Proboscide Estensione di risposta (PER) Assay in Drosophila

Biology

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Summary

Risposta estensione proboscide o per un comportamento saggio gusto che è stato usato nelle mosche così come nelle api. Quando la proboscide entra in contatto con una sostanza attrattiva, la mosca estende la sua proboscide a consumare la sostanza. Le soluzioni di zuccheri diversi sono molto attraenti per il volo.

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Shiraiwa, T., Carlson, J. R. Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila. J. Vis. Exp. (3), e193, doi:10.3791/193 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

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Abstract

Risposta estensione proboscide (PER) è un test comportamento gusto che è stato usato nelle mosche così come nelle api.

Sulla superficie della bocca della mosca (labello), ci sono strutture simili a capelli chiamato sensilli che ospita i neuroni gusto. Quando una sostanza entra in contatto interessante per il labello, la mosca estende la sua proboscide di consumare il materiale. Estensione proboscide di risposta (PER) saggio misura questa risposta comportamento gusto, ed è un metodo utile per conoscere le preferenze alimentari in una mosca. Le soluzioni di zuccheri diversi, come saccarosio, glucosio e fruttosio, sono molto attraenti per il volo. L'effetto di sostanze avversive può anche essere testati come la riduzione del PER se mescolato in una soluzione dolce.

Nonostante la semplicità della procedura di base, ci sono molte cose che possono impedirne il funzionamento. Uno dei fattori che richiede attenzione è stato reattivo della mosca. Il tempo di morire di fame necessaria per portare al volo il proprio ordine di risposta varia drasticamente da 36 a 72 ore. Abbiamo stabilito una serie di controlli per valutare lo stato della mosca e che permette lo screening di singoli animali che non rispondono o iper-reattivo. Un altro fattore importante è il livello di impatto e la posizione del contatto con il labello, che sarebbe difficile descrivere a parole. Questa presentazione video dimostra tutti questi insieme a diversi altri miglioramenti che aumentano la riproducibilità di questo metodo.

Protocol

Fame

  1. Primo, affamare la mosca.
  2. Mettete un piccolo pezzo di Kim-wipe inzuppato d'acqua in una fiala vuota.
  3. Trasferimento 20-30 ben nutriti vola il flaconcino vuoto.
  4. Controllare ogni 12 -24 ore per accertarsi che la carta è umida.
  5. Morire di fame il volare per 36-72 ore.

Fissare il volo

  1. Prendere una mosca in un aspiratore.
  2. Inserire una punta di 200 microlitri giallo sopra l'apertura. Contemporaneamente flipping e soffiando su di esso, si può spremere al volo su in punta gialla.
  3. Applicare delicatamente po 'd'aria per spingere il volo fino ad un punto in cui non si può muovere.
  4. Con un rasoio, mettere un segno di circa all'altezza degli occhi della mosca, poi succhiare il volo di ritorno e tagliare la punta.
  5. Delicatamente colpo al volo in posizione, ma poco prima di arrivare alla fine, fare un taglio inclinato nella posizione in cui la proboscide sta per essere collocato. Si può fare a meno di questo taglio inclinato, ma sarebbe sicuramente fare la seguente procedura più semplice.

Preparare stoppini saccarosio

  1. Twist una striscia di 6 mm di larghezza di Kimwipes ® carta in un filo, e tirare a parte in piccoli pezzi di cono-come stoppino forma (<1 cm).
  2. Questi stoppini piccoli sono stati immersi in soluzioni di saccarosio o di acqua e presentato al proboscide facendo contatto.

Preparare i controlli e gli animali da esperimento

  1. Prima di testare qualsiasi tastants, dare una soluzione di saccarosio al 4% alla mosca. Ciò funge da controllo positivo. Eliminare qualsiasi mosca che non ha risposto.
  2. Avanti, prova dH 2 0 al volo. Questo atto come controllo negativo. Scartare il volo se ha risposto.
  3. Test di questi controlli dopo la prova il tuo tastants.

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Discussion

In questa presentazione, abbiamo superato tutti i passaggi per il dosaggio risposta estensione proboscide. Il metodo sembra abbastanza semplice, ma come in molti altri comportamenti saggi, tante piccole cose possono impedire il test di funzionare. Siamo passati attraverso molte fasi in modo tale che richiede una particolare attenzione. Qui, sottolineare nuovamente alcuni dei fattori più importanti.

Uno di questi fattori è la forma dello stoppino. Ho mostrato alcuni degli esempi molto buono, ma naturalmente, in realtà tutto sarebbe uno spettro continuo tra il molto buono e molto male. In principio, si potrebbero utilizzare le cose vicino al lato molto buono, ma giorno per giorno il vostro standard potrebbe iniziare a spostare a poco a poco alla gamma non-così-bene. Percezione umana del cosiddetto "buono" può facilmente spostare inconsciamente. Un modo per evitare questo è di scattare una foto dello stoppino che hai utilizzato in esperimenti, e confrontare tutte le immagini fianco a fianco. O, almeno prendere una foto della stoppini che ha funzionato molto bene, e guardare per un po 'prima del test PERS.

Un'altra cosa importante è il livello di impatto del contatto. Questo è più facile da affrontare, perché l'obiettivo è quello di rendere il contatto con i più dolci possibili. Se non si vede muovere la testa della mosca a tutti, che è il migliore.

La condizione di fame è il fattore più difficile da controllare. In molti o gusto olfattiva analisi comportamentale, un tempo la fame di 24 ore viene utilizzato molto spesso. 24 ore potrebbe essere molto comodo per le persone a fare l'esperimento, ma se dietro il tuo vola in ottime condizioni, questo è un periodo piuttosto breve. Ma anche se è stato utilizzato un alimento ricco di volare e controllare con precisione la densità, la finestra per il test PER può variare da 36 ore a 72 ore. Così, come un esperimento, devo dire che è molto scomodo per le persone. C'è un altro fattore che rende più difficile per gli sperimentatori. È un dato di fatto, ci sarebbero molte partite, dove la finestra per l'esperimento potrebbe essere molto breve, o addirittura potrebbe non esistere affatto.

Quindi ci sono alcuni ostacoli principali che deve passare attraverso, ma la cosa più importante è il controllo positivo e negativo che ho citato. Tenendo a quelli standard molto strettamente, si sarà in grado di raccogliere serie di dati affidabili.

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Acknowledgments

Ringraziamo Paul Graham per servire come un uomo telecamera nel video di presentazione.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
HDR-HC1 Camera Sony Corporation
SMZ800 Microscope Nikon Instruments
P-IBSS Camera Adapter Nikon Instruments
1x DC10LN Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
257010 Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
TREKKER Mk2 Tripod BENBO
Gorillapod SLR Tripod Joby
iMac G5 Computer Apple
Power Mac G5 Computer Apple
iMovie Software Apple
MPEG Streamclip Software SQUARED 5

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dethier, V. G. The Hungry Fly. Harvard University Press. Cambridge. (1976).

Comments

2 Comments

  1.  Comments about the starvation protocol. I am currently performing research on fly appetitive learning and test fly sugar response as a control with an assay similar to the one described in Kim et al. (J Neurosci. ²007 Jul 18;²7(²9):7640-7.) In my experiments flies are starved for ²1h before conditioning at ²5°C. In my experience, the temperature during starvation is of huge importance: In preliminary experiments, I got similar sugar responses for flies starved for 7h at ²5° and ²4h at 18°. So information about the temperature during starvation is highly welcomed. The density of flies during starvation also appeared critical. Using bigger tubes, I did another quick experiment transferring 40 or 80 flies in my tubes for starvation. One day after, the majority of the flies were dead while kept in groups of 80, while no death was seen in the tubes of 40 flies. So maybe a difference from ²0 to 30 flies in the vials might have big influence.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 8:05 AM
  2. I am very interested in the drosophila probosics extension response assay, and want to know more about this assay methods. Thank you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 20, 2011 - 12:46 PM

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