Выполнение и обработка FNA Передней жировой ткани для амилоида

Published 10/30/2010
0 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Medicine
 

Erratum

Formal Correction: Erratum: Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid
Posted by JoVE Editors on 12/20/2010. Citeable Link.

Summary

Жир стремление площадкой является предпочтительным, минимально-инвазивных и низкая стоимость подхода по сравнению с другими методами для выявления амилоида для диагностики системного амилоидоза. Это видео статье показано, процедурный план выполнения жира стремление площадки с соответствующей обработки образцов для оптимального диагностического результата.

Cite this Article

Copy Citation

Shidham, V. B., Hunt, B., Jaradeh, S. S., Barboi, A. C., Devata, S., Hari, P. Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid. J. Vis. Exp. (44), e1747, doi:10.3791/1747 (2010).

Please note that all translations are automatically generated through Google Translate.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Исторически сложилось так, сердце, печень, почки и биопсии были выполнены, чтобы продемонстрировать амилоидных отложений в амилоидоза. Так как клинические проявления этого заболевания является так переменную и неспецифические, связанные с ними риски этих биопсий являются слишком большими для диагностической ценности. Другие сайты, которые имеют более низкий биопсии риска, таких как кожа или десен, также относительно инвазивных и дорогих. Кроме того, эти биопсии не всегда имеют достаточную депозиты амилоида установить диагноз. Жир стремление площадка продемонстрировала хорошие клинические корреляции с низкой стоимостью и минимальными заболеваемости. Тем не менее, Есть нет стандартных протоколов для выполнения данной процедуры или обработки атмосферный образца, что приводит к переменной и невоспроизводимых результатов. Наиболее часто используемые метода для выявления амилоида в ткани светло-зеленого двулучепреломления на конго окрашенные срезы использованием поляризационного микроскопа. Эта техника требует ячейки блока подготовки атмосферный материал. К сожалению, больных на ранней стадии амилоидоза имеют минимальное количество амилоидных что значительно снижает чувствительность Конго красный окрашенных ячейки блока разделы жира аспиратов площадку. Таким образом, ультраструктурным оценка жира аспиратов площадку с помощью электронной микроскопии следует использовать, учитывая его повышенную чувствительность для обнаружения амилоида. Эта статья демонстрирует простой и воспроизводимой процедуры для выполнения передней жира стремление площадкой для выявления амилоида использованием как окрашивания Конго красным разделов ячейки блока и электронной микроскопии для ультраструктурным идентификации.

Protocol

Введение

Системный амилоидоз сильно варьирует заболевание, которое относится к внеклеточным отложением различных белков, которые все вместе называются амилоида. Осаждение этих амилоидные фибриллы с бета плиссированные конфигурация приводит к различным клинические проявления в зависимости от органов, участвующих. Наиболее клинически значимых проявлений системного амилоидоза отмечаются, когда есть участие критических органов, таких как сердце, печень, и / или почек. Исторически эти участвуют органы были бы биопсию, чтобы продемонстрировать наличие амилоида. Эти умеренно инвазивных процедур, проводимых в том числе значительный риск кровотечения. Жир стремление площадку тех пор было показано, чтобы обеспечить надежную и неинвазивный метод для выявления амилоида в системный амилоидоз 1. Эта процедура существенно схожей с липосакцией подкожно-жировой клетчатки в передней брюшной стенке под местной анестезией для получения фиброзно-жировой ткани для оценки скудные депозитов амилоида в малой кровью стенок сосудов 2.

Наиболее часто используемые методы идентификации амилоида в ткани остается характерным яблочно-зеленый двулучепреломления картины видно, когда Конго красный окрашенных срезах визуализируются под микроскопом поляризованный свет 3. Когда жир стремление площадку осуществляется, Конго красные пятна может быть сделано либо на прямую смазывают слайдов или клеточных препаратов блок атмосферный жировой ткани. Однако у пациентов на ранних стадиях амилоидоза имеют скудную депозиты амилоида, что значительно снижает чувствительность Конго красный окрашенных ячейки блока разделы 4,5. Ультраструктурные оценка жира аспиратов площадку с помощью электронной микроскопии имеет лучшую воспроизводимость и улучшенной чувствительностью 4. Поэтому, рекомендуется представить весь жир аспиратов площадкой для подготовки ячейки блока и для выполнения электронной микроскопии 2.

Жир стремление площадкой является относительно низкая стоимость и неинвазивный метод для получения тканей для диагностики системного амилоидоза. В этой статье описывается процедура жира стремление площадку вместе с подробными сведениями об обработке образцов представить образец для окрашивания Конго красным и ультраструктурные оценки с помощью электронной микроскопии. В этом видео, мы демонстрируем это воспроизводимая и простая процедура для получения оптимального диагностического материала.

1. Выполнение FNA Передней жировой ткани

А. обезболивания в данной местности (рис. 1 и 2)

  1. Прием алкоголя тампоны или агента очищения кожи предпочитают конкретного учреждения, чистая кожа на нижнем квадранте области живота сбоку от средней линии и ниже пупка (рис. 1).
  2. Марк ромбовидной формы площадью около 2 х 2 дюйма, как показано на рисунке 1 с маркером.
  3. Аспирируйте примерно 10 мл 1% лидокаина с 18G иглу. Прикрепить 25G 1 ½ дюйма иглы шприца. Удалите пузырьки воздуха, нажав вертикально шприц, одновременно нажимая на поршень пока жидкость не обойтись и без воздушных пузырьков присутствуют.
  4. Обезболить вдоль границ ромбовидной области уже отмечены, как показано на рисунке 2. Начните с вставкой 25G иглу под кожу в точке и осторожно толкать иглу подкожно в точке X. Отойдите на поршень шприца, чтобы убедиться, что вы не в сосуде. Затем медленно толкать поршень проникнуть до 2,5 мл лидокаина (около ¼ от лидокаина в 10 мл шприц) при выводе иглу в точку, не давая игла вышла из кожи в точке А (рис. 2a3). С иглой по-прежнему под кожей изменить направление к точке Y (рис. 2A4) и нажмите иглой подкожно точки Y (рис. 2b1). Как и прежде, убедитесь, что игла не находится в сосуде и обойтись примерно в 2,5 мл лидокаина, медленно снять иглу через точку (рис. 2B3 через 2В4). Повторите аналогичные шаги, начиная с точки В и отпуск лидокаина подкожной от точки В к Х и В к Y (рис. 2c1 через 2d4). Предотвращение кровотечения из уколов и B фирмой применения стерильных кусок колеи.
  5. Теперь можно проверить, что этот район под наркозом, слегка касаясь кожи в течение анестезии ромбовидной кончиком / углу кусок марли хлопка, по сравнению с соседними ненаркотизированных кожи.

Б. Выполнение жира стремление площадки (рис. 3)

(Применение местной анестезии до выступления жира стремление площадки могут быть обойдены, в зависимости от региональных и индивидуальных предпочтений. Правильно выполнены FNAB процедуры для передних жира стремление площадки может быть завершена в одном укол. Однако в зависимости от болевого порога индивидуального пациента , маневрирования 18G иглу взад и вперед, чтобы ткань подкожно-жировой клетчатки относительно distresпеть. Обезболивания метод, описанный здесь достигается эффект только в двух уколов иглой с 25G и предотвращает боли с улучшением толерантности к процедуре.)

  1. Соберите 18G 1 ½ дюйма иглы на 10 мл шприца. Горы шприц иглой сборки в шприц сцепление ("FNAB сцепление / пистолет") для надлежащего применения и выпуска вакуума.
  2. Вставьте кончик иглы в подкожно-жировой клетчатки в очищены и анестезия ромбовидной области (рис. 3а).
  3. Полностью отказаться поршень шприца с иглой в подкожную ткань для создания вакуума (рис. 3б).
  4. Поддерживать вакуум и маневра иглы вперед и назад в различных направлениях в подкожно-жировой клетчатки (рис. 3в через 3i). Каждый удар должен быть как можно дольше с длиной иглы выбраны не давая игла вышла из кожи. Максимальная частота дискретизации достигается за счет изменения направления с каждым ударом (рис. 3i). Важно сохранить направление иглы касательной к серозной и параллельно поверхности кожи, чтобы избежать проколов брюшной полости.
  5. Фиброзно-жировой ткани накапливается в шприц. После достаточно фиброзно-жировой ткани фрагментов (до 1 мл фрагменты богатых кровь, смешанную образца) извлекаются, выпуск вакуумного полностью и удалить иглы (рис. 3 Кб).
  6. У пациента или помощник Приложите усилие на площади процедуру с площадки марли, чтобы предотвратить кровоизлияние крови.

2. Обработки образцов

  1. Место не менее 5-6 фрагменты фиброзно-жировой ткани в глутаральдегида решение для электронной микроскопии (рис. 4В).
  2. В зависимости от институциональных протокол, несколько мазков фрагменты фиброзно-жировой ткани может быть получен за счет распределения их между двумя предметными стеклами (рис. 4А).
  3. Оставшийся материал разрешается сгусток в шприц (это может занять 5-7 минут, в зависимости от времени свертывания) (рис. 4С).
  4. Аспирируйте 10% формалина в шприце, так что сгустки материала ткани фиброзно-жировой смещается от стены шприц и свободного плавания (рис. 4С2). Удалите поршень из шприца (рис. 4C3) и передачи сгустками ткани в фиброзно-жировой 10% формалина контейнер с открытым концом шприц противоположном конце сопла (рис. 4С4).
  5. Этикетка контейнеры надлежащим образом и представить глутаральдегида для электронной микроскопии и формалина для H & E раздел и Конго красное пятно для оценки под поляризационным микроскопом. Если мазки готовы, они могут быть обработаны в соответствии с протоколом отдельные лаборатории.

Рисунок 1
Рисунок 1. Площадь для анестезии для FNAB передней жировой ткани.

Рисунок 2
Рисунок 2. Обезболивания в регионе.

Рисунок 3
Рисунок 3. Выполнение FNAB передней жировой ткани.

Рисунок 4
Рисунок 4. Обработка передней жировой ткани аспирата, которые будут представлены в лабораторию для выявления амилоидных отложений.

3. Представитель Результаты

Рисунок 5
Рисунок 5. Амилоида в стенках мелких кровеносных сосудов фрагменты фиброзно-жировой ткани. Фиброзно-жировой ткани в формалине обработаны, парафин, окрашивали Конго красный, и рассмотрены поляризационные световой микроскопии. Амилоида в стенках мелких кровеносных сосудов показывает, зеленого яблока двулучепреломления (белая стрелка).

Рисунок 6
Рисунок 6. Ткань не хватает амилоидоза. Двулучепреломления зеленого яблока отсутствует в тканях различных пациентов без амилоидоза. Синий двулучепреломления (белая стрелка) коллагеновых волокон, как правило, присутствуют почти во всех образцах.

Рисунок 7
Рисунок 7. Фибриллы в соответствии с амилоида в стенки кровеносного сосуда. Электронная микрофотография прямые, неветвящиеся, случайно рассеянные 8-10 нм в диаметре волокон образована амилоида в стенки кровеносного сосуда.

Discussion

Диагностика амилоидоза, как правило, достигается при биопсии пораженных органов, таких как почки, печень и / или сердца. Такой подход имеет высокую диагностическую ценность, однако, является инвазивным и могут быть связаны с осложнениями, включая кровоизлияние 2. Ректально, десны, и биопсия костного мозга предпочтительным для диагностики как относительно менее инвазивных подход в 1960-х годов 6,7,8. Брюшной жир стремление площадке был зарегистрирован в 1973 году как безопасные, минимально инвазивных, простой и менее дорогостоящей процедурой для ткани диагноз системного амилоидоза 1. Тем не менее, детали процедуры и подход к обработке полученного образца не когерентно сообщается. Это видео и статье описывается процедура шаг за шагом.

Подход для выявления амилоида в жире стремление площадку, похоже, также не очень хорошо стандартизованный несколько исследований, сравнения и оценки различных подходов 1,5,6,7,8. Оценка передней жира аспиратов площадку с окрашивания Конго красным менее чувствительна с более низкими interobserver воспроизводимость особенно в ранние случаи амилоидоза со скудной депозиты амилоида 5. Immunohistochemistry осуществляется на фиксированных формалином и залитых парафином ячейке блока секций и Конго красной флуоресценции осуществляется на цитологию мазков были зарегистрированы для улучшения диагностической чувствительностью 9,10. Электронная микроскопия улучшает обнаружение и идентификация скудные фибрилл амилоида в небольших стен кровеносного сосуда в фиброзно-жировой ткани в жировой ткани аспиратов 4, 5. Основываясь на этой информации, в данной статье описывается обработка образца подготовить ячейки блоков (для оценки Конго красный окрашенных ячейки блока секции под поляризационный микроскоп для диагностики двулучепреломления зеленого яблока, а также для иммуногистохимии, как это указано) и электронной микроскопии. Однако в зависимости от выбранного подхода для оценки образцов для амилоида, он может быть подвергнут цитология мазков подготовка, подготовка ячейки блока и обработки данных для электронной микроскопии. Некоторые лаборатории проводить испытания на мазки готовят из атмосферный фрагментов ткани фиброзно-жировой и окрашивают конго для изучения флуоресценции 10.

Как правило, в конце амилоидоз, световой микроскопии с Конго красным поляризационной микроскопии может быть достаточно, однако на ранних стадиях заболевания конго окрашивания поляризационной микроскопии по разделам ячейки блока менее чувствительным и надежным для жировая ткань всасывает 4,5,11 . Другие специальные пятна в том числе тиофлавина T могут быть использованы с подобными ограничениями. Другие подходы для выявления амилоида включать оценку аспирата мазков для амилоида с Конго красным поляризационной микроскопии и флуоресценции 10. По нашему опыту этот метод менее воспроизводимым. Оценка кровеносных сосудов в жировой ткани для амилоида с помощью электронной микроскопии позволяет преодолеть эти ограничения 4,11. Дальнейшая характеристика амилоида была сообщает иммуноэлектронной микроскопии 12, однако эти методы не могут быть доступны широко невысшее профилактического учреждения.

Иглы, используемые для выполнения стремление процедуры могут быть классифицированы в зависимости от их размеров калибр на мелкие (21-25G), промежуточные (18-20G) и большой (например,-14G) 11. Передняя жира устремления площадки, как сообщается, проводится с помощью переменной датчиков от промежуточных (от 18 до 20G) до штрафа (от 21 до 22G) 2,10. Большая часть массы поражения атмосферным с тонкой иглы (например, 25G), чтобы получить хорошие мазки цитологии вместе с дополнительными проходит с более широкой иглой (например, 18G), чтобы получить дополнительный образец для сотовых блоков.

В передней жира стремление коврик, сплоченных ткани фиброзно-жировой не аспирата также с более тонкими иглами. Сотовые Блок подготовки и электронной микроскопии имеют важное значение для оценки малых стенки кровеносных сосудов в ткани фиброзно-жировой фрагментов в жир всасывает. Более широкие иглы (например, 18G) рекомендуются для получения диагностических адекватного материала 2,10. Так как процедура сравнима с обычными FNAB, жир стремление площадка называется FNAB хотя более широкий калибр иглы могут быть использованы для выполнения его 5.

Disclosures

Нет конфликта интересов.

Acknowledgements

Мы благодарим г-жа Бонни Phetteplace, Р. Н. за помощь во время видео-графические демонстрации FNAB процедуры.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Alcohol swabs
gauze pads
marking pen
10 mL syringes x2
1% lidocaine local anesthetic- If lidocaine is used alone, it causes an initial burning sensation after instillation. This can be prevented by using a 1:1 mixture of 1% lidocaine and 1% sodium-bi-carbonate
18 gauge(G) 1 ½ inch needles x2 (for performing FNAB)
25G 1 ½ inch needle for injecting local anesthetic
FNA syringe holder ("gun")
bandage
vial of glutaraldehyde for electron microscopy
biopsy container of 10% formalin

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Westermark, P., Stenkvist, B. A new method for the diagnosis of systemic amyloidosis. Arch Intern Med. 132, 522-523 (1973).
  2. Devata, S., Hari, P., Markelova, N., Li, R., Shidham, V. B. Detecting AL Amyloid in Abdominal fat pad aspirates: Is Congo red sufficient? Amyloid. Forthcoming Forthcoming.
  3. Merlini, G., Bellotti, V. Molecular Mechanisms of Amyloidosis. New Engl J Med. 349, (6), 583-596 (2003).
  4. Shidham, V. B., Kumar, N., Cihlar, K., Varsegi, G., Markelova, N., Li, R., Hari, P. Fine needle aspiration of abdominal fat pad for diagnosis of early amyloidosis: How can the clinical role of the test be improved? Mod Pathol. 20, Suppl ement 2. 1A-380A (2007).
  5. Halloush, R., Lavrovskaya, E., Mody, D., Lager, D., Truong, L. D. Diagnosis and typing of systemic amyloidosis: The role of abdominal fat pad fine needle aspiration. Cytojournal. 6, 24-24 (2010).
  6. Hazenberg, I. I., Rijswijk, C. V. an, H, M. Diagnostic Accuracy of Subcutaneous Abdominal Fat Tissue Aspiration for Detecting Systemic Amyloidosis and Its Utility in Clinical Practice. Arthritis Rheum. 54-546 (2006).
  7. Guy, C. D., Jones, C. K. Abdominal fat pad aspiration biopsy for tissue confirmation of systemic amyloidosis: specificity, positive predictive value, and diagnostic pitfalls. Diagn Cytopathol. 24, 181-185 (2001).
  8. Westermark, P. Diagnosing Amyloidosis. Scand J Rheumatol Suppl. 24, 327-329 (1995).
  9. Linke, R. P. Highly Sensitive Diagnosis of Amyloid and Various Amyloid Syndromes Using Congo Red Fluorescence. Virchow Arch. 436, 439-448 (2000).
  10. Giorgadze, T. A., Shiina, N., Baloch, Z. W., Tomaszewski, J. E., Gupta, P. K. Improved detection of amyloid in fat pad aspiration: an evaluation of Congo red stain by fluorescent microscopy. Diagn Cytopathol. 31, 300-306 (2004).
  11. DeMay, R. M. Fine Needle Aspiration Biopsy. The Art & Science of Cytopathology. ASCP Press, American Society of Clinical Pathology. Chicago. 465-46 (1996).
  12. Arbustini, E., Vrga, L., Concardi, M., Pallandini, G., Obici, L., Merlini, G. Electron and Immuno-electron Microscopy of Abdominal Fat Identifies and Characterizes Amyloid Fibrils in Suspected Cardiac Amyloidosis. Amyloid. 9, 108-114 (2002).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Video Stats