תרבות Organotypic של הרשתית הארנב למבוגרים

Published 4/29/2007
3 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

מאמר זה מדגים את לנתיחה ו הדגירה של הרשתית ארנב החלקיקים בתיווך העברת גנים של פלסמידים או קידוד ה-GFP מגוון רחב של סמנים subcellular לתאי הגנגליון ברשתית.

Cite this Article

Copy Citation

Lye, M. H., Jakobs, T. C., Masland, R. H., Koizumi, A. Organotypic Culture of Adult Rabbit Retina. J. Vis. Exp. (3), e190, doi:10.3791/190 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

מערכות תרבות Organotypic של רקמות עצביות תפקודית הם כלי חשוב במחקר הנוירוביולוגי. באופן אידיאלי, מערכת כזו צריכה להיות תואמת שיטות הדמיה, מניפולציה גנטית, הקלטה אלקטרו. כאן אנו מציגים שלבי הביניים פשוט רקמת תרבות מערכת רשתית ארנב מבוגר שאינו דורש ציוד מיוחד ותחזוקה מעט מאוד. אנו מדגימים את לנתיחה ו הדגירה של הרשתית ארנב החלקיקים בתיווך העברת גנים של פלסמידים או קידוד ה-GFP מגוון רחב של סמנים subcellular לתאי הגנגליון ברשתית. הרשתיות הארנב תרבותי בדרך זו ניתן לשמור אותן בחיים עד 6 ימים עם מעט מאוד שינויים של המבנה האנטומי הכוללת או את המורפולוגיה של הפרט גנגליון, תאים amacrine.

Protocol

הכנת כדורי אקדח גנים (GOLD)

  1. בצע 100x PVP (0.5mg/ml) ב EtOH 100%.
  2. לשקול את 30mg זהב BioRad 1.6 מיקרון microcarrier ומקום אותו לתוך צינור Eppendorf 1.5 מ"ל.
  3. לחשב את כמות פלסמיד צריך לתת ריכוז של 0.5-3 מיקרוגרם זהב פלסמיד / מ"ג, והמקום הפלסמיד לתוך הצינור עם microcarriers זהב. שלב פלסמידים מספר במידת הצורך.
  4. תביאו נפח פלסמיד ל μl 100 עם מים מזוקקים.
  5. הוסף 100 μl של spermidine 0.05M לתוך הצינור. וורטקס צינור 30 שניות.
  6. וורטקס 1 דקה במלוא המהירות. Sonicate במשך 3-5 דקות ..
  7. יבש אורך מתאים של צינורות Tefzel במנגנון PDS-1000/He Biorad במשך 15 דקות.
  8. לאחר sonication, מערבולת של 1-2 דקות במהירות מלאה. הפחת את מהירות לאט, כדי לאפשר את הצינור להיפתח בעוד vortexing.
  9. הוסף 100 μl של 1 M CaCl 2 לאט להפיל את צינור חכם בעוד vortexing.
  10. השאר צינור בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות.
  11. בצע 5 מיקרון המסנן.
    1. קח שני מזרקים 5 מ"ל ללא מחטים.
    2. הסר את הבוכנה, ולנתק את כומתות שחורות. לוקח מספריים קטנים, מנותקים חלק הכובע השחור לתת טבעת. חזור על הבוכנה השני שתי טבעות נטו.
    3. כריך 5 מיקרון (חלקים קטנים, Inc ניילון לסנן, בקוטר ½ אינץ') מסנן בין שתי טבעות, ולדחוף את הכריך לתוך קצה המזרק.
    4. להשתלשל מזרק על בקבוק 50 מ"ל קונית.
  12. לאחר 10 דקות, מערבולת הצינור למשך 30 שניות.
  13. צנטריפוגה הצינור למשך 30 שניות ולשמור את גלולה.
  14. הוסף 1ml של EtOH 100% גלולה. השתמש קצה פיפטה כדי לשבור את גלולה, והמערבולת 30 שניות. ספין 30 שניות ולהסיר EtOH. חזור על 2 יותר פעמים.
  15. הוסף 1ml של EtOH 100% על גלולה (להיפרד קצה). המקום הזה בתוך 5 מיקרון מסנן ולתת לו לזרום דרך על ידי כוח המשיכה לתוך שפופרת 50 מ"ל חרוטי. השתמש EtOH נוספים במידת הצורך לשטוף את הצינורית או לעזור עם לזרום.
  16. ספין שפופרת 50 מ"ל ב 2000rpm בצנטריפוגה למשך 5-10 דקות. הסר supernatant, לשמור גלולה.
  17. בהתאם לצפיפות הרצויה של microcarriers הצורך, להוסיף 800μl-1.5ml EtOH 100% המקביל 8 μl-15 μl פתרון PVP.
  18. מערבולת ומיד ללכת למנגנון PDS-1000/He Biorad.
  19. Biorad מנגנון PDS-1000/He
    1. נתק את הצינור המחבר בין מיכל הדלק לצינור N2 הייבוש
    2. קח את ייבוש צינורות Tefzel ממכונה
    3. הכנס קצה אחד לתוך שפופרת 50 מ"ל חרוטי, ולצרף מזרק לקצה השני של הצינור. תמצצי slurry חום לאמצע הצינור.
    4. הכנס בחזרה צינורות לתוך המכונה.
    5. חכו (ללא סיבוב) עבור 4 דקות
    6. לאחר 4 דקות, למצוץ את EtOH לאט ובזהירות, כדי לוודא שלא להפריע microcarriers.
    7. סובב את צינורות דקה 1.
    8. אחרי דקה 1, לחבר את הצינור המחבר את מיכל הגז N 2 הצינור ייבוש ולתת צינורות יבש במשך 15 דקות.
  20. לאחר 15 דקות, לחתוך את צינורות בגודל כדור לשמש מיד או מאוחסנים ב 4 מעלות צלזיוס exsiccator. תבליטים ניתן לאחסן עד 3 חודשים.

הכנת נשק גן

  1. המקום כדורים במחסנית. כל תכשיט של הרשתית ניתן נורה בכדורים 1-3.
  2. הכנס את המחסנית לתוך הנשק הגן ולצרף את האקדח למקור הליום. הגדר את הלחץ 110 psi.

הכנה של התקשורת

  1. Dissection בינוני

    1 בקבוק איימס פתרון (Sigma, 8.8g)
    1.9 גרם סודיום ביקרבונט
    עט 10 מ"ל 1% / סטרפטוקוקוס / L-גלוטמין (1:100) (Gibco / Invitrogen)
    990 מ"ל מים מזוקקים עד 1 ליטר
    -------------------------------
    1 ליטר


  2. סינון בינוני לנתיחה באמצעות מסנן 0.22 מיקרומטר.
  3. בינוני דגירה (500ml)

    485 מ"ל של התקשורת לנתיחה מסוננים
    5 מ"ל של תוספת 1% N2 (Gibco / Invitrogen)
    10 מ"ל סרום סוס 1% (Sigma)
    500 μl של פנול אדום
    -------------------------------------------------- -
    0.5 ליטר


  4. סינון בינוני הדגירה באמצעות מסנן 0.22 מיקרומטר.
  5. הבועה 2 O לתוך המדיום לנתיחה במשך 15 דקות לפני תחילת פרוטוקול קצירת הרשתית.

הכנת בתאי הדגירה של הרשתית

  1. מתחת למכסה המנוע, למלא מספר 60 מנות עמוק מ"מ (בתאי הדגירה, Nunc) עם 25 מ"ל של מדיום הדגירה. מספר המנות תלוי במספר של retאינאס הצורך.
  2. מניחים לעמוד לסנן לתוך כל מנה עמוק. רק עצות מאוד לעמוד לא צריך להיות שקוע.
  3. שמים את כל הכלים עמוק לתוך החממה עד הרשתיות מוכנים.
  4. למלא שני 100 מ"מ בצלחות פטרי ומביאים הספסל לנתיחה.

הכנה של הרשתית ארנב

  1. הקורבן ארנב על פי פרוטוקולים הוקמה. להלן אינו חייב להתבצע מתחת למכסה המנוע.
  2. עם מספריים זוויתי, להכניס אותו מאחורי העין לתוך ארובת העין של הארנב, חיתוך ממברנות עצב אופטי המצורפים העין.
  3. הרם בעדינות את העין לשטוף אותו עם התקשורת לנתיחה מחומצן.
  4. מניחים את העין (קרנית כלפי מעלה) לתוך הבאר של מבצעה עין ולסגור את המכסה.
  5. מניחים את להב אופקית ממש מתחת למכסה. בתנועה חלקה אחת, לצייר את הלהב על פני העין לחתוך את הקרנית, משאיר כוס העין.
  6. בעזרת מלקחיים, להסיר את הרשתית של העין מבצעה היטב ומניחים אותו על נייר סינון.
  7. הסר את הזגוגית ואת העדשה על ידי לחיצה על אזור ליד עצב הראייה הכרות ומושך אחורה על נייר הסינון. חזור מספר פעמים עד כמעט את כל הזגוגית היא להסיר את הגביע עין נראה מרוקן.
  8. מקום עין כוס לתוך צלחת פטרי עם התקשורת לנתיחה כדי לשטוף.
  9. חותכים את כוס עין אל המספר הרצוי של החלקים (5 חלקים לכל היותר).
  10. קחו חתיכה אחת של כוס עין ולשים אותו מתחת למיקרוסקופ.
  11. קלאמפ בלובן העין ו דמית העין קלות יחד על קצה של הרשתית באמצעות מלקחיים. עם זאת, להשתמש במברשת בסדר לצחצח נכון בין דמית העין לבין הרשתית.
  12. שימוש בתנועות עדינות קצר, להקניט את הרשתית דמית העין עד שהוא הופך להיות מנותקת.
  13. חותכים 1 ס"מ מעל פיפטה העברה סטרילית. השתמש למצוץ את הרשתית ואת המקום לתוך צלחת פטרי של המדיום הדגירה לשטוף.
  14. בעזרת פיפטה אחרת להעביר סטרילי עם 1 אינץ לחתוך בזהירות להעביר את הרשתית על 0.4 מיקרומטר Millicell המסנן (Millipore, חתול לא: PICMORG50).
  15. השתמשו במברשת כדי לכוון את הרשתית עם הצד הגנגליון התא כלפי מעלה.
  16. שטחו את הרשתית על ידי הברשה קלה בשולי הרשתית. מזעור נגיעה תא גנגליון שכבה עם מברשת כמה שיותר.
  17. הסר בינוני עודף על מסנן עם פיפטה העברה.
  18. בעזרת מלקחיים, להעביר את המסנן על suctioner שונה. צייר על suctioner 2-3 פעמים כדי להסיר את כל מדיום הדגירה של המסנן.

ג'ין gunning ו הדגירה של הרשתית

  1. מתחת למכסה המנוע, מקום אחד הרשתית המכילים מסנני-עומד על מסנן 60 מנות עמוק מ"מ (בתאי הדגירה).
  2. ודא כי המדיום הוא במגע עם החלק התחתון של המסנן וכי בינוני לא לגלוש לצדדים של המסנן על הרשתית. המסנן לפעול כממשק בין הרשתית ובינוניים.
  3. תירה כל פיסת הרשתית עם שני כדורים. מקום אקדח גן ישירות מעל רקמות, על 3-4 ס"מ ממנו.
  4. שמים את כל חדרי הדגירה על שייקר של 35-37 מעלות צלזיוס חממה.
  5. החלף בינוני הדגירה מדי יום. הרשתית ניתן מודגרות לתקופה מקסימלית של 6 ימים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

1. מה אני יכול לעשות עם השיטה הזאת?

  • ראה מורפולוגיה תא בבירור.
  • לייבל תאים להקליט אותם.
  • Overexpress חלבונים, כמו PSD95, אלא גם חלבונים אחרים כי לווסת את תגובת התא, תעלות יונים למשל, קולטנים.
  • אקספרס RNAs מעכבות.

2. כמה זמן אני יכול לשמור על הרשתית מבוגר?

  • 4 ימים שום בעיה עבור ארנב מבוגר. לאחר שישה ימים התאים נראים "חולה", כלומר האקסונים לסגת, אתה רואה נפיחות של דנדריטים ההקלטה התגובות אור הופך אמין (רק ~ 50% מהתאים נמצאו אור תגובה לאחר זמן.
  • המשכנו עכבר הרשתיות עבור 2 ימים. עכברים קשה יותר, כי הרשתית הם vascularized, וגם עבה יותר הרשתית ארנב.

3. כיצד אני יכול לוודא הרשתית שלך הוא בריא אחרי כל הזמן הזה?

  • תקן הזהב היא הקלטה מהם. לתאי הגנגליון עדיין צריך להגיב לאור. אתה צריך להגן על רקמת שלך מן האור במהלך הדגירה, כדי למנוע הלבנת photopigment, כי יש לך לנתח את הרשתית את אפיתל הפיגמנט עבור הדגירה.
  • מדי פעם אנו משמשים גם מערך הקלטה microelectrode לבדוק הרשתית שלנו.

4. למה אתה רוצה לתפעל רק מספר תאים ברשתית בכל פעם?

  • שאלות מסוימות לא ניתן לטפל בדרך אחרת. חישבו למשל על רצפטורים GABA על תא גנגליון. אתה יכול להשתמש חוסמי GABA, אבל היית לעכב כל שידור GABAergic ברשתית, לא רק קלט לתא אתה מתעניין זה יכול להיות קשה מאוד להבחין בין השפעה על התא בפרט, הכוללת "השפעות הרשת "על הרשתית כולה.
  • אם אתה רוצה לראות את המורפולוגיה בבירור, אתה לא יכול תווית כל התאים, אחרת אתה פשוט בלגן.

5. האם שיטה זו מתאימה האוכלוסייה כתם?

  • Gunning מספר גנים היא תהליך אקראי. תקבל לתאי הגנגליון רבים, רבים התאים amacrine העקורים, כמה תאים מולר, והרבה פחות של כל סוגי תאים אחרים.

6. האם יש "טריקים" אני צריך לדעת כדי לגרום לזה לעבוד?

  • לא ממש. אבל חשוב לבצע את הנתיחה של הרשתית במהירות יחסית, כך שיש לך את הכלים שלך על המסנן בתוך פחות מ 30 דקות. החלקים לא צריך להיות קטן מדי, על סנטימטר מרובע אחד זה בסדר. צפו חתיכות 3-4 מעין אחת ארנבת.
  • שמור כלים דיסקציה שלך בהחלט הרחק כל דבר בא במגע עם fixatives ו בכימיקלים אחרים.
  • נסה להגדיר החממה שלך ל-C 35 ולא 37, כך הרשתית לא חם מדי.
  • אתה לא צריך להוסיף גורמי גדילה כמו BDNF עד בינוני שלך, לפחות אנחנו לא עושים את זה באופן שגרתי, אבל אתה צריך להשתמש תוספת N2, סרום סוס 1%, ואנטיביוטיקה. אנו מספקים רשימה של כל הדברים שאתה & תצטרך כקובץ משלים בתיעוד זה.

7. אתה יכול גנים אקדח דברים אחרים, ולא פלסמידים?

  • כן, השתמשנו צבען מצומדות dextrans או DiI ו Dio. אבל אתה יכול להשתמש בסידן אינדיקטור צבעים, או כמעט כל דבר שאתה יכול מעיל על כדורי זהב או טונגסטן.

8. מהן המגבלות?

  • קודם כל הזמן. אתה צריך לחתוך את עצב הראייה, כלומר לתאי הגנגליון בסופו של דבר מנוון. זו אינה בעיה של עד 6 ימים, אבל אחרי זה לא היינו אמון הרשתיות יותר. עכשיו, אם אתה רק רוצה להביע את ה-GFP או אחרת התא מילוי סמן, דגירה של 2-3 ימים זה מספיק, אך במקרים מסוימים, כמו כאשר אתה רוצה להביע RNAs מעכבות, ההשפעה יכול לקחת 4 ימים או יותר כדי להראות. הנה, אתה צריך לשמור על ציר הזמן בראש.

9. מה עבודה של חוקר אחר צריך להיות מודע?

  • בתחום הרשתית, בהחלט מעבדה רחל וונג באוניברסיטת וושינגטון. יש גם הרבה אנשים עשו את העבודה במערכות אחרות, כמו הכנה פרוסה בהיפוקמפוס. אנחנו לא מתיימר להיות מסוגל לתת סקירה מלאה של הספרות, אלא לבדוק את המסמכים ברשימת ההפניות.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

References

  1. Landreth,, Agranoff, B. W. Explant culture of adult goldfish retina: a model for the study of CNS regeneration. Brain Res. 161, 39-55 (1979).
  2. Smalheiser, N. R., Crain, S. M., Bornstein, M. B. Development of ganglion cells and their axons in organized cultures of fetal mouse retinal explants. Brain Res. 204, 159-178 (1981).
  3. Adler, R., Magistretti, P. J., Hyndman, A. G., Shoemaker, W. J. Purification and cytochemical identification of neuronal and non-neuronal cells in chick embryo retina cultures. Dev Neurosci. 5, 27-39 (1982).
  4. Rehm, H., Schafer, T., Betz, H. Beta-bungarotoxin-induced cell-death of neurons in chick retina. Brain Res. 250, 309-319 (1982).
  5. Kim, S. U., Takahashi, H. Tissue culture study of adult human retina neurons. Invest Ophthalmol Vis Sci. 29, 1372-1379 (1988).
  6. Caffe, A. R., Soderpalm, A., van Veen, T. Photoreceptor-specific protein expression of mouse retina in organ culture and retardation of rd degeneration in vitro by a combination of basic fibroblast and nerve growth factors. Curr Eye Res. 12, 719-726 (1993).
  7. Wong, H. C., Thompson, S., Yu, D. Y., Cringle, S. J., Alder, V. A., Taylor, S. J. Comparison of growth rates of bovine retinal and brain microvascular pericytes in different oxygen concentrations in vitro. Aust N Z J Ophthalmol. 23, 299-308 (1995).
  8. Seigel, G. M. The golden age of retinal cell culture. Mol Vis. 5, 4 (1999).
  9. Caffe, A. R., Ahuja, P., Holmqvist, B., Azadi, S., Forsell, J., Holmqvist, I., et al. Mouse retina explants after long-term culture in serum free medium. J Chem Neuroanat. 22, 263-273 (2001).
  10. Hatakeyama, J., Kageyama, R. Retrovirus-mediated gene transfer to retinal explants. Methods. 28, 387-395 (2002).
  11. Zhang, S. S., Fu, X. Y., Barnstable, C. J. issue culture studies of retinal development. Methods. 28, 439-447 (2002).
  12. Wang, S. W., Mu, X., Bowers, W. J., Klein, W. H. Retinal ganglion cell differentiation in cultured mouse retinal explants. Methods. 28, 448-456 (2002).
  13. Inoue, T., Hojo, M., Bessho, Y., Tano, Y., Lee, J., Kageyama, R. Math3 and NeuroD regulate amacrine cell fate specification in the retina. Development. 129, 831-842 (2002).
  14. Kretz, A., Hermening , S. H., Isenmann , S. A novel primary culture technique for adult retina allows for evaluation of CNS axon regeneration in rodents. J Neurosci Methods. 136, 207-219 (2004).
  15. Liljekvist-Larsson, I., Johansson, K. Retinal neurospheres prepared as tissue for transplantation. Brain Res Dev Brain Res. 160, 194-202 (2005).
  16. Reidel, B., Orisme, W., Goldmann, T., Smith, W. C., Wolfrum, U. Photoreceptor vitality in organotypic cultures of mature vertebrate retinas validated by light-dependent molecular movements. Vision Res. 46, 4464-4471 (2006).
  17. Xin, H., Yannazzo, J. A., Duncan, R. S., Gregg, E. V., Singh, M., Koulen, P. A novel organotypic culture model of the postnatal mouse retina allows the study of glutamate-mediated excitotoxicity. J Neurosci Methods. 159, 35-42 (2007).
  18. Johnston, S. A., Tang, D. C. The use of microparticle injection to introduce genes into animal cells in vitro and in vivo. Genet Eng (N Y). 15, 225-236 (1993).
  19. Lo, D. C., McAllister, A. K., LC, K. atz Neuronal transfection in brain slices using particle-mediated gene transfer. Neuron. 13, 1263-1268 (1994).
  20. Rajagopalan, L. E., Malter, J. S. Turnover and translation of in vitro synthesized messenger RNAs in transfected, normal cells. J Biol Chem. 271, 19871-19876 (1996).
  21. McAllister, A. K. Biolistic transfection of neurons. Sci STKE. 2000, (2000).
  22. Gan, W. -B., Grutzendler, J., Wong, W., Wong, R., Lichtman, J. Multicolor "DiOlistic" labeling of the nervous system using lipophilic dye combinations. Neuron. 27, 219-225 (2000).
  23. Sato, H., Hattori, S., Kawamoto, S., Kudoh, I., Hayashi, A., Yamamoto, I., et al. In vivo gene gun-mediated DNA delivery into rodent brain tissue. Biochem Biophys Res Commun. 270, 163-170 (2000).
  24. Zhang, G., Selzer, M. E. In vivo transfection of lamprey brain neurons by gene gun delivery of DNA. Exp Neurol. 167, 304-311 (2001).
  25. Sohn, R. L., Murray, M. T., Schwarz, K., Nyitray, J., Purray, P., Franko, A. P., et al. In-vivo particle mediated delivery of mRNA to mammalian tissues: ballistic and biologic effects. Wound Repair Regeneration. 209, 287-296 (2001).
  26. O'Brien, J. A., Holt, M., Whiteside, G., Lummis, S. C., Hastings, M. H. Modifications to the hand-held Gene Gun: improvements for in vitro biolistic transfection of organotypic neuronal tissue. J Neurosci Methods. 112, 57-64 (2001).
  27. Klimaschewski, L., Nindl, W., Pimpl, M., Waltinger, P., Pfaller, K. Biolistic transfection and morphological analysis of cultured sympathetic neurons. J Neurosci Methods. 113, 63-71 (2002).
  28. Kettunen, P., Demas, J., Lohmann, C., Kasthuri, N., Gong, Y., Wong, R. O., et al. Imaging calcium dynamics in the nervous system by means of ballistic delivery of indicators. J Neurosci Methods. 11, 37-43 (2002).
  29. Gamper, N., Shapiro, M. S. Calmodulin mediates Ca2+-dependent modulation of M-type K+ channels. J Gen Physiol. 122, 17-31 (2003).
  30. Wirth, M. J., Wahle, P. Biolistic transfection of organotypic cultures of rat visual cortex using a handheld device. J Neurosci Methods. 125, 45-54 (2003).
  31. O'Brien, J., Lummis, S. C. Biolistic and diolistic transfection: using the gene gun to deliver DNA and lipophilic dyes into mammalian cells. Methods. 33, 121-125 (2004).
  32. Benediktsson, A. M., Schachtele, S. J., Green, S. H., Dailey, M. E. Ballistic labeling and dynamic imaging of astrocytes in organotypic hippocampal slice cultures. J Neurosci Methods. 141, 41-53 (2005).
  33. Chow, L., Levine, E. M., Reh, T. A. The nuclear receptor transcription factor, retinoid-related orphan receptor beta, regulates retinal progenitor proliferation. Mech Dev. 77, 149-164 (1998).
  34. Rockhill, R. L., Daly, F. J., MacNeil, M. A., Brown, S. P., Masland, R. H. The diversity of ganglion cells in a mammalian retina. J Neurosci. 22, 3831-3843 (2002).
  35. Sun, W., Li, N., He, S. Large-scale morphological survey of mouse retinal ganglion cells. J Comp Neurol. 451, 115-126 (2002).
  36. Sun, W., Li, N., He, S. Large-scale morophological survey of rat retinal ganglion cells. Vis Neurosci. 2019, 483-493 (2002).
  37. Stacy, R. C., Wong, R. O. Developmental relationship between cholinergic amacrine cell processes and ganglion cell dendrites of the mouse retina. J Comp Neurol. 456, 154-166 (2003).
  38. Strettoi, E., Pignatelli, V., Rossi, C., Porciatti, V., Falsini, B. Remodeling of second-order neurons in the retina of rd/rd mutant mice. Vision Res. 43, 867-877 (2003).
  39. Pignatelli, V., Strettoi, E. Bipolar cells of the mouse retina: a gene gun, morphological study. J Comp Neurol. 476, 254-266 (2004).
  40. Connaughton, V. P., Graham, D., Nelson, R. Identification and morphological classification of horizontal, bipolar, and amacrine cells within the zebrafish retina. J Comp Neurol. 477, 371-385 (2004).
  41. Edqvist, P. H., Hallbook, F. Newborn horizontal cells migrate bi-directionally across the neuroepithelium during retinal development. Development. 131, 1343-1351 (2004).
  42. Jakobs, T. C., Libby, R. T., Ben, Y., John, S. W., Masland, R. H. Retinal ganglion cell degeneration is topological but not cell type specific in DBA/2J mice. J Cell Biol. 171, 313-325 (2005).
  43. Qin, Y., Xu, G., Wang, W. Dendritic abnormalities in retinal ganglion cells of three-month diabetic rats. Curr Eye Res. 31, 967-974 (2006).
  44. Roizenblatt, R., Weiland, J. D., Carcieri, S., Qiu, G., Behrend, M., Humayun, M. S. Nanobiolistic delivery of indicators to the living mouse retina. J Neurosci Methods. 153, 154-161 (2006).
  45. Koizumi, A., Zeck, G., Ben, Y., Masland, R. H., Jakobs, T. C. Organotypic culture of physiologically functional adult Mammalian retinas. PLoS ONE. 2, e221 (2007).

Comments

3 Comments

  1. Is there a difference in cell survival if  you incubate under ilumination as apposed to in a dark incubator?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 18, 2008 - 6:13 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Video Stats