خرطوم ملحق مواجهتها (PER) الفحص في ذبابة الفاكهة

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

خرطوم ردا تمديد أو PER هو مقايسة سلوك الذوق الذي تم استخدامه في الذباب ، وكذلك في نحل العسل. عندما خرطوم يجعل الاتصال مع مادة جذابة ، ذبابة خرطوم يمتد لاستهلاك هذه المادة. حلول مختلفة من السكريات هي جذابة جدا للطيران.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Shiraiwa, T., Carlson, J. R. Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila. J. Vis. Exp. (3), e193, doi:10.3791/193 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

خرطوم ردا التمديد (PER) هو فحص سلوك الذوق الذي تم استخدامه في الذباب ، وكذلك في نحل العسل.

على سطح الفم الذبابة (labellum) ، وهناك الشعر هياكل شبيهة تدعى الخلايا العصبية التي تضم sensilla الذوق. عندما مادة جذابة يجعل الاتصال على labellum ، ذبابة خرطوم يمتد لتستهلك المواد. خرطوم ملحق مواجهتها (PER) مقايسة التدابير سلوك هذا الرد الذوق ، وأنه هو وسيلة مفيدة لمعرفة أذواقهم الغذائية في ذبابة واحدة. حلول من السكريات المختلفة ، مثل الجلوكوز والسكروز والفركتوز ، وجذابة للغاية للطيران. يمكن أيضا أن تأثير المواد مكره يتم اختبارها مع تخفيض PER عندما مختلطة في حل الحلو.

على الرغم من بساطة الإجراء الأساسي ، وهناك الكثير من الامور التي يمكن منعها من العمل. واحدة من العوامل التي تتطلب اهتماما هو الدولة الذبابة استجابة. الوقت التجويع اللازمة لجعل السفر إلى دولة متجاوبة السليم يختلف جذريا 36-72 ساعة. أقمنا مجموعة من الضوابط لتقييم حالة الذبابة والفرز الذي يسمح للخروج من الحيوانات فرادى أو غير متجاوبة فرط استجابة. عامل آخر مهم هو مستوى التأثير والموقف من الاتصال إلى labellum ، التي سيكون من الصعب وصف بالكلمات. يوضح هذا العرض الفيديو كل هذه جنبا إلى جنب مع العديد من التحسينات الأخرى التي من شأنها أن تزيد من استنساخ هذا الأسلوب.

Protocol

الموت جوعا

  1. أولا ، تجويع الطيران.
  2. وضع قطعة صغيرة من كيم يمسح بماء غارقة في القنينة الفارغة.
  3. نقل 20-30 جيدا الذباب يتغذى على القارورة الفارغة.
  4. تحقق كل 12 ساعة للتأكد من -24 ورقة رطبة.
  5. تجويع الطيران ل36-72 ساعة.

الإصلاح الذبابة

  1. تأخذ واحدة تحلق في الشافطة.
  2. مكان غيض الصفراء 200 ميكرولتر خلال الافتتاح. التقليب في وقت واحد وتهب على ذلك ، يمكنك ضغط على الطيران تصل الى الحافة الصفراء.
  3. بلطف تطبيق بعض الهواء لدفع يطير الى نقطة حيث انها لا تستطيع التحرك.
  4. باستخدام أسلاك شائكة ، ووضع علامة على ما يقرب من عين الذبابة ، تمتص ثم يعود وقطعوا رأس.
  5. ضربة بلطف يعود الى الموقف ، ولكن قبل الوصول إلى النهاية ، وجعل قطع الميل في موقف حيث خرطوم سوف يكون موجودا. يمكنك أن تفعل هذا دون قطع الميل ، لكنها بالتأكيد من شأنه أن يجعل العملية التالية أسهل.

تحضير الفتائل السكروز

  1. لف الشريط 6 ملم واسعة من Kimwipes ® رقة في الموضوع ، ومزق إربا صغيرة من مخروط ، مثل الفتيل شكل (<1 سم).
  2. وقد انخفضت هذه الفتائل الصغيرة إلى حلول السكروز أو المياه وعرضها على خرطوم بجعل الاتصال.

إعداد الضوابط وحيوانات التجارب

  1. قبل اختبار أي tastants ، واعطاء الحل السكروز 4 ٪ من الطيران. هذا بمثابة تحكم إيجابية. تجاهل أي أن يطير لم تستجب.
  2. المقبل ، واختبار درهم 2 0 على الطاير. هذا بمثابة سيطرة سلبية. تجاهل يطير اذا لم تستجيب.
  3. اختبار هذه الضوابط بعد اختبار tastants الخاص.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

في هذا العرض ، لقد مررنا جميع الخطوات لتمديد خرطوم مقايسة الاستجابة. الأسلوب أصوات جميلة واضحة ولكن كما هو الحال في العديد من المقايسات السلوك الأخرى ، والعديد من الأشياء الصغيرة يمكن مقايسة منع من العمل. مررنا مثل هذه الخطوات الكثيرة التي تحتاج إلى عناية دقيقة. هنا ، أود التأكيد مجددا على بعض من العوامل الأكثر أهمية.

أحد هذه العوامل هو شكل الفتيل. وقد أظهرت لي بعض الأمثلة الجيدة جدا ، ولكن بطبيعة الحال ، في الواقع كل شيء سيكون الطيف المستمر بين جيد جدا وسيئة للغاية. في البداية ، هل يمكن أن يكون استخدام الأشياء على مقربة من الجانب جيدة جدا ، ولكن يوما بعد يوم القياسية الخاصة بك قد تبدأ في التحول شيئا فشيئا إلى نطاق الحقيقة ليست جيدة. ويمكن تصور الإنسان ما يسمى "جيدة" من السهل جدا تحول دون وعي. طريقة واحدة لمنع هذا هو لالتقاط صورة من الفتيل الذي استخدمته في التجارب الخاصة بك ، وقارن بين كل الصور الجانبية إلى جنب. أو ، على الأقل تأخذ صورة واحدة من الفتائل التي عملت بشكل جيد جدا ، والتحديق في ذلك لبعض الوقت قبل استعراضات النفقات الاختبار.

شيء آخر مهم هو مستوى التأثير لجهة الاتصال. هذا هو أسهل للتعامل مع لأن الهدف هو جعل الاتصال وطيف ممكن. إذا كنت لا ترى تحرك الذبابة الرأس في كل شيء ، هذا هو الأفضل.

حالة التجويع هو أصعب عامل السيطرة عليها. في كثير من الذوق أو الشم المقايسات السلوكية ، يستخدم وقت المجاعة من 24 ساعة في كثير من الأحيان. قد تكون 24 ساعة مريحة جدا للناس للقيام التجربة ، ولكن إذا كنت الذباب الخلفية الخاصة بك في حالة جيدة جدا ، وهذا هو لفترة قصيرة إلى حد ما. ولكن حتى لو كنت تستخدم الطعام الغني يطير ، والتحكم في كثافة على وجه التحديد ، يمكن للإطار للاختبار الواحد تختلف من 36 ساعة إلى 72 ساعة. هكذا ، على سبيل التجربة ، لا بد لي من القول انه غير مريح للغاية بالنسبة للناس. هناك عامل آخر جعل الأمر أكثر صعوبة بالنسبة المجربون. كما واقع الأمر ، لن يكون هناك دفعات كثيرة ، حيث نافذة للتجربة قد تكون قصيرة جدا ، أو قد لا توجد حتى على الإطلاق.

لذلك هناك بعض العقبات الرئيسية التي يجب أن تمر عبر ، ولكن الشيء الأكثر أهمية هو السيطرة الإيجابية والسلبية التي ذكرتها. عن طريق الحفاظ على تلك المعايير بدقة شديدة ، وسوف تكون قادرة على جمع بيانات موثوق بها مجموعات.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

نشكر غراهام بول لخدمة كرجل الكاميرا في عرض الفيديو.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
HDR-HC1 Camera Sony Corporation
SMZ800 Microscope Nikon Instruments
P-IBSS Camera Adapter Nikon Instruments
1x DC10LN Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
257010 Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
TREKKER Mk2 Tripod BENBO
Gorillapod SLR Tripod Joby
iMac G5 Computer Apple
Power Mac G5 Computer Apple
iMovie Software Apple
MPEG Streamclip Software SQUARED 5

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dethier, V. G. The Hungry Fly. Harvard University Press. Cambridge. (1976).

Comments

2 Comments

  1.  Comments about the starvation protocol. I am currently performing research on fly appetitive learning and test fly sugar response as a control with an assay similar to the one described in Kim et al. (J Neurosci. ²007 Jul 18;²7(²9):7640-7.) In my experiments flies are starved for ²1h before conditioning at ²5°C. In my experience, the temperature during starvation is of huge importance: In preliminary experiments, I got similar sugar responses for flies starved for 7h at ²5° and ²4h at 18°. So information about the temperature during starvation is highly welcomed. The density of flies during starvation also appeared critical. Using bigger tubes, I did another quick experiment transferring 40 or 80 flies in my tubes for starvation. One day after, the majority of the flies were dead while kept in groups of 80, while no death was seen in the tubes of 40 flies. So maybe a difference from ²0 to 30 flies in the vials might have big influence.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 8:05 AM
  2. I am very interested in the drosophila probosics extension response assay, and want to know more about this assay methods. Thank you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 20, 2011 - 12:46 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics