Drosophila의 코 확장 응답 (당) 어세이

Biology

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Summary

코 확장 응답이나 PER는 파리에서뿐만 아니라 꿀벌에서 사용되었습니다 맛을 행동 분석입니다. 코가 매력적인 물질과 접촉하게되면, 비행은 물질을 소비하기 위해 코를 확장합니다. 각종 당분의 솔루션은 비행을 매우 매력적입니다.

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Shiraiwa, T., Carlson, J. R. Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila. J. Vis. Exp. (3), e193, doi:10.3791/193 (2007).

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Abstract

코 확장 응답 (당) 파리에서뿐만 아니라 꿀벌에서 사용되었습니다 맛을 행동 분석입니다.

파리의 입 (labellum)의 표면에 맛을 뉴런을 전시 sensilla라고 머리와 같은 구조가 없습니다. 매력적인 물질 labellum로 연락하게되면 파리가 재료를 소비하기 위해 코를 확장합니다. 코 확장 응답 (당) 분석이 맛을 행동 반응을 측정하고, 그것은 하나의 플라이 식품 환경 설정에 대해 배울 수있는 유용한 방법입니다. 같은 자당, 포도당 및 Fructose와 같은 다양한 설탕,의 솔루션은 비행을 매우 매력적입니다. 달콤한 솔루션에 혼합하면 aversive 물질의 효과도 PER의 감소로 테스트할 수 있습니다.

기본 절차의 단순에도 불구하고, 작동을 방지할 수있는 많은 것들이있다. 주의를 필요로하는 요인 중 하나는 파리의 반응 상태를 말합니다. 적절한 응답 상태로 비행을 제공할 필요 기아 시간은 36에서 72시간로 크게 다릅니다. 우리는 비 응답하거나 하이퍼 반응 개별 동물 밖으로 검사 수있는 파리의 상태 및 평가를 위해 컨트롤 시리즈를 만들었습니다. 또 다른 중요한 요인은 영향 수준과 단어로 설명하기 어려운 것입니다 labellum에 연락처의 위치입니다. 이 비디오 프레 젠 테이션이 방법의 재현성을 높일 것이 여러 다른 개선과 함께 모든 방법을 보여줍니다.

Protocol

굶주림

  1. 첫째, 파리를 굶어.
  2. 빈 병에 물을 배어 김 - 닦으의 작은 조각을 넣어.
  3. 전송 20-30 잘 먹이가 빈 유리병에 날아.
  4. 종이가 촉촉한 있는지 확인하기 위해 매 12 -24 시간을 확인합니다.
  5. 36-72시간 위해 파리를 굶어.

파리를 수정

  1. 하나 흡인기로 날아보세요.
  2. 개방을 통해 200 μl 노란색 제보를 놓으십시오. 동시에 내리고 그것을 불고, 당신은 노란색 팁으로 파리를 그만두라 수 있습니다.
  3. 부드럽게 움직일 수없는 지점으로 비행을 밀어 공기를 적용할 수 있습니다.
  4. 레이저를 사용하여 비행의 눈을 약 마크를 넣어 다음 날 다시 빨아 및 팁 잘라.
  5. 부드럽게 위치에 다시 파리를 불어하지만, 단지 아주 끝을 도달하기 전에, 코이 위치가 될 수있는 위치에서 절단 경사합니다. 이 경사 컷없이 할 수 있지만, 그것은 분명히 다음과 같은 과정을 쉽게합니다.

자당의 빅스 준비

  1. Kimwipes의 6mm 폭 스트립 ® 종이 스레드로 열고, 그리고 콘 모양 심지 작은 조각 (<1cm)로 분열 시키려고.
  2. 이러한 작은 빅스는 자당 솔루션이나 물에 담근와 연락하여 코에게 제공했다.

컨트롤 및 실험 동물 준비

  1. 어떤 tastants를 테스트하기 전에 비행을 4 %의 자당 솔루션을 제공합니다. 이것은 긍정적인 제어 역할을합니다. 응답하지 않은 비행기를 폐기하십시오.
  2. 다음, 즉시 검사 DH 2 0. 대조군으로 작동합니다. 그것이 어떻게 반응 했는가하면 파리를 폐기하십시오.
  3. 귀하의 tastants 테스트 후 이러한 컨트롤을 테스트합니다.

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Discussion

이 프레 젠 테이션에서, 우리는 코 확장 응답 분석의 모든 단계를 통과했습니다. 방법은 매우 간단 소리지만, 많은 다른 행동 assays에 많은 작은 것들이 작업에서 분석하지 못하도록 할 수 있습니다. 우리는 세심한주의가 필요 많은 같은 단계를 지났습니다. 자, 내가하는 가장 중요한 요소 중 일부를 reemphasize.

하나는 이러한 요소는 심지 모양입니다. 나는 아주 좋은 사례 중 일부를 표시해야하지만, 물론, 현실에서 모든 아주 좋은 아주 나쁜 사이에 연속 스펙트럼 것입니다. 처음에는, 당신은 아주 좋은쪽으로 가까운 것들을 사용하는 수도 있지만, 일일 귀하의 표준은 그리 좋은 범위에 조금씩 옮겨 시작 있습니다. "좋은"이라는 있도록 인간의 인식은 매우 쉽게 무의식적으로 이동하실 수 있습니다. 이것을 방지하기 위해 한 가지 방법은 당신이 실험에 사용된 윅의 사진을 찍을하고, 옆에있는 모든 사진의 측면을 비교하는 것입니다. 아니면, 적어도 잘 작동 빅스 중 하나 찍어 및 테스트 뻬흐하기 전에 잠시 동안 그것을 보곤.

또다른 중요한 사항은 연락처의 영향 수준입니다. 목표가 가능한 한 부드러운로 연락을하도록하기 때문에 이것은 처리하는 것이 더 쉽습니다. 여러분 모두에서 파리의 머리 움직임을 볼 수 없다면, 그게 최고입니다.

기아 상태는 제어하기 가장 힘든 요소입니다. 여러 취향이나 후각 행동 assays에서 24 시간의 기아의 시간은 매우 자주 사용됩니다. 사람들이 실험을 수행하는 24 시간 동안은 매우 편리 수도 있지만, 매우 좋은 상태에서 파리를 뒤쪽면, 이것은 비교적 짧은 기간입니다. 그러나 풍부한 플라이 음식을 사용하고, 정확하게 밀도를 제어할 경우에도 PER 테스트를 위해 윈도우 36 시간에서 72시간에 따라 다를 수 있습니다. 그래서, 실험으로, 난 사람들이 매우 불편을 사과드립니다. 그것이 더 어렵게 경험 있도록 또 다른 요인이있다. 실험을위한 윈도우가 매우 짧은 어디에 있을지 사실, 많은 배치가있을 것입니다, 심지어 아예 존재하지 않을 수 있습니다.

그래서 당신이 통과해야 할 주요 장애물이 있지만 가장 중요한 것은 내가 언급한 긍정적이고 부정적인 컨트롤입니다. 매우 엄격하게 그 기준을 유지하면 신뢰할 수있는 데이터 집합을 수집할 수있게 될 것입니다.

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Acknowledgments

우리는 비디오 프레 젠 테이션에 카메라맨으로 봉사에 대한 폴 그레이엄 감사합니다.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
HDR-HC1 Camera Sony Corporation
SMZ800 Microscope Nikon Instruments
P-IBSS Camera Adapter Nikon Instruments
1x DC10LN Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
257010 Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
TREKKER Mk2 Tripod BENBO
Gorillapod SLR Tripod Joby
iMac G5 Computer Apple
Power Mac G5 Computer Apple
iMovie Software Apple
MPEG Streamclip Software SQUARED 5

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dethier, V. G. The Hungry Fly. Harvard University Press. Cambridge. (1976).

Comments

2 Comments

  1.  Comments about the starvation protocol. I am currently performing research on fly appetitive learning and test fly sugar response as a control with an assay similar to the one described in Kim et al. (J Neurosci. ²007 Jul 18;²7(²9):7640-7.) In my experiments flies are starved for ²1h before conditioning at ²5°C. In my experience, the temperature during starvation is of huge importance: In preliminary experiments, I got similar sugar responses for flies starved for 7h at ²5° and ²4h at 18°. So information about the temperature during starvation is highly welcomed. The density of flies during starvation also appeared critical. Using bigger tubes, I did another quick experiment transferring 40 or 80 flies in my tubes for starvation. One day after, the majority of the flies were dead while kept in groups of 80, while no death was seen in the tubes of 40 flies. So maybe a difference from ²0 to 30 flies in the vials might have big influence.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 8:05 AM
  2. I am very interested in the drosophila probosics extension response assay, and want to know more about this assay methods. Thank you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 20, 2011 - 12:46 PM

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