Skörd sperma och artificiell insemination av Möss

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

Detta protokoll visar metoder för att utvinna spermier från testiklarna på hanar och sedan inseminating honmöss. Detta förfarande är användbart när exakt tid behövs utvecklingsstudier samt transgena arbete.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Duselis, A. R., Vrana, P. B. Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice. J. Vis. Exp. (3), e184, doi:10.3791/184 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Gnagare av släktet Peromyscus (rådjur möss) är de vanligaste infödda nordamerikanska däggdjur. Peromyscus arter används i ett brett spektrum av forskning inklusive toxikologi, epidemiologi, ekologi, beteende och genetiska studier. Här de ger en användbar modell för demonstrationer av artificiell insemination.

Metoder liknande dem som visas här har tidigare använts i flera studier rådjur mus, men inga detaljerade protokoll har publicerats. Här kan vi visa den grundläggande metoden för artificiell insemination. Denna metod innebär att utvinna testiklarna från gnagare, sedan isolera spermier från bitestiklarna och sädesledarna. Den mogna spermier, nu i en mjölk-blandning, placeras i honans reproduktionsorgan vid tiden för ägglossning. Befruktning räknas som dag 0 för tidpunkten för embryots utveckling. Embryon kan sedan hämtas vid önskad tid-punkt och manipuleras.

Artificiell insemination kan användas i en mängd olika arter av gnagare där exakta embryot timing är avgörande, eller svårt att få. Denna teknik är avgörande för arter eller stammar (inklusive de flesta Peromyscus) som inte kan para sig omedelbart och / eller där parning är svårt att bedöma. Dessutom ger insemination exakt tidpunkt för embryots utveckling antingen i kartläggningen utvecklingsarbete pågår och / eller transgena arbete. Minskat antal djur kan användas då befruktning är garanterad. Denna metod har varit avgörande för att främja Peromyscus systemet, och kommer förhoppningsvis att gynna andra.

Protocol

Artificiell insemination

Artificiell insemination används i stället för naturliga parningar för att öka chanserna att alla kvinnor har att bli gravid. 2 män har använts för varje 1 superovulated honor eller en kvinnlig känd för att vara i estrous. Den caudae bitestiklar från mogna hanmöss placerades i en 9% mjölk fjädring och skivad öppna med 18 gauge nålar. Spermierna fick simma fritt i några minuter och sedan bitestiklar togs från blandningen. Suspensionen utvärderades med ett mikroskop för sammanflödet och rörliga spermier. Ett trubbigt 22 gauge 1 ½ cm lång nål användes för att administrera spermier. En 120 ° böj placerades cirka 3 / 4: e vägen ner nålen. Nålen sattes in i slidan upp till böja och 0,025 - 0.05mls injiceras. Om en assistent används för att hålla den kvinnliga i lämpligt läge, är användningen av bedövning inte behövs.

Förberedelser

  1. Använd 4 hanar i 6 tikar
  2. Euthanize hanar vid vivarium
  3. Förbered ca 5 ml 9% mjölk från mjölkpulver
  4. Sätt 1,5 ml i små petriskål
  5. Klipp ut epididymus och sädesledaren
  6. Sätt i 1,5 ml med 9% mjölk
  7. Med hjälp av två 18 gauge nålar, och med långa skärande rörelse med nålar, skiva öppna epididymus och sädesledaren att frigöra spermier
  8. Ta ut vänster över vävnaden och kontrollera om spermier i mikroskop

Injektion

  1. Använd trubbig nål vid 120 ° vinkel
  2. Håll musen i handen och injicera blandning. Om obekväm med en person som innehar och injicera, kan två människor användas. Inga bedövningsmedel ska användas, som på en vet hur detta kan påverka proceduren.
  3. Användning 0,05 ml sperma / mjölk blandningen per hona

Mottagare kvinnor

  1. Har vaginal smetar på mottagaren kvinnor (vid denna tid mottagaren honorna ska vara i proestrus / brunst)
  2. Kvinnor som inte har nått estrus av Dag 5 bör nog inte användas

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

Jag vill tacka Mike Dewey från Peromyscus genetiska Stock Centrum för hans värdefulla insikt, tålamod och kunskap om gnagare reproduktion.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Petri Dish Tool Fisher Scientific 08-772-30
18 gauge needle Tool BD Biosciences 305195
Powdered milk Reagent Any Supplier
1 ml syringe Tool National Scientific Company S7510-1
Forceps Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5060
Scissors Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5882
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Reagent GIBCO, by Life Technologies 14200-075
22 gauge blunt needle Tool Give to me

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Comments

15 Comments

  1. can you tell me the resolution power of the microscope at which you have shown the video and the make of the mcroscope used.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 17, 2007 - 12:56 AM
  2. The total magnification to do the AI is between 10-²0x depending on the user for basic dissection. The sperm can be seen at 400x

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 1, 2007 - 2:09 PM
  3. Hello Amanda!  Thank for this article. I d like if you can give me more information about the powered milk, and if there is any posibility of create "make in home" powered milk. Too , if you can please give me the aprox. milimeters that need introduce the nedlle into the vagina. You understand my english? Thank you. Carolina (from Buenos Aires, Argentina)

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 29, 2008 - 9:09 AM
  4. Hi Carolina, The milk is a commercial powdered milk bought from a regular grocery store. I am not sure what it contains if you wanted to make it at home. A little less than 1 cm of the needle was inserted into the vagina for sperm delivery but if you want to test it...I would use a dead mouse to check the insertion length when making a new needle. Good luck Amanda  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 15, 2008 - 12:19 PM
  5. Would there be any difference in the dimention of the insemination needle for rats. Is there a non-invasive method of extracting sperm in rats. How can the vaginal smear indicate prŒstrus/estrus.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 26, 2008 - 2:28 AM
  6. I know it is been a while since you posted the video. But what is the success rate of this protocol? thanks Ming

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 11, 2008 - 11:45 AM
  7. Amanda, Our lab is just beginning to look into artificial insemination.  After watching your video and looking at a few other artificial insemination protocols, I have a couple of questions: (1) How to you assess or induce ovulation? (²) How do you induce pseudopregnancy? Thank you, Rob

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 2, 2009 - 6:02 PM
  8. Hola, respuesta para Robert Stiles, mira si tu problema es matar a los machos, lo que puedes hacer castrar a los animales, de esa manera no es necesario sacrificarlos. Por lo tanto puedes obtener los espermas necesarios sin sacrificar al animal.   Saludos desde México Roberto Lazzarini, Biologo experimental    

    Reply
    Posted by: Roberto L.
    January 29, 2009 - 8:45 PM
  9. Hy Amanda, I would like to know  some things: 1 - what is your success rate? ² - Do you use the vaginal tampon like described by LECKIE et al, 1973 (Biology of Reproduction, Vol 9, 4²0-4²5)? 3 - I tested the techinique using dye solution and, afterwards, I sacrified the female, but I didn't see any solution inside the uterus. Do you introduce the needle in the cervix (like in human intra-uterine insemination) or you just put the needle very closely to it. Because don't have how to have sure about introducing into the cervix, unless using a special speculus. Thank you Daniela  

    Reply
    Posted by: Daniela F.
    March 4, 2009 - 9:44 AM
  10. Please send me the full video of collection of sperm from mice. Because i could not able to see the full video content in my institution so send full video to my mail. thanking you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 18, 2009 - 1:18 AM
  11. Hi, please contact us at support@jove.com and we'll see what we can do.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 18, 2009 - 3:19 PM
  12. hi Amanda ,please Iwant a copy of the video and any related subjects if you can support them to me I will very gratful .
    with my regards

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 9, 2009 - 9:16 AM
  13. do you induce pseudopregnancy in the recipient female or do
    you literally just inject the donor sperm??
    If you induce how do you do this?
    What are the pregnancy rates like from using this AI?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 29, 2010 - 4:50 AM
  14. Hi dear Amanda, I want to collect semen from rat, but when I removed the seminal vesicles and I cut them, semen was coagulated immediately. . In fact I need a protocole for rat semen collection. Thanks for help.
    Ameneh immunology MS student

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 12, 2011 - 8:52 AM
  15. Good day maam! Can i ask the procedure how to extract the sperm form the cauda epididymis? thank you.

    Reply
    Posted by: jamee d.
    November 23, 2012 - 6:55 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics