expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec les directives et les règlements stipulés par Vanderbilt IACUC.

Acknowledgments

Le financement accordé par le NIH (1 K08 DK080221-01) et les fonds de développement institutionnel Vanderbilt.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Dextran Sulfate Sodium Salt USB Corp., Affymetrix 9011-18-1 mol wt 40,000-50,000
10% Buffered Formalin Phosphate Fisher Scientific SF100-4
Isoflurane, USP Phoenix Pharmaceuticals, Inc. NDC 57319-474-06
TISSUE PATH Macrosette Cassettes Fisher Scientific 15182706
BD 10 ml Syringe BD Biosciences 309604
Ethyl Alcohol Pharmco-AAPER E190 Dilute to 70% with distilled water
20G Straight Feeding Needle VWR international 20068-612
27G1/2 PrecisionGlide Needle BD Biosciences 305109
Dissecting Scissors Sharp/Blunt Tip VWR international 82027-588
Waugh Forceps VWR international 82027-428
Non-absorbable Suture LOOK Surgical SP116
Whatman Blotting Paper VWR international 28298-020 Cut as needed
Nalgene Surfactant-Free Cellulose Acetate (SFCA) Filter Cole-Parmer EW-06731-2
Carbon fiber composites digital caliper Fisher Scientific 15-007-958

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Okayasu, I. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 98, (3), 694-702 (1990).
  2. Martinez, J. A. Deletion of Mtgr1 sensitizes the colonic epithelium to dextran sodium sulfate-induced colitis. Gastroenterology. 131, (2), 579-588 (2006).
  3. Moolenbeek, C., Ruitenberg, E. J. The "Swiss roll": a simple technique for histological studies of the rodent intestine. Lab Anim. 15, (1), 57-59 (1981).
  4. Mahler, M. Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis. Am J Physiol. 274, G544-551 (1998).
  5. Aharoni, R. Immunomodulatory therapeutic effect of glatiramer acetate on several murine models of inflammatory bowel disease. J Pharmacol Exp Ther. 318, (1), 68-78 (2006).
  6. Hahm, K. B. Loss of transforming growth factor beta signalling in the intestine contributes to tissue injury in inflammatory bowel disease. Gut. 49, (2), 190-198 (2001).
  7. Green, B. T. Adrenergic modulation of Escherichia coli O157:H7 adherence to the colonic mucosa. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 287, (6), G1238-1246 (2004).
  8. Dieleman, L. A. Chronic experimental colitis induced by dextran sulphate sodium (DSS) is characterized by Th1 and Th2 cytokines. Clin Exp Immunol. 114, (3), 385-391 (1998).

Comments

55 Comments

  1. what kind of mice you used in the experiment? hao ole of the mice when you treatment with DSS

    Reply
    Posted by: echo r.
    March 18, 2010 - 8:43 PM
  2. We use both 1²9 and C57BL6 mice in this experiment but the protocol can be used in any background. The mice are at least 6 weeks old before we begin treatment with DSS.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    March 19, 2010 - 10:27 AM
  3. what kind of mice you used in the experiment? hao ole of the mice when you treatment with DSS

    Reply
    Posted by: echo r.
    March 18, 2010 - 9:36 PM
  4. what happens if we keep the colon more than ²4 hours in 10%formalin ?

    Reply
    Posted by: peyman m.
    May 23, 2010 - 6:17 AM
  5. Leaving them in the 10% formalin shouldn't be a problem. We have left them over the weekend. For counts, longer fixation shouldn't be problematic, but I would put them in 70% ethanol before the end of 3 days.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    May 23, 2010 - 6:38 PM
  6. should DSS be prepared daily? and why it need be filtered?&#²9²59;Is the coulor of the solution&#²9²59;(DSS solute in filter water ) yellow

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 15, 2010 - 8:50 AM
  7. The DSS dŒs not need to be prepared daily. You can fill a water bottle enough for the four days on DSS. It needs to be filtered because you will be handling it before filtering and it can harbor bacteria, etc. that you don't want to feed to your mice. Yes, the color of the solution is slightly yellow.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    June 15, 2010 - 11:52 AM
  8. should I store the solution in routine temperature or in the fridge?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 16, 2010 - 2:50 AM
  9. It is stored at room temperature.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    June 16, 2010 - 12:54 PM
  10. should I change the solution containing dss daily ? dŒs it influence the result if i do not change the solution daily?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 16, 2010 - 9:48 PM
  11. There is no need to change the solution daily. Just put enough DSS solution in the water bottle on day one to last for the duration of the first cycle of DSS.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 17, 2010 - 12:02 PM
  12. In our animal facility ,autoclaved tap water is used for all the mice. can I prepare DSS solution in tap water and then filter , or only distilled water shuld be used.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 17, 2010 - 12:57 AM
  13. You can prepare the solution in tap water and then filter.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 17, 2010 - 12:03 PM
  14. Dear Drs Whittem, Williams and Williams:

    Hello, I am writing a protocol to my University's IACUC to perform DSS induction of colitis, and was hoping that you may be willing to answer some of my questions regarding the animals subjected to DSS. I will be using the acute injury and injury repair models mentioned in your article. Could you please provide additional details of the stress that the mice might experience throughout the course of the experiment? The signs stated on the tutorial included weight loss, bloody stools, and diarrhea. Do these mice have additional issues such as an inability to retrieve food from an overhead feeding dish/water bottle, anorexia, inability to groom, contractures (i.e. 'hunching' in response to pain) or additional signs that may be useful to note when submitting my protocol? Also, should I expect mortality during treatment? As recommended, I will use mice older than six weeks, but likely not several weeks older as I want to avoid age-related issues. Finally, would you recommend the use of any type of analgesic drug during the course of DSS-colitis experiments to minimize discomfort in these animals? If so, would you happen to know the effect the analgesic has on factors such as barrier function, healing, infection rate, overall survival etc.? As I do not yet have any personal experience with this model, any insight will be greatly appreciated. Thank you.

    Reply
    Posted by: Elle F.
    June 28, 2010 - 8:03 AM
  15. For the acute injury and injury repair models you should only see the stresses mentioned in the article, weight loss, bloody stool, and diarrhea. There are no additional issues and you should not expect mortality during treatment. I would not recommend the use of an analgesic drug because, for example, NSAIDs will injure the gut and they should not be needed. Good luck!

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    June 28, 2010 - 10:52 AM
  16. How do you utilize the sausages? I assume you slit them lengthwise after fixation and then stain (with what?) and examine them enface in a dissecting scope. What can you learn from this type of examination? Do you have a preferred method for quantitation of the resultand data?

    Reply
    Posted by: John W.
    July 30, 2010 - 3:05 PM
  17. You are correct, the sausages are cut lengthwise and stained with methylene blue and analyzed for aberrant crypt foci and polyp burden. The data is collected as and quantified as numbers of ACF/colon or number or size of polyps per colon.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    July 30, 2010 - 3:19 PM
  18. Read the abstract,
    "Mice are euthanized at the conclusion ... and at necropsy ... and can be 'Swiss rolled" 3 to allow microscopic analysis of the entire colon or infused with formalin as "sausages" to allow macroscopic analysis. Tissue is then embedded in paraffin, sectioned, and stained for histologic review."

    "Swiss roll" is for histological analysis, while "sausage" is for macroscopic analysis of the ENTIRE colon.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 6, 2010 - 11:21 AM
  19. is dextran a reliable model for colitis...?do i use the drug for treatment before or after colitis using dextran?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 12, 2011 - 7:20 AM
  20. DSS is one of the better models for colitis. The papers found at the following sites as well as those that we cite in our paper give good information on the topic. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9844047?dopt=Citation http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8881816?dopt=Citation http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14611673?dopt=Citation We have not performed treatments on mice on DSS. We mainly use it to analyze the response of knockout models to experimental colitis. Treatment times would depend on whether you would like to prevent or treat colitis.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    June 15, 2011 - 6:24 PM
  21. I'm working with this model, but using ²% DSS as described. We bought our chemicals from another company, but the molecular weight is the same. Can you tell me more about the bloody diarrhea. I have finished the DSS water, but did not notice any blood. There was a bit of an excessive amount of feces, but I did not see the mice hair (white) or bedding stained with dried blood. I've read in other papers that not all the mice have it, but dŒs the fact that I did not see any mean that something went wrong?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 17, 2011 - 1:21 PM
  22. There can be considerable variability in the severity of colitis induced by DSS. This depends on manufacturer, lot #, environment, differences in enteric flora. We typically track weights, DAI which includes stool consistency, blood, etc, measure colon length and weight at necropsy and for us, we consider the histology observed from reviewing the H+E's as the gold standard for injury. I would recommend reviewing the histology with a GI pathologist.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 20, 2011 - 3:00 PM
  23. I am submitting a protocol for DSS to the IACUC. They want to know how I "will deal with the diarrhea with occult blood". Is there anything that we can administer to the mice to make the IACUC happy? They want to know how long I will let these symptoms go on before removing the mouse from the study. Unfortunately, all of these things are facets of the disease.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 18, 2011 - 10:09 AM
  24. Hello Jesse,
    We insure that IACUC knows that mice that drop below ²0% weight loss are sac'd. The amount of time that mice are on DSS results in diarrhea and blood for only 4-6 days and mice recover well. You should not have to worry about mice having symptoms for more than a week.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    August 18, 2011 - 12:00 PM
  25. Thank you for your response. Another question...if the mice are in distress(eg. bloody diarrhea) but we don't give them any analgesic, then the IACUC will make them go down as Category E by USDA standards. DŒs anyone else have experience with this? DŒs anyone else list them as Category E?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 18, 2011 - 2:00 PM
  26. Ours are Category E

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    August 18, 2011 - 6:19 PM
  27. The water to be used with the DSS should be autoclaved water?

    Reply
    Posted by: Lilian N.
    August 18, 2011 - 10:50 PM
  28. DŒs anybody do anything to combat dehydration in these mice?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 19, 2011 - 10:56 AM
  29. Sucrose 6%.
    http://farncombe.mcmaster.ca/documents/Ghiaetal.GastrŒnterology²0091367²²80-²²88.pdf

    Reply
    Posted by: Lilian N.
    August 19, 2011 - 12:57 PM
  30. The water used with DSS dŒs not need to be autoclaved. You should filter it after making the DSS solution. We do IP saline injections.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    August 19, 2011 - 1:39 PM
  31. DSS will be degrade or not in water. How DSS solution will be filtered what is procedure for that.can u elaborate thanks

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 24, 2011 - 3:11 AM
  32. We have not officially tested whether DSS degrades in water over extended periods of time. We make fresh DSS solutions for each cycle of DSS that is administered and do not reuse the DSS that is remaining in the water bottles after each cycle. As mentioned in the protocol, we make a 3% (w/v) Dextran Sulfate Sodium Salt solution in water and filter with a 0.45 μm cellulose acetate filter (Nalgene Surfactant-Free Cellulose Acetate (SFCA) Filter, Cole-Parmer, catalog number: EW-06731-²). The directions for this filter come with it but it is simply a vacuum filtration system as pictured in the video (seen at 0:5², "Injury-Repair Colitis Model").

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    September 25, 2011 - 3:50 PM
  33. Has anyone used buprenorphine in the DSS model?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 27, 2011 - 1:29 PM
  34. Question: In this mouse model of DSS colitis, do we have to to remove the colon contents (stools) before histological analysis? How is this done? Thank you!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 14, 2011 - 10:49 AM
  35. At 3:17 in the video the removal of stools is shown. The colon is flushed with PBS using a ²0G straight feeding needle.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    October 17, 2011 - 4:38 PM
  36. In some protocols, people sacrifice the mice 3 or 5 days after DSS treatment. What is the purpose of this? How is this different from killing the mice after 4 days of DSS treatment.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 16, 2012 - 4:52 PM
  37. The number of days that you sac after DSS treatment will determine the amount of time the mice have to heal. we generally use 4 days because, in wild type mice, this is usually the best amount of time to see the beginnings of recovery while still noting damage in the mice of interest used in our lab. Basically, this is the point at which we see the most difference between the two groups. If you have a mouse that you expect to heal more quickly, 3 days may be suitable, and vice versa.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    January 18, 2012 - 1:21 PM
  38. Regarding the step 7 of part 4 in the protocol mentioned above, how do you remove a needle from a swiss-rolled tissue before going forward to paraffin-embedding? Just pull out? Do you have a specific way to do that?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 17, 2012 - 6:05 PM
  39. Once the tissue is formalin fixed, the tissue will be stiff enough that you can either unbend or clip the needle and slide it out of the roll without altering the shape of the Swiss roll. Our tissue processing core knows how to handle our tissue, but if you need to do it yourself, insure that the tissue has been in 70% ethanol at least overnight and then use gloves and forceps to remove the needle from the roll.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    January 18, 2012 - 1:24 PM
  40. What are the strains of mice used for this model? And what is the health status of the animals?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 10, 2012 - 11:16 AM
  41. We use C57Bl6 mice for our experiments. Our mice are healthy before treatment with DSS.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    December 13, 2012 - 1:04 PM
  42. Hello, I am writing a protocol to my University's IACUC to perform DSS induction of colitis.Should I put DSS in Hazardous material form?Is there any method to detect the DSS excretion in feces and urine?How can we deal with the waste from DSS (unused solution)?

    Thanks,

    Reply
    Posted by: Jinggang L.
    December 13, 2012 - 11:22 AM
  43. Our IACUC protocol dŒs not include DSS as a hazardous material and we pour waste DSS down the drain. As far as I know, there is not a method to detect DSS excretion in feces and urine.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    December 13, 2012 - 1:06 PM
  44. Hi
    In the materials you list Dextran Sulfate Sodium Salt USB Corp., Affymetrix 9011-18-1 mol wt 40,000-50,000.
    However when I check Affymetrix website, this catalog number belongs to a MW: 500,000 product (http://www.affymetrix.com/esearch/search.jsp?pd=131111&N=4²94967²93) . is this what you used or otherwise what is the correct catalog number. thanks!

    Reply
    Posted by: selcen o.
    May 6, 2013 - 10:50 AM
  45. I am so sorry for the confusion. The number listed in the protocol is the CAS# which is similar between the 500,000 and 50,000 M.W. DSS. The actual catalog number is 14489. This number should get you what you need (http://www.affymetrix.com/estore/browse/brand/usb/product.jsp?productId=130²61#1_1).

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    May 6, 2013 - 12:00 PM
  46. Thanks a lot for the catalog number!
    Could you please explain the injection of saline to prevent dehydration? How often and how much should it be injected? I guess all mice should get the same amount at the same time, right?
    And when the mice get sick, should we put some food on the bottom of the cage, or are they usually capable of getting the food themselves? thanks again.

    Reply
    Posted by: selcen o.
    May 13, 2013 - 3:44 PM
  47. We usually only inject mice that are not looking healthy and we generally do this as needed. I will only inject a 1ml bolus on a single day. You can repeat this the next day, but this is really just a last resort. We sacrifice them once they reach ²0% weight loss so they don't have undue stress. When the mice get sick, I do tend to try and put food in the bottom of the cage in case the mice aren't able to reach up into the food distributor. If the mice are getting so sick that you need to inject with PBS or move the food down, you may want to try a smaller concentration of DSS (²% or 1%) or perform the treatment for a shorter time. We have had several genotypes that don't handle the DSS as well and decreasing the concentration or treatment time really helps them. There is also facility to facility variability dependent on mouse microbiomes so my mice may be less sensitive than your mice to DSS and even your WTs might have different responses than mine. In short, we often need to tweak the protocol so that we can get injury while insuring survival for the extent of the protocol that we need to perform.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    May 13, 2013 - 4:29 PM
  48. thanks a lot, Caityln, you are really helping a lot because we have no experience in that.

    Reply
    Posted by: selcen o.
    May 14, 2013 - 4:56 AM
  49. Inducing colorectal cancer in rats: I am in a predicament; instead of the DSS Mw 40,000, I have ordered DSS (Mr 5,000) by accident. Unfortunately I noticed this too late and have a very limited time. I have read that the Mw of DSS does play a role in inducing colitis, whereby 5 kDa could induce milder form of colitis. I plan to inject my rats with AOM (12 mg/Kg), expose the rats to 2 cycles of 1 week of 2% DSS following 2 weeks of water. These rats are quite old, 12 weeks to be exact. They are also Wistar rats so at this time they are prone to develop cancer easily. However, I would like to know is using 5 kDa DSS worth it? Could you please provide me with some advice?

    Reply
    Posted by: Lynn C.
    February 16, 2014 - 6:30 AM
  50. Unfortunately, I do not think that Mr 5,000 will work.

    Reply
    Posted by: Christopher W.
    February 19, 2014 - 9:21 AM
  51. can we use dss with m.w 500.000 for induce colitis?

    Reply
    Posted by: flora s.
    January 29, 2015 - 9:41 PM
  52. Is there a difference between female and male mice? Which would should i choose?

    Reply
    Posted by: stu a.
    February 17, 2015 - 11:42 AM
  53. We have not noticed a difference with gender; however, as the environment is a strong contributor to the severity of colitis, I would recommend test experiments with male and female WT mice in your facility.

    Reply
    Posted by: Christopher W.
    February 17, 2015 - 12:24 PM
  54. Would you also have an advice on how to minimize the variability between the cages? I was considering to mix treated and not treated animals in the same cage (our treatment is injected). However I am afraid that the groups will have cross effects on each other.
    Thank you

    Reply
    Posted by: stu a.
    February 17, 2015 - 2:25 PM
  55. Is it plausible to use 500,000 mw DSS? 1-2% for induction oftumours with AOM, I thank all advice.

    Reply
    Posted by: VERONICA M.
    May 14, 2015 - 5:04 PM

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