수확 정자와 마우스의 인공 수정

Published 4/28/2007
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Biology

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Summary

이 프로토콜은 남성의 testes에서 정자를 추출 후 여성 쥐를 inseminating하는 방법을 보여줍니다. 정확한 시간 발달 연구에서뿐만 아니라 유전자 변형 작업 필요한 경우이 절차는 유용합니다.

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Duselis, A. R., Vrana, P. B. Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice. J. Vis. Exp. (3), e184, doi:10.3791/184 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

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Abstract

속의 Peromyscus (사슴 마우스)의 설치류는 가장 널리 북미 포유류입니다. Peromyscus 종은 독성학, 역학, 생태, 행동, 그리고 유전자 연구를 포함한 연구의 다양한 사용됩니다. 여기 그들은 인공 수정의 데모에 대한 유용한 모델을 제공합니다.

여기에 표시된 것과 유사한 방법은 이전에 여러 사슴 마우스 연구에 사용되고 있고, 아직 자세한 프로토콜은 공개되지 않았습니다. 우리가 인공 수정의 기본 방법을 보여줍니다. 이 방법은 epididymis와 중이야의 deferens에서 정자를 분리 후, 설치류에서 testes를 추출 알아볼 수 있습니다. 이제 우유 혼합물의 성숙한 정자는, 배란의 시간에 여성의 생식 요로에 배치됩니다. 수정은 배아 개발의 타이밍에 대한 당일 0으로 계산됩니다. 배아는 다음 원하는 시간 지점에서 검색과 조작하실 수 있습니다.

인공 수정은 정확한 배아시기 얻기 위해 중요하거나 어려운 쥐 종 다양한에서 사용할 수 있습니다. 이 기술은 즉시 및 / 또는 어디에 짝짓기가 평가하는 어려운 친구되지 않을 수도 있습니다 종 또는 변종 (대부분의 Peromyscus 포함)에 대한 매우 중요합니다. 또한, 인공 수정은 개발 진행 및 / 또는 유전자 변형 작업을 매핑에 중 배아 개발을위한 정확한 타이밍을 제공합니다. 수정이 보장되어 있기 때문에 동물의 감소 번호를 사용할 수 있습니다. 이 방법은 Peromyscus 시스템을 발전에 필수적인되었으며, 희망뿐만 아니라 다른 사람을 도움이 될 것입니다.

Protocol

인공 수정

인공 수정은 모든 여성이 임신 될 것을 가능성을 증가하는 대신 자연 matings의하는 데 사용됩니다. 이 남성은 매일 한 superovulated 여성 또는 estrous 것으로 알려진 여성 사용되었다. 성숙한 수컷 생쥐에서 caudae epididymides은 9 % 우유 정지에 배치 18 게이지 바늘로 열려 슬라이스되었습니다. 정자는 몇 분 동안 자유롭게 수영을 허용했고 다음 epididymides는 혼합물에서 찍은. 정지는 운동성이있는 정자와 합류에 대한 현미경으로 평가했다. 무딘 22 게이지 1 ½ 인치 긴 바늘은 정자를 관리하기 위해 사용되었습니다. 120 ° 벤드는 바늘 아래 4분의 3 일하는 방법에 대한 배치했다. 0.05mls 주입 - 주사 바늘을 구부와 0.025로 질 속에 삽입되었다. 조수가 적절한 위치에 여성을 보유하는 데 사용되는 경우, anesthetics의 사용은 필요하지 않습니다.

준비

  1. 6 여성 4 수컷을 사용
  2. 동식물 사육장에서 수컷를 안락사
  3. 분유에서 9 %의 우유 약 5 ML 준비
  4. 작은 페트리 접시에 넣고 1.5 ML
  5. epididymus 및 중이야의 deferens을 잘라
  6. 9 % 우유 1.5ml에 넣어
  7. 이 18 게이지 바늘을 사용하고, 바늘과 긴 절삭 운동을 사용하여 정자를 공개 epididymus 및 중이야의 deferens를 열려 슬라이스
  8. 조직 남은 꺼내와 현미경으로 정자를 확인

주사

  1. 120 ° 각도로 무딘 바늘을 사용하여
  2. 손으로 마우스를 잡고 혼합물을 주입. 보관 및 주입 한 사람이 불편하면, 두 사람이 사용할 수 있습니다. 이 절차에 영향을 미칠 수 방법을 알고 하나로서 더 마취제가 사용되지 않을 것입니다.
  3. 여성 당 정자 / 우유 믹스 0.05ml를 사용하여

수신자 여성

  1. 받는 여성에서 질 얼룩 (이 시간에받는 여성은 proestrus / estrus에있을 DO)
  2. 주 5 estrus에 도달하지 않은 여자는 아마 사용하지 말아야

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Acknowledgements

나는 쥐 복제에 Peromyscus 유전자 증권 그의 귀중한 통찰력 센터, 인내, 그리고 지식의 마이크 듀이 감사하고 싶습니다.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Petri Dish Tool Fisher Scientific 08-772-30
18 gauge needle Tool BD Biosciences 305195
Powdered milk Reagent Any Supplier
1 ml syringe Tool National Scientific Company S7510-1
Forceps Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5060
Scissors Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5882
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Reagent GIBCO, by Life Technologies 14200-075
22 gauge blunt needle Tool Give to me

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Comments

15 Comments

  1. can you tell me the resolution power of the microscope at which you have shown the video and the make of the mcroscope used.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 17, 2007 - 12:56 AM
  2. The total magnification to do the AI is between 10-²0x depending on the user for basic dissection. The sperm can be seen at 400x

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 1, 2007 - 2:09 PM
  3. Hello Amanda!  Thank for this article. I d like if you can give me more information about the powered milk, and if there is any posibility of create "make in home" powered milk. Too , if you can please give me the aprox. milimeters that need introduce the nedlle into the vagina. You understand my english? Thank you. Carolina (from Buenos Aires, Argentina)

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 29, 2008 - 9:09 AM
  4. Hi Carolina, The milk is a commercial powdered milk bought from a regular grocery store. I am not sure what it contains if you wanted to make it at home. A little less than 1 cm of the needle was inserted into the vagina for sperm delivery but if you want to test it...I would use a dead mouse to check the insertion length when making a new needle. Good luck Amanda  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 15, 2008 - 12:19 PM
  5. Would there be any difference in the dimention of the insemination needle for rats. Is there a non-invasive method of extracting sperm in rats. How can the vaginal smear indicate prŒstrus/estrus.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 26, 2008 - 2:28 AM
  6. I know it is been a while since you posted the video. But what is the success rate of this protocol? thanks Ming

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 11, 2008 - 11:45 AM
  7. Amanda, Our lab is just beginning to look into artificial insemination.  After watching your video and looking at a few other artificial insemination protocols, I have a couple of questions: (1) How to you assess or induce ovulation? (²) How do you induce pseudopregnancy? Thank you, Rob

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 2, 2009 - 6:02 PM
  8. Hola, respuesta para Robert Stiles, mira si tu problema es matar a los machos, lo que puedes hacer castrar a los animales, de esa manera no es necesario sacrificarlos. Por lo tanto puedes obtener los espermas necesarios sin sacrificar al animal.   Saludos desde México Roberto Lazzarini, Biologo experimental    

    Reply
    Posted by: Roberto L.
    January 29, 2009 - 8:45 PM
  9. Hy Amanda, I would like to know  some things: 1 - what is your success rate? ² - Do you use the vaginal tampon like described by LECKIE et al, 1973 (Biology of Reproduction, Vol 9, 4²0-4²5)? 3 - I tested the techinique using dye solution and, afterwards, I sacrified the female, but I didn't see any solution inside the uterus. Do you introduce the needle in the cervix (like in human intra-uterine insemination) or you just put the needle very closely to it. Because don't have how to have sure about introducing into the cervix, unless using a special speculus. Thank you Daniela  

    Reply
    Posted by: Daniela F.
    March 4, 2009 - 9:44 AM
  10. Please send me the full video of collection of sperm from mice. Because i could not able to see the full video content in my institution so send full video to my mail. thanking you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 18, 2009 - 1:18 AM
  11. Hi, please contact us at support@jove.com and we'll see what we can do.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 18, 2009 - 3:19 PM
  12. hi Amanda ,please Iwant a copy of the video and any related subjects if you can support them to me I will very gratful .
    with my regards

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 9, 2009 - 9:16 AM
  13. do you induce pseudopregnancy in the recipient female or do
    you literally just inject the donor sperm??
    If you induce how do you do this?
    What are the pregnancy rates like from using this AI?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 29, 2010 - 4:50 AM
  14. Hi dear Amanda, I want to collect semen from rat, but when I removed the seminal vesicles and I cut them, semen was coagulated immediately. . In fact I need a protocole for rat semen collection. Thanks for help.
    Ameneh immunology MS student

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 12, 2011 - 8:52 AM
  15. Good day maam! Can i ask the procedure how to extract the sperm form the cauda epididymis? thank you.

    Reply
    Posted by: jamee d.
    November 23, 2012 - 6:55 AM

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