Author Produced

مثلي هند زرع الأطراف الاصطناعية في الفئران

* These authors contributed equally
Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

نحن هنا وصف الفئران مثلي القائمة الخلفية إجراء عمليات الزرع ، والتي يبدو أن معيار الذهب

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Sucher, R., Oberhuber, R., Margreiter, C., Rumberg, G., Jindal, R., Lee, W. A., Margreiter, R., Pratschke, J., Schneeberger, S., Brandacher, G. Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats. J. Vis. Exp. (41), e2022, doi:10.3791/2022 (2010).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

زرع الطعم الخيفي نسيج مركب (CTA) تمثل الآن خيارا صالحا العلاجية بعد الخسارة من الساعد واليد أو الأرقام وأصبحت كيانا رواية العلاجية في الجراحة الترميمية. ومع ذلك ، هناك حاجة على المدى الطويل جرعة عالية من المعالجة المتعددة الأدوية المثبطة للمناعة لضمان بقاء الكسب غير المشروع ، والتي تحمل مخاطر الآثار الجانبية الخطيرة التي الارسنه تطبيقها على نطاق أوسع. قد تقدم المزيد في هذا المجال تعتمد على فهم أفضل للمناعة الأساسية ونقص التروية الاصابة ضخه في ترقيع الأنسجة المركبة.

حتى الآن ، وزرع مثلي أطرافهم هند في الفئران والقوارض كان النموذج المفضل للزراعة التجميلية (RT) ، ومع ذلك ، فإنه هو إجراء شاقة للغاية تتطلب مهارات غير عادية لإعادة المرتكز المجهرية في الأوعية الدموية والعظام والعضلات والأعصاب.

لقد قدمنا ​​مفاغرة الكفة الوعائية التقنية لهذا النموذج ، وتوفير مقاربة سريعة وموثوقة لزرع الأطراف الاصطناعية فأر الخلفيتين. ويبسط هذا الأسلوب يقلل من عملية جراحية ، وتمكن الجراحون من ذوي الخبرة المجهرية الأساسية لتنفيذ العملية بنجاح مع بقاء عالية ومعدلات المضاعفات المنخفضة. ويبدو أن أسلوب مناسب تماما للالمناعية فضلا عن نقص التروية ضخه الاصابة الدراسات (IRI).

Protocol

عملية المانحة والقائمة الخلفية الحصاد

  1. لهذا الإجراء من المنطوق ويستخدم مجموعة من الأدوات العقيمة المجهرية. يجب على الجراح ارتداء الملابس المناسبة بما في ذلك القفازات المعقمة ، والتي يجب تغييرها قبل بدء العملية الجراحية.
  2. الفأر هو تخدير مع حقن داخل الصفاق من بنتوباربيتال (IP 50mg/kg) ووضع الاستلقاء على حقل العملية ساخنة ، الذي يسهل على درجة حرارة جسم الحيوان مستقرة طوال الإجراء الجراحي بأكمله.
  3. غير معقم قبل شق الجلد رفعت العملية ثلاث مرات كل منها على حد سواء ، وهو مطهر والكحول. القرنيات لمنع الحيوانات من جفاف ، ومشحم العينين مع مرهم للعين (Vidisic) قبل الجراحة.
  4. يتم إجراء شق الجلد في أعلى الفخذ الأيمن تقريبا على مستوى الرباط الإربي. يتم تشريح الأوعية الفخذية الحرة مع مكواة وتشريح حادة بين القطبين ؛ و تربط فروع عميقة مع 8-0 الحرير.
  5. يتم حقن 300μl (50 وحدة دولية) من الهيبارين عن طريق الوريد القضيب لمكافحة تجلط الدم.
  6. و تربط السفن على مستوى الفخذ في الرباط الإربي وقطع البعيدة للرباط.
  7. يتم مسح أطرافه الخلفية مع الثلج الباردة (4 درجات مئوية) HTK الحل (5ml) عن طريق الشريان الفخذي أكثر من 5 دقائق.
  8. منقسمة بشدة جميع المجموعات العضلية مع مقص ، ويتم تنفيذها مع العظم الكهربائية الدوارة شهد على مستوى ثالث القاصية من عظم الفخذ.
  9. هي مغمورة ثم حصادها في أطرافهم 20mL من الجليد الباردة HTK الحل للحفاظ على والتخزين البارد حتى الزرع.

المستلم عملية وزرع

  1. الفأر هو تخدير مع حقن داخل الصفاق من مستلق بنتوباربيتال ووضعها في الحقل العملية.
  2. يتم إجراء شق الجلد في أعلى الفخذ الأيمن تقريبا على مستوى الرباط الإربي. يتم تشريح الأوعية الفخذية الحرة مع مكواة القطبين وتشريح حادة.
  3. و تربط سفن الفخذ كما القاصي ممكن ، ولكن الأقرب إلى انطلاق سفينة شرسوفي. يتم وضع المشابك الأوعية الدموية على مستوى الرباط الإربي في الشريان والوريد.
  4. يتم سحبها صفعة البولي ايثيلين خلال الشريان (داخل القطر الكفة : 0.912 مم ، سماكة الجدران الكفة : 0.010 ملم ، وطول الكفة : 2.0 ملم) وريد (داخل القطر الكفة : 1.151 مم ؛ الكفة الجدار سمك : ​​0.010 ملم ، وطول الكفة : 2.0 ملم). ثم يتم سحبها على حافة التجويف السفينة مع سفينة موسع ومقلوبة في شريان الفخذ والوريد على الجسم كله في كفة (2mm وتقريبا) والثابتة مع ربطة كفافي الحرير 8-0.
  5. لإفساح المجال للطرف الجهات المانحة يتم إزالة الطرف المتلقي مع تشريح حادة من المجموعات العضلية ويتم تنفيذ العظم في منتصف الفخذ.
  6. تتم إزالة أطرافه المانحة من الحل HTK وزرع يبدأ تثبيت طرفي العظم من الفخذ باستخدام إبرة قياس 18 (طول : 1،5-2،0 سم) وقضيب داخل النقي.
  7. ويقترب بشكل وثيق مع مجموعات العضلات البطنية Vicryl 4-0 Prolene الغرز أو توقف.
  8. يتم تنفيذ anastomoses الأوعية الدموية عن طريق سحب الوريد والشريان المانحة خلال الوريد المتلقين ومعقدة الكفة. يتم وضع مرة أخرى وربطة حرير كفافي 8-0 لتأمين مفاغرة.
  9. يتم تحرير المشبك وريدي تليها المشبك الشرياني ، وضخه هي تصور عن طريق العودة من اللون على الطرف البعيد والقدم ، وكذلك تدفق نابض عن طريق الشريان.
  10. هي ما تبقى من مجموعات العضلات الظهرية إعادة يقترب مع Vicryl 4-0 Prolene الغرز أو توقف.
  11. إغلاق الجلد مع vicryl 4-0 prolene الغرز أو توقف.
  12. يتم وضع الفئران المتلقي على وسادة التدفئة وتراقب عن كثب حتى الشفاء.
  13. الحيوانات المتلقي تلقي المضادات الحيوية الوقائية (سيفازولين ، 20 ملغ / يوم ، IM) وBuprenex (0،1 ملغ / كلغ ، SC) لأيام posttransplant الثلاثة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

فقد سبقته عقود من البحوث التجريبية ومكن نجاح زرع يد الإنسان في الماضي القريب. في عام 1978 ، شابيرو وآخرون. طورت مثلي زرع الأطراف الاصطناعية الخلفيتين نموذج في الفئران ، مناسبة تماما لدراسة مختلف الجوانب المرضية والفسيولوجية ، والمناعية وكذلك النتائج الفنية للترقيع الأنسجة المركبة. لقد قمنا بتعديل الجزء الأكثر صعوبة من هذا الإجراء ، وهي مفاغرة الأوعية الدموية ، من خلال إدخال تقنية صفعة غير خياطة. بالمقارنة مع تقنية خياطة التقليدية فإنه يبسط ويقلل من العملية الجراحية ، وتمكن الجراحون من ذوي الخبرة المجهرية الأساسية لتنفيذ الإجراء مع معدل البقاء على قيد الحياة مرتفعة (80-90 ٪).

دون أن تقلب anastomoses خياطة ، من خطر النزيف ، تخثر الدم ، ومجعد عنيق تتضاءل. انقباض أو الاضطراب في الموقع حيث يصطدم الدم في البداية مع لمعة مرورا الكفة هو الخطر الجديد المحتمل للتقنية الكفة ، بالرغم من أنه يمكن التقليل من هذه المناسبة مع اختيار الكفة الحجم. وعلاوة على ذلك ، يمكن بسهولة عدم التطابق صغيرة الحجم يمكن معالجتها مع مفاغرة الكفة ، والحد من المخاطر الكامنة مرة أخرى لخياطة سفينة من مختلف الاقطار. وترد بعض الاعتبارات الأكثر أهمية لنجاح مفاغرة الكفة أدناه :

  1. حقنة واحدة من بنتوباربيتال ينبغي (50 ملغم / كغم IP) تكون كافية لتخدير الحيوانات لمدة 90 دقيقة. وينبغي في حالة العملية تستغرق أكثر من 70-80 دقيقة تطبق جرعة إضافية من 15mg/kg IP. ويمكن اختبار عمق التخدير intraoperatively بتكرار التجربة إصبع القدم قرصة المنعكس.
  2. ينبغي أن يقوم على العظم من طرف الجهات المانحة أطرافهم / المتلقي هند هند في منتصف الفخذ لتخفيف تثبيت طرفي العظم خلال الزرع.
  3. مجموعة مختارة بعناية من أحجام صفعة له أهمية حاسمة بالنسبة لعودة التوعي ناجحة.
  4. لتجنب جلطات ، ينبغي أن تدار الهيبارين (50IU) إلى 1 دقيقة قبل المانحين نضح الكسب غير المشروع.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Nembutal® OVATION Pharmaceuticals
Heparin Immuno Ebewe Pharma
Custodiol HTK Solution Essential Pharmaceuticals
Adventitia Scissors ASSI ASSI®SAS-21 R-8T
Forceps ASSI ASSI®JFC-7
Dilator Forceps ASSI ASSI®D-5AZ
Polymide Tubes River Tech Medical #17; #19

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Shapiro, R. I., Cerra, F. B. A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb. J Surg Res. 24, (6), 501-506 (1978).
  2. Petruzzo, P. The international registry on hand and composite tissue transplantation. Transplantation. 86, (4), 487-492 (2008).
  3. Schneeberger, S. First forearm transplantation: outcome at 3 years. Am J Transplant. 7, (7), 1753-1762 (2007).

Comments

1 Comment

  1. I'm a medical Laboratory Scientist, a young graduate of Virology working in Microbiology, National Hospital, Abuja, Nigeria, Africa. My interest is on tissue culture technology, please, how i get your assistance? Please contact me as follows: +²34-8064²²9²75

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 14, 2010 - 3:24 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics