קצירת הזרע והזרעה מלאכותית של עכברים

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

פרוטוקול זה מדגים שיטות להפקת הזרע מן האשכים של זכרים ואז כשזרעו נקבות עכברים. הליך זה שימושי כאשר זמן מדויק יש צורך במחקרים התפתחותיים כמו גם עבודה מהונדס.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Duselis, A. R., Vrana, P. B. Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice. J. Vis. Exp. (3), e184, doi:10.3791/184 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

מכרסמים של Peromyscus הסוג (עכברים צבי) הם היונקים הנפוצים ביותר ילידי צפון אמריקה. מינים Peromyscus משמשים מגוון רחב של מחקר כולל טוקסיקולוגיה, אפידמיולוגיה, אקולוגיה, התנהגות, מחקרים גנטיים. הנה הם לספק מודל שימושי עבור הפגנות של הזרעה מלאכותית.

שיטות דומות לאלה המוצגות כאן בעבר שימוש במחקרים העכבר כמה צבאים, עדיין אין פרוטוקול מפורט פורסמו. כאן אנו מדגימים את השיטה הבסיסית של הזרעה מלאכותית. שיטה זו כרוכה לחילוץ האשכים של מכרסם, ואז לבודד את הזרע מן האשך ואת הזרע הזרע. הזרע בשלה, עכשיו בתערובת החלב, ממוקמים מערכת הרבייה של הנקבה בזמן הביוץ. הפריה נחשבת 0 יום התזמון של התפתחות העובר. עוברים לאחר מכן, ניתן לאחזר את נקודת הזמן הרצוי מניפולציות.

הזרעה מלאכותית ניתן להשתמש במגוון של מינים מכרסם בו העובר העיתוי המדויק הוא קריטי או קשה להשיג. טכניקה זו היא חיונית עבור מינים או זנים (כולל רוב Peromyscus) אשר לא יכול להזדווג באופן מיידי ו / או שם ההזדווגות קשה להעריך. בנוסף, הזרעה מלאכותית מספק התזמון המדויק להתפתחות העובר או מיפוי התקדמות התפתחותית ו / או עבודה מהונדס. מספר מופחת של בעלי חיים יכול לשמש מאז ההפריה מובטחת. שיטה זו הייתה חיונית לקידום מערכת Peromyscus, ויהיה בתקווה להפיק תועלת גם לאחרים.

Protocol

הזרעה מלאכותית

הזרעה מלאכותית משמש במקום הזדווגויות טבעי כדי להגדיל את הסיכוי שכל הנקבות יש רצון להיכנס להריון. 2 זכר שימש כל 1 הנקבות superovulated או נקבה ידוע להיות הייחום. Epididymides caudae מעכברים זכרים בוגרים הוצבו השעיה חלב 9% ופרוסים לפתוח עם 18 מחטים מד. הזרע היה מותר לשחות בחופשיות במשך כמה דקות ואז epididymides נלקחו מתוך התערובת. המתלים הוערך באמצעות מיקרוסקופ עבור מפגש והזרע ניעתי. מד בוטה 22 ½ 1 אינטש מחט ארוכה שימש לנהל את הזרע. לכופף 120 ° הוצב על ה 3 / 4 לאורך המחט. המחט המוחדרת לנרתיק עד לעיקול ו .025 - 0.05mls מוזרק. אם עוזר משמש להחזיק את הנקבה בעמדה המתאימה, שימוש בהרדמה אינו נחוץ.

הכנה

  1. השתמש 4 זכרים ונקבות עבור 6
  2. להרדים את הזכרים ביבר
  3. הכן כ 5 מ"ל של חלב 9% לעומת אבקת חלב
  4. מכניסים 1.5 מ"ל בצלחת פטרי קטן
  5. חותכים את epididymus ואת הזרע הזרע
  6. מכניסים 1.5ml חלב 9%
  7. השימוש בשתי 18 מחטים מד, באמצעות תנועה חיתוך ארוך עם מחטים, פרוסה לפתוח את epididymus ואת הזרע הזרע לשחרר את הזרע
  8. קח את שאריות רקמת ולבדוק הזרע במיקרוסקופ

הזרקה

  1. שימוש במחט קהה זווית 120 °
  2. החזק העכבר ביד להזריק תערובת. אם לא נוח עם אדם אחד מחזיק והזרקת, שני אנשים יכולים לשמש. הרדמה לא אמור לשמש, כמו על אחד יודע איך זה יכול להשפיע על ההליך.
  3. השתמש 0.05ml של תערובת הזרע / חלב לכל נקבה

נמען נקבות

  1. האם למרוח בנרתיק על הנקבות הנמען (בזמן הזה הנקבות הנמען צריך להיות proestrus / ייחום)
  2. נקבות שלא הגיעו ייחום על ידי יום 5 צריכה כנראה לא בשימוש

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

אני רוצה להודות מייק דיואי ממרכז במלאי Peromyscus הגנטי של תובנה חשובה שלו, סבלנות וידע על רבייה מכרסמים.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Petri Dish Tool Fisher Scientific 08-772-30
18 gauge needle Tool BD Biosciences 305195
Powdered milk Reagent Any Supplier
1 ml syringe Tool National Scientific Company S7510-1
Forceps Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5060
Scissors Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5882
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Reagent GIBCO, by Life Technologies 14200-075
22 gauge blunt needle Tool Give to me

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Comments

15 Comments

  1. can you tell me the resolution power of the microscope at which you have shown the video and the make of the mcroscope used.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 17, 2007 - 12:56 AM
  2. The total magnification to do the AI is between 10-²0x depending on the user for basic dissection. The sperm can be seen at 400x

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 1, 2007 - 2:09 PM
  3. Hello Amanda!  Thank for this article. I d like if you can give me more information about the powered milk, and if there is any posibility of create "make in home" powered milk. Too , if you can please give me the aprox. milimeters that need introduce the nedlle into the vagina. You understand my english? Thank you. Carolina (from Buenos Aires, Argentina)

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 29, 2008 - 9:09 AM
  4. Hi Carolina, The milk is a commercial powdered milk bought from a regular grocery store. I am not sure what it contains if you wanted to make it at home. A little less than 1 cm of the needle was inserted into the vagina for sperm delivery but if you want to test it...I would use a dead mouse to check the insertion length when making a new needle. Good luck Amanda  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 15, 2008 - 12:19 PM
  5. Would there be any difference in the dimention of the insemination needle for rats. Is there a non-invasive method of extracting sperm in rats. How can the vaginal smear indicate prŒstrus/estrus.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 26, 2008 - 2:28 AM
  6. I know it is been a while since you posted the video. But what is the success rate of this protocol? thanks Ming

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 11, 2008 - 11:45 AM
  7. Amanda, Our lab is just beginning to look into artificial insemination.  After watching your video and looking at a few other artificial insemination protocols, I have a couple of questions: (1) How to you assess or induce ovulation? (²) How do you induce pseudopregnancy? Thank you, Rob

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 2, 2009 - 6:02 PM
  8. Hola, respuesta para Robert Stiles, mira si tu problema es matar a los machos, lo que puedes hacer castrar a los animales, de esa manera no es necesario sacrificarlos. Por lo tanto puedes obtener los espermas necesarios sin sacrificar al animal.   Saludos desde México Roberto Lazzarini, Biologo experimental    

    Reply
    Posted by: Roberto L.
    January 29, 2009 - 8:45 PM
  9. Hy Amanda, I would like to know  some things: 1 - what is your success rate? ² - Do you use the vaginal tampon like described by LECKIE et al, 1973 (Biology of Reproduction, Vol 9, 4²0-4²5)? 3 - I tested the techinique using dye solution and, afterwards, I sacrified the female, but I didn't see any solution inside the uterus. Do you introduce the needle in the cervix (like in human intra-uterine insemination) or you just put the needle very closely to it. Because don't have how to have sure about introducing into the cervix, unless using a special speculus. Thank you Daniela  

    Reply
    Posted by: Daniela F.
    March 4, 2009 - 9:44 AM
  10. Please send me the full video of collection of sperm from mice. Because i could not able to see the full video content in my institution so send full video to my mail. thanking you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 18, 2009 - 1:18 AM
  11. Hi, please contact us at support@jove.com and we'll see what we can do.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 18, 2009 - 3:19 PM
  12. hi Amanda ,please Iwant a copy of the video and any related subjects if you can support them to me I will very gratful .
    with my regards

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 9, 2009 - 9:16 AM
  13. do you induce pseudopregnancy in the recipient female or do
    you literally just inject the donor sperm??
    If you induce how do you do this?
    What are the pregnancy rates like from using this AI?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 29, 2010 - 4:50 AM
  14. Hi dear Amanda, I want to collect semen from rat, but when I removed the seminal vesicles and I cut them, semen was coagulated immediately. . In fact I need a protocole for rat semen collection. Thanks for help.
    Ameneh immunology MS student

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 12, 2011 - 8:52 AM
  15. Good day maam! Can i ask the procedure how to extract the sperm form the cauda epididymis? thank you.

    Reply
    Posted by: jamee d.
    November 23, 2012 - 6:55 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics