सूंड ड्रोसोफिला में विस्तार रिस्पांस परख (प्रति)

Biology

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Summary

सूंड विस्तार प्रतिक्रिया या प्रतिशत स्वाद व्यवहार परख है कि मक्खियों के रूप में के रूप में अच्छी तरह से मधुमक्खियों में इस्तेमाल किया गया है. जब सूंड एक आकर्षक पदार्थ के साथ संपर्क बनाता है, मक्खी अपनी सूंड फैली पदार्थ का उपभोग करने के लिए. विभिन्न शर्करा के समाधान उड़ान भरने के लिए बहुत आकर्षक हैं.

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Shiraiwa, T., Carlson, J. R. Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila. J. Vis. Exp. (3), e193, doi:10.3791/193 (2007).

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Abstract

सूंड विस्तार प्रतिक्रिया (प्रतिशत) एक स्वाद व्यवहार परख है कि मक्खियों के रूप में अच्छी तरह के रूप में मधुमक्खियों में इस्तेमाल किया गया है.

मक्खी के मुंह (labellum) की सतह पर, वहाँ की तरह बाल sensilla जो स्वाद न्यूरॉन्स घरों बुलाया संरचनाओं हैं. जब एक आकर्षक पदार्थ labellum के लिए संपर्क करता है, मक्खी अपनी सूंड फैली सामग्री का उपभोग करने के लिए. सूंड एक्सटेंशन रिस्पांस परख (प्रति) इस स्वाद व्यवहार प्रतिक्रिया उपाय है, और यह एक उपयोगी तरीका है एक एकल मक्खी में भोजन वरीयताओं के बारे में जानने के. Sucrose, ग्लूकोज और fructose के रूप में विभिन्न शर्करा, के समाधान के उड़ान भरने के लिए बहुत आकर्षक हैं. aversive पदार्थों के प्रभाव भी प्रतिशत की कमी के रूप में परीक्षण किया जा सकता है जब एक मिठाई समाधान में मिलाया.

बुनियादी प्रक्रिया की सादगी के बावजूद, वहाँ कई चीजें हैं जो यह काम करने से रोका जा सकता हैं. कारकों में से एक है कि ध्यान देने की आवश्यकता है मक्खी उत्तरदायी राज्य है. आवश्यक भुखमरी उत्तरदायी राज्य के लिए उचित समय उड़ 36 से 72 घंटे के लिए तेजी से बदलता है. हम मक्खी राज्य और जो बाहर गैर संवेदनशील या अति संवेदनशील व्यक्ति पशुओं की स्क्रीनिंग की अनुमति देता है का मूल्यांकन करने के लिए नियंत्रण की एक श्रृंखला की स्थापना की. एक अन्य महत्वपूर्ण कारक प्रभाव के स्तर पर और labellum, जो शब्दों द्वारा वर्णन करने के लिए मुश्किल होगा संपर्क करने के लिए की स्थिति है. इस वीडियो प्रस्तुति कई अन्य सुधार के साथ इन सभी एक साथ है कि इस विधि के reproducibility वृद्धि होगी दर्शाता है.

Protocol

भुखमरी

  1. सबसे पहले, मक्खी भूखा.
  2. किम - पोंछ के पानी से लथपथ एक खाली शीशी में एक छोटा सा टुकड़ा रखो.
  3. स्थानांतरण 20-30 अच्छी तरह से खिलाया खाली शीशी के लिए मक्खियों.
  4. हर 12 -24 घंटे की जाँच के लिए सुनिश्चित करें कि कागज नम है.
  5. 36-72 घंटे के लिए उड़ भूख से मर जाना.

मक्खी फिक्स

  1. लो एक एक Aspirator में मक्खी.
  2. खोलने पर 200 μl पीले टिप रखें. इसके साथ ही flipping और उस पर उड़ाने, तुम पीले टिप में मक्खी ऊपर निचोड़ कर सकते हैं.
  3. धीरे कुछ हवा लागू के लिए उड़ान भरने को धक्का एक बिंदु जहां यह नहीं ले जा सकते हैं.
  4. एक रेजर का उपयोग करके, मक्खी आँख पर एक निशान लगभग डाल, तो वापस उड़ चूसना और बंद टिप कटौती.
  5. धीरे मक्खी की स्थिति के लिए वापस, उड़ा, लेकिन बस बहुत अंत तक पहुँचने से पहले, एक स्थिति जहां सूंड में स्थित होने जा रहा है पर कटौती तिरछा कर. आप इस तिरछा कटौती के बिना कर सकते हैं, लेकिन यह निश्चित रूप से निम्नलिखित प्रक्रिया को आसान बनाना होगा.

Sucrose wicks तैयार

  1. 6 मिमी Kimwipes चौड़ी पट्टी ® एक धागे में कागज ट्विस्ट, और शंकु जैसे आकार बाती (<1 सेमी) के छोटे - छोटे टुकड़ों में अलग खींच.
  2. इन छोटे wicks sucrose के समाधान या पानी में डूबा थे और संपर्क बनाने के द्वारा सूंड के लिए प्रस्तुत है.

नियंत्रण और प्रायोगिक पशुओं की तैयारी

  1. किसी भी tastants परीक्षण से पहले, एक 4% sucrose के उड़ान भरने के लिए समाधान दे. यह एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में कार्य करता है. किसी भी उड़ है कि जवाब नहीं था है त्यागें.
  2. अगला, परीक्षण 2 0 DH मक्खी पर. एक नकारात्मक नियंत्रण के रूप में यह काम करते हैं. मक्खी त्यागें अगर यह जवाब था.
  3. अपने tastants परीक्षण के बाद इन नियंत्रणों का परीक्षण करें.

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Discussion

इस प्रस्तुति में, हम सूंड विस्तार प्रतिक्रिया परख के लिए सभी चरणों के माध्यम से चला गया है. विधि बहुत सरल लगता है, लेकिन कई अन्य व्यवहार assays के रूप में काम करने से, कई छोटी चीज़ों परख रोका जा सकता है. हम ऐसे कई कदम है कि सावधान ध्यान देने की जरूरत है के माध्यम से चले गए. यहाँ, मैं सबसे महत्वपूर्ण कारकों में से कुछ reemphasize.

ऐसा ही एक पहलू बाती का आकार है. मैं बहुत अच्छा उदाहरण के कुछ दिखाया गया है, लेकिन ज़ाहिर है, हकीकत में सब कुछ बहुत अच्छा है और बहुत बुरा के बीच एक सतत स्पेक्ट्रम होगा. शुरुआत में, आप बहुत अच्छा ओर करीब चीजों का उपयोग हो सकता है, लेकिन दिन के दिन अपने मानक के लिए बिट द्वारा सा नहीं तो अच्छी रेंज बदलाव शुरू हो सकता है. "अच्छा" कहा जाता है ताकि के मानव धारणा बहुत आसानी से अनजाने में बदलाव कर सकते हैं. एक ही रास्ता इसे रोकने के बाती आप अपने प्रयोगों में इस्तेमाल की एक तस्वीर ले लो, और पक्ष द्वारा सभी चित्रों पक्ष तुलना है. या, कम से कम wicks है कि बहुत अच्छी तरह से काम की एक तस्वीर ले, और थोड़ी देर के लिए इसे परीक्षण pers पहले घूरना.

एक और महत्वपूर्ण बात संपर्क के प्रभाव के स्तर है. यह आसान के साथ सौदा है, क्योंकि लक्ष्य संभव के रूप में कोमल के रूप में संपर्क कर रहा है. यदि आप सब पर मक्खी के सिर को हिलने नहीं देखते हैं, कि सबसे अच्छा है.

भुखमरी हालत नियंत्रण के लिए मुश्किल कारक है. कई स्वाद या घ्राण व्यवहार assays में 24 घंटे की भुखमरी समय बहुत अक्सर इस्तेमाल किया जाता है. 24 घंटे बहुत सुविधाजनक हो सकता है लोगों के लिए प्रयोग करने के लिए, हो सकता है, लेकिन अगर आप एक बहुत अच्छी हालत में अपने मक्खियों को पीछे करने के लिए, इस बल्कि एक छोटी अवधि है. लेकिन फिर भी अगर आप एक अमीर मक्खी भोजन का उपयोग किया है, और घनत्व ठीक नियंत्रण प्रतिशत परीक्षण के लिए खिड़की के 36 घंटे से 72 घंटे के लिए भिन्न हो सकते हैं. तो, एक प्रयोग के रूप में, मैं कहना है कि यह बहुत लोगों के लिए असुविधाजनक है. वहाँ एक और कारक है कि इसे और अधिक कठिन प्रयोगकर्ताओं के लिए है. तथ्य की बात के रूप में, वहाँ कई बैचों हो सकता है, जहां प्रयोग के लिए खिड़की बहुत ही कम हो सकता है, या बिल्कुल भी नहीं मौजूद हो सकता है.

तो वहाँ कुछ प्रमुख बाधा आप के माध्यम से जाना है कर रहे हैं, लेकिन सबसे महत्वपूर्ण बात यह सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रण मैंने उल्लेख किया है. उन मानक के लिए बहुत सख्ती रखने करके, आप करने के लिए विश्वसनीय डेटा सेट एकत्र करने में सक्षम हो जाएगा.

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Acknowledgments

हम पॉल ग्राहम वीडियो प्रस्तुति में एक कैमरा आदमी के रूप में सेवा करने के लिए धन्यवाद.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
HDR-HC1 Camera Sony Corporation
SMZ800 Microscope Nikon Instruments
P-IBSS Camera Adapter Nikon Instruments
1x DC10LN Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
257010 Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
TREKKER Mk2 Tripod BENBO
Gorillapod SLR Tripod Joby
iMac G5 Computer Apple
Power Mac G5 Computer Apple
iMovie Software Apple
MPEG Streamclip Software SQUARED 5

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dethier, V. G. The Hungry Fly. Harvard University Press. Cambridge. (1976).

Comments

2 Comments

  1.  Comments about the starvation protocol. I am currently performing research on fly appetitive learning and test fly sugar response as a control with an assay similar to the one described in Kim et al. (J Neurosci. ²007 Jul 18;²7(²9):7640-7.) In my experiments flies are starved for ²1h before conditioning at ²5°C. In my experience, the temperature during starvation is of huge importance: In preliminary experiments, I got similar sugar responses for flies starved for 7h at ²5° and ²4h at 18°. So information about the temperature during starvation is highly welcomed. The density of flies during starvation also appeared critical. Using bigger tubes, I did another quick experiment transferring 40 or 80 flies in my tubes for starvation. One day after, the majority of the flies were dead while kept in groups of 80, while no death was seen in the tubes of 40 flies. So maybe a difference from ²0 to 30 flies in the vials might have big influence.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 8:05 AM
  2. I am very interested in the drosophila probosics extension response assay, and want to know more about this assay methods. Thank you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 20, 2011 - 12:46 PM

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