Хоботок Расширение отклика (PER) Пробирной у дрозофилы

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Хоботок ответ продление или PER является анализ вкус поведения, которые были использованы в мух, а также в пчел. Когда хоботок вступает в контакт с привлекательной вещество, летают расширяет свою хоботок потреблять вещества. Решения различных сахаров очень привлекательны для летать.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Shiraiwa, T., Carlson, J. R. Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila. J. Vis. Exp. (3), e193, doi:10.3791/193 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Хоботок расширение ответа (PER) является анализ вкус поведения, которые были использованы в мух, а также в пчел.

На поверхности рта мухи (labellum), Есть похожие на волосы структуры, называемые сенсиллы в котором находится вкус нейронов. Когда привлекательным вещество вступает в контакт с labellum, летать расширяет свою хоботок потреблять материала. Хоботок Расширение отклика (PER) анализ мер этот ответ вкус поведения, и это полезный метод, чтобы узнать о пищевых предпочтениях в одной летать. Решения различных сахаров, таких как сахароза, глюкоза и фруктоза, очень привлекательны для летать. Влияние веществ отвращение можно также проверить, как снижение PER при смешивании в сладкий раствор.

Несмотря на простоту основной процедуры, Есть много вещей, которые могут помешать ему работать. Одним из факторов, который требует внимания управляемое состояние мухи. Требуемое время голода принести лететь в надлежащее управляемое состояние существенно меняется от 36 до 72 часов. Мы создали серию контроля для оценки состояния мухи и скрининга, который позволяет из не отвечающих или гипер проблематику отдельных животных. Другим важным фактором является уровень влияния и положения контакта с labellum, который будет трудно описать словами. Это видео презентация демонстрирует все это вместе с рядом других усовершенствований, которые повысили бы воспроизводимость этого метода.

Protocol

Голодание

  1. Во-первых, голодать летать.
  2. Положите небольшой кусочек Ким-протрите пропитанной водой в пустой флакон.
  3. Передача 20-30 сытых летит в пустой флакон.
  4. Проверка каждые 12 -24 часов, чтобы убедиться, бумага влажная.
  5. Голодать лететь 36-72 часов.

Fix летать

  1. Возьмите одну летать в аспиратор.
  2. Место 200 мкл желтый опрокинуться открытия. Одновременно листать и дует на нее, вы можете сжать взлететь в желтый наконечник.
  3. Осторожно применять некоторые воздуха подтолкнуть летать до точки, где она не может двигаться.
  4. С помощью бритвы, необходимо поставить галочку примерно в глаза, а мухи, то сосать лететь обратно и отрезал кончик.
  5. Аккуратно удар лететь обратно в положение, но только до достижения самого конца, сделать уклон сократить на позиции, где хоботком будет расположен. Вы можете обойтись без этой наклонной порез, но это, несомненно, делает следующий процесс проще.

Подготовка сахарозы фитилей

  1. Твист 6 мм шириной полосы Kimwipes ® бумаги в потоке, и растащить на мелкие куски в шишках формы фитиль (<1 см).
  2. Эти маленькие фитили, погрузились в сахарозу растворов или воды и представлены хоботок, делая контакт.

Подготовка управления и экспериментальных животных

  1. Перед тестированием любая tastants, дают 4% раствором сахарозы в лету. Это действует как положительный контроль. Не использовать летать, что не ответил.
  2. Затем тест дН 2 0 на лету. Этот акт в качестве отрицательного контроля. Отменить лету, если он отвечает.
  3. Испытание этих элементов управления после тестирования вашей tastants.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

В этой презентации, мы прошли через все шаги для хоботок анализа ответа расширение. Метод кажется довольно простым, но как и во многих других анализов поведения, многие малые вещи могут предотвратить анализа от работы. Мы прошли через много таких шагов, которые требуют тщательного внимания. Здесь я еще раз подчеркнуть некоторые из наиболее важных факторов.

Одним из таких факторов является форма фитиль. Я показал некоторые очень хорошие примеры, но, конечно, на самом деле все было бы непрерывный спектр между очень хорошим и очень плохо. В начале, вы могли бы использовать вещи близко к очень хорошая команда, но изо дня в день, ваш стандартный может начать сдвиг по кусочкам, чтобы не очень хороший выбор. Человеческого восприятия так называемых "хороших" может очень легко сдвиг бессознательно. Одним из способов предотвращения этого является сфотографировать фитиль вы использовали в экспериментах, и сравнить все фотографии бок о бок. Или, по крайней мере взять одну картину фитили, которые работали очень хорошо, и смотреть на него в то время как до тестирования чел.

Другая важная вещь, является влияние уровня контактов. Это легче иметь дело, потому цель сделать контакт, как нежны, как это возможно. Если вы не видите голову двигаться летать на всех, то есть лучше.

Голода условие жестких фактором контроля. Во многих вкус или обонятельных поведенческие тесты, голод время 24 часа используется очень часто. 24 часов может быть очень удобно для людей, чтобы сделать эксперимент, но если вы задней ваши мухи в очень хорошем состоянии, это довольно короткий период времени. Но даже если вы использовали богатую пищу летать, и контроль плотности точно, окно для тестирования PER может варьироваться от 36 часов до 72 часов. Таким образом, в качестве эксперимента, я должен сказать, это очень неудобно для людей. Существует еще один фактор, который делает его более трудным для экспериментаторов. На самом деле, что будет много партий, где окно для эксперимента может быть очень коротким, или может даже не существовать вовсе.

Так Есть некоторые основные препятствия Вы должны пойти до конца, но самое главное, положительный и отрицательный контроль я уже упоминал. Держа в этих стандартных очень строго, вы будете иметь возможность собирать достоверную наборов данных.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Мы благодарим Пола Грэма для обслуживания, как камера человек в видео-презентацию.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
HDR-HC1 Camera Sony Corporation
SMZ800 Microscope Nikon Instruments
P-IBSS Camera Adapter Nikon Instruments
1x DC10LN Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
257010 Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
TREKKER Mk2 Tripod BENBO
Gorillapod SLR Tripod Joby
iMac G5 Computer Apple
Power Mac G5 Computer Apple
iMovie Software Apple
MPEG Streamclip Software SQUARED 5

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dethier, V. G. The Hungry Fly. Harvard University Press. Cambridge. (1976).

Comments

2 Comments

  1.  Comments about the starvation protocol. I am currently performing research on fly appetitive learning and test fly sugar response as a control with an assay similar to the one described in Kim et al. (J Neurosci. ²007 Jul 18;²7(²9):7640-7.) In my experiments flies are starved for ²1h before conditioning at ²5°C. In my experience, the temperature during starvation is of huge importance: In preliminary experiments, I got similar sugar responses for flies starved for 7h at ²5° and ²4h at 18°. So information about the temperature during starvation is highly welcomed. The density of flies during starvation also appeared critical. Using bigger tubes, I did another quick experiment transferring 40 or 80 flies in my tubes for starvation. One day after, the majority of the flies were dead while kept in groups of 80, while no death was seen in the tubes of 40 flies. So maybe a difference from ²0 to 30 flies in the vials might have big influence.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 8:05 AM
  2. I am very interested in the drosophila probosics extension response assay, and want to know more about this assay methods. Thank you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 20, 2011 - 12:46 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics