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चूहे में Orthotopic हिंद - अंग प्रत्यारोपण

* These authors contributed equally
Immunology and Infection

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Summary

यहाँ हम orthotopic चूहे हिंद अंग प्रत्यारोपण प्रक्रिया, जो सोने के मानक किया जा रहा है है का वर्णन

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Sucher, R., Oberhuber, R., Margreiter, C., Rumberg, G., Jindal, R., Lee, W. A., Margreiter, R., Pratschke, J., Schneeberger, S., Brandacher, G. Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats. J. Vis. Exp. (41), e2022, doi:10.3791/2022 (2010).

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Abstract

समग्र ऊतक allotransplantation (CTA) अब एक हाथ, बांह की कलाई, या अंकों के नुकसान के बाद एक वैध चिकित्सकीय विकल्प का प्रतिनिधित्व करता है और पुनर्निर्माण सर्जरी में एक उपन्यास चिकित्सात्मक इकाई बन गया है. हालांकि, लंबी अवधि के उच्च खुराक बहु - दवा immunosuppressive चिकित्सा भ्रष्टाचार अस्तित्व को सुनिश्चित करने की आवश्यकता है, गंभीर साइड इफेक्ट है जो व्यापक आवेदन halters का खतरा असर. इसके अलावा इस क्षेत्र में प्रगति बुनियादी इम्यूनोलॉजी और समग्र ऊतक grafts में ischemia reperfusion चोट के बेहतर समझ पर निर्भर हो सकता है.

तिथि करने के लिए चूहों में orthotopic हिंद अंग प्रत्यारोपण पुनर्निर्माण प्रत्यारोपण (आर टी) के लिए पसंदीदा कृंतक मॉडल किया गया है, तथापि, यह एक बेहद मांग प्रक्रिया है कि vasculature की reattachment, हड्डियों, मांसपेशियों और नसों के लिए असाधारण microsurgical कौशल की आवश्यकता है.

हम इस मॉडल को नाड़ी कफ सम्मिलन तकनीक शुरू की है, एक तेजी से और विश्वसनीय पिछले अंग प्रत्यारोपण चूहा दृष्टिकोण प्रदान. इस तकनीक को सरल और shortens शल्य प्रक्रिया और बुनियादी microsurgical अनुभव के साथ सर्जन करने के लिए सक्षम बनाता है सफलतापूर्वक उच्च अस्तित्व और कम जटिलता दर के साथ कार्रवाई करने के है. इस तकनीक को अच्छी तरह के रूप में के रूप में अच्छी तरह से प्रतिरक्षाविज्ञानी ischemia reperfusion चोट अध्ययन (IRI) के लिए उपयुक्त हो लगती है.

Protocol

दाता ऑपरेशन और हिंद अंग - हार्वेस्ट

  1. Microsurgical उपकरणों के एक बाँझ सेट ऑपरेटिव प्रक्रिया के लिए उपयोग किया जाता है. सर्जन सहित बाँझ दस्ताने, जो शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के शुरू करने के लिए पहले परिवर्तित किया जाना है के लिए उचित पोशाक पहनना चाहिए.
  2. चूहे pentobarbital की एक intraperitoneal इंजेक्शन (50mg/kg आईपी) के साथ anesthetized है और एक गर्म आपरेशन क्षेत्र है, जो पूरे शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के दौरान एक स्थिर जानवर के शरीर के तापमान की सुविधा पर लापरवाह रखा.
  3. दोनों के साथ प्रत्येक त्वचा चीरा से पहले आपरेशन के दायर तीन बार साफ है, एक निस्संक्रामक और शराब. बाहर सूखने से पशुओं corneas को रोकने के, आँखें एक नेत्र मरहम (Vidisic) सर्जरी से पहले के साथ lubricated हैं.
  4. एक त्वचा चीरा वंक्षण बंधन के स्तर पर लगभग सही कमर भर में किया जाता है. ऊरु वाहिकाओं द्विध्रुवी दाग़ना और कुंद विच्छेदन के साथ मुक्त विच्छेदित कर रहे हैं, गहरी शाखाओं 8-0 रेशम के साथ ligated हैं.
  5. हेपरिन की 300μl (50 आइयू) विरोधी जमावट के लिए penile नस के माध्यम से अंतःक्षिप्त रहे हैं.
  6. ऊरु वाहिकाओं वंक्षण बंधन के स्तर पर ligated हैं और संयुक्ताक्षर में कटौती करने के लिए बाहर का है.
  7. पिछले अंग के साथ प्लावित है ठंडा (4 डिग्री सेल्सियस) 5 मिनट पर और्विक धमनी के माध्यम से HTK समाधान (5ml).
  8. सभी मांसपेशी समूहों को तेजी से कैंची से विभाजित कर रहे हैं और osteotomy फीमर के बाहर तीसरे स्तर पर एक rotating देखा बिजली के साथ किया जाता है.
  9. काटा अंग तो ठंडा संरक्षण और प्रत्यारोपण जब तक कोल्ड स्टोरेज के लिए HTK समाधान के 20ml में डूबे हुए है.

प्राप्तकर्ता ऑपरेशन और ट्रांसप्लांटेशन

  1. चूहे आपरेशन मैदान पर pentobarbital रखा और लापरवाह के intraperitoneal इंजेक्शन के साथ anesthetized है.
  2. एक त्वचा चीरा वंक्षण बंधन के स्तर पर लगभग सही कमर भर में किया जाता है. ऊरु वाहिकाओं द्विध्रुवी दाग़ना और कुंद विच्छेदन के साथ मुक्त विच्छेदित कर रहे हैं.
  3. ऊरु वाहिकाओं के रूप में संभव के रूप में बाहर का ligated कर रहे हैं, लेकिन अधिजठर पोत टेकऑफ़ के लिए प्रॉक्सिमल. संवहनी clamps धमनी और शिरा पर वंक्षण बंधन के स्तर पर रखा जाता है.
  4. : 0.010 मिमी, कफ लंबाई; और नस (कफ व्यास के अंदर कफ - दीवार मोटाई 1.151 मिमी एक पॉलीथीन कफ धमनी (: 0.912 मिमी, कफ दीवार मोटाई: 0.010 मिमी, कफ लंबाई 2.0 मिमी कफ व्यास के भीतर) पर खींचा है : 2.0) मिमी. पोत लुमेन के किनारे फिर एक पोत फैलनेवाली पेशी के साथ खींच लिया है और और्विक धमनी और शिरा कफ (लगभग 2mm) के पूरे शरीर पर everted कर रहे हैं और एक परिधीय 8-0 रेशम संयुक्ताक्षर के साथ तय है.
  5. दाता अंग के लिए कमरे बनाने के अंग प्राप्तकर्ता मांसपेशी समूहों के तेज विच्छेदन के साथ हटा दिया जाता है और osteotomy मध्य फीमर पर किया जाता है.
  6. दाता अंग HTK समाधान से हटा दिया है और प्रत्यारोपण एक 18 गेज सुई (लंबाई: 1.5-2.0 सेमी) का उपयोग जांध की हड्डी के osteosynthesis के साथ शुरू होता है एक intramedullary छड़ी के रूप में.
  7. Ventral मांसपेशी समूहों को बारीकी से 4-0 Vicryl या Prolene बाधित sutures के साथ approximated हैं.
  8. संवहनी anastomoses दाता और प्राप्तकर्ताओं नस और कफ जटिल अधिक नस धमनी खींच कर प्रदर्शन कर रहे हैं. एक परिधीय 8-0 रेशम संयुक्ताक्षर फिर से सम्मिलन सुरक्षित रखा है.
  9. शिरापरक दबाना जारी धमनी दबाना द्वारा पीछा किया, और रंग के बाहर का अंग है और पैर पर लौटने के लिए, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से धमनी के माध्यम से काँपने के गुणवाला प्रवाह द्वारा reperfusion की कल्पना है.
  10. शेष पृष्ठीय मांसपेशी समूहों हैं 4-0 Vicryl या Prolene बाधित sutures के साथ फिर से approximated.
  11. त्वचा 4-0 vicryl या prolene बाधित sutures के साथ बंद कर दिया है.
  12. प्राप्तकर्ता चूहे एक हीटिंग पैड पर रखा गया है और वसूली तक बारीकी से नजर रखी.
  13. प्राप्तकर्ता पशुओं तीन posttransplant दिनों के लिए रोगनिरोधी (Cefazolin, 20 मिलीग्राम / दिन, आईएम) एंटीबायोटिक दवाओं और Buprenex (0.1 मिलीग्राम / किग्रा, अनुसूचित जाति) प्राप्त करते हैं.

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Discussion

प्रयोगात्मक अनुसंधान के दशकों पहले और हाल ही में सफल मनुष्य के हाथ प्रत्यारोपण सक्षम है. 1978 में, शापिरो एट अल. चूहों में एक orthotopic हिंद अंग प्रत्यारोपण मॉडल, अच्छी तरह से विभिन्न रोग, शारीरिक, और प्रतिरक्षाविज्ञानी के रूप में के रूप में अच्छी तरह से मिश्रित ऊतक grafts के कार्यात्मक परिणाम पहलुओं का अध्ययन करने के लिए अनुकूल विकसित किया है. हम प्रक्रिया का सबसे चुनौतीपूर्ण हिस्सा है, अर्थात् नाड़ी सम्मिलन कफ गैर सीवन तकनीक शुरू करने से संशोधित किया है. जब पारंपरिक सीवन तकनीक है यह सरल और शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया shortens और सक्षम बनाता है बुनियादी microsurgical अनुभव के साथ सर्जनों के लिए बाहर एक उच्च जीवित रहने की दर (80-90%) के साथ प्रक्रिया ले की तुलना में.

Sutured anastomoses, खून बहने का खतरा, घनास्त्रता, और डंडी के kinking की परिवर्तनशीलता के बिना कम हैं. कसना या साइट जहां रक्त शुरू कफ के माध्यम से गुजर लुमेन से टकराया पर अशांति कफ तकनीक के एक नए संभावित जोखिम है, हालांकि यह उपयुक्त कफ आकार के चयन के साथ कम से कम किया जा सकता है. इसके अलावा, छोटे आकार बेमेल आसानी से एक कफ सम्मिलन के साथ संभाला जा सकता है, फिर अलग अलग diameters के जहाजों suturing के लिए निहित जोखिम को कम करने. एक सफल कफ सम्मिलन के लिए सबसे महत्वपूर्ण कारणों में से कुछ नीचे दिए गए हैं:

  1. एक एकल इंजेक्शन Pentobarbital (50 आईपी मिलीग्राम / किग्रा) के 90 मिनट के लिए पशु anesthetize लिए पर्याप्त होना चाहिए. मामले में ऑपरेशन से अधिक 70-80 मिनट तक रहता है 15mg/kg आईपी की एक अतिरिक्त खुराक लागू किया जाना चाहिए. संज्ञाहरण की गहराई intraoperatively पैर के अंगूठे चुटकी पलटा परीक्षण दोहरा द्वारा परीक्षण किया जा सकता है.
  2. दाता हिंद / अंग प्राप्तकर्ता हिंद अंग के osteotomy मध्य जांध की हड्डी में प्रत्यारोपण के दौरान osteosynthesis कम किया जाना चाहिए.
  3. कफ आकार के एक सावधान चयन के सफल revascularization के लिए महत्वपूर्ण महत्व का है.
  4. Thromboses से बचने के लिए, हेपरिन (50IU) दाता 1 मिनट भ्रष्टाचार छिड़काव पूर्व प्रशासित किया जाना चाहिए.

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Disclosures

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Nembutal® OVATION Pharmaceuticals
Heparin Immuno Ebewe Pharma
Custodiol HTK Solution Essential Pharmaceuticals
Adventitia Scissors ASSI ASSI®SAS-21 R-8T
Forceps ASSI ASSI®JFC-7
Dilator Forceps ASSI ASSI®D-5AZ
Polymide Tubes River Tech Medical #17; #19

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References

  1. Shapiro, R. I., Cerra, F. B. A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb. J Surg Res. 24, (6), 501-506 (1978).
  2. Petruzzo, P. The international registry on hand and composite tissue transplantation. Transplantation. 86, (4), 487-492 (2008).
  3. Schneeberger, S. First forearm transplantation: outcome at 3 years. Am J Transplant. 7, (7), 1753-1762 (2007).

Comments

1 Comment

  1. I'm a medical Laboratory Scientist, a young graduate of Virology working in Microbiology, National Hospital, Abuja, Nigeria, Africa. My interest is on tissue culture technology, please, how i get your assistance? Please contact me as follows: +²34-8064²²9²75

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 14, 2010 - 3:24 AM

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