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原位大鼠后肢移植

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Immunology and Infection

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Summary

在这里,我们描述的原位大鼠后肢移植过程中,这似乎是黄金标准

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Sucher, R., Oberhuber, R., Margreiter, C., Rumberg, G., Jindal, R., Lee, W. A., Margreiter, R., Pratschke, J., Schneeberger, S., Brandacher, G. Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats. J. Vis. Exp. (41), e2022, doi:10.3791/2022 (2010).

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Abstract

复合组织异体移植(CTA)后失去一只手,前臂或数字代表了有效的治疗选择,并已成为一种新型的整形外科治疗实体。然而,长期高剂量的多种药物的免疫抑制治疗是必需的,以确保移植物的存活,轴承的严重副作用笼头更广泛的应用的风险。在这一领域的进一步恶化可能依赖于更好地理解基础免疫学和复合组织移植缺血再灌注损伤。

迄今为止,原位移植在大鼠后肢已啮齿动物模型重建移植(RT)的首选,但是,它是一个非常艰巨的过程,需要非凡复位血管,骨骼,肌肉和神经的显微外科技能。

我们引进了这种模式的血管袖口吻合技术,提供快速和可靠的的方法,以大鼠后肢移植。这项技术简化和缩短手术过程,使基本的显微手术经验的外科医生成功地执行操作,成活率高和低并发症发生率。这项技术似乎能够很好地适用于免疫学以及缺血再灌注损伤(IRI)的研究。

Protocol

捐助者的操作和后肢收成

  1. 对于执行过程中的显微仪器的使用无菌集。外科医生应穿着合适的服装,包括无菌手套,要改变的手术开始前。
  2. 大鼠腹腔注射戊巴比妥(50mg/kg的IP)麻醉,仰卧放在加热的经营领域,这有利于整个手术过程中的一个稳定的动物体温。
  3. 皮肤切口前,提交操作是消毒三次,每个都,消毒剂和酒精。为了防止动物眼角膜干燥,眼睛眼药膏(Vidisic)手术前的润滑。
  4. 一个皮肤切口是整个右腹股沟,约在腹股沟韧带水平。股血管解剖与双极电凝,钝性分离; 8-0丝结扎深分支机构。
  5. 300μL肝素(50 IU)是通过抗凝血阴茎静脉注射。
  6. 股血管结扎在腹股沟韧带的水平,并切断结扎远端。
  7. 后肢刷新冰冷(4 ° C)HTK液(5毫升)通过股动脉超过5分钟。
  8. 所有的肌肉群是壁垒分明的用剪刀和截骨是一个旋转电机,只见在股骨远端三分之一的水平。
  9. 收获的肢体,然后淹没在冰冷的保存和冷库,直到移植HTK液20ML。

受体手术和移植

  1. 大鼠腹腔注射巴比妥和经营领域放在仰卧麻醉。
  2. 一个皮肤切口是整个右腹股沟,约在腹股沟韧带水平。股血管解剖与双极电凝,钝性分离。
  3. 股血管结扎远端尽可能,但近端上腹血管起飞。血管夹放置在动脉和静脉的腹股沟韧带水平。
  4. 聚乙烯袖口拉(袖口直径:0.912毫米,袖口壁厚:0.010毫米,袖口长度:2.0毫米)和静脉(内袖口直径:1.151毫米;袖口壁厚:0.010毫米,袖口长度内动脉:2.0毫米)。用血管扩张和血管腔的边缘,然后拉,股动脉和静脉外翻袖口(约2毫米)的整个身体和圆周8-0丝线结扎固定。
  5. 为了使捐助肢体的房间收件人的肢体被删除锐性剥离的肌肉群和截骨术在中期股骨执行。
  6. 捐助者的肢体从HTK液和移植作为髓内杆开始使用18号针(长度:1.5〜2.0厘米)的股骨接骨。
  7. 腹侧的肌肉群有密切的近似用4-0薇乔或普理灵间断缝合。
  8. 在收件人的静脉和袖口复杂拉动捐助静脉和动脉进行血管吻合。圆周8-0丝线结扎,再放置到安全的吻合。
  9. 静脉动脉钳钳释放,再灌注远端肢体和足部的颜色,以及通过动脉搏动流的可视化。
  10. 其余的背肌肉群重新近似用4-0薇乔或普理灵间断缝合。
  11. 皮肤是用4-0薇乔或普理灵间断缝合关闭。
  12. 收件人大鼠放在一个加热垫,并密切监测,直到恢复。
  13. 接受动物收到三个移植后预防性应用抗生素(头孢唑啉,20毫克/天,IM)和Buprenex(0.1毫克/公斤,SC)。

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Discussion

数十年的实验研究之前,启用成功的人的手移植在最近的过去。 1978年,夏皮罗等。开发后肢大鼠原位移植模型,非常适合于研究各种病理,生理和免疫学方面以及功能的复合组织移植的结果。我们已经修改了程序的最具挑战性的的部分,即血管吻合,通过引入非缝合袖口技术。相比传统的缝合技术,它简化和缩短手术过程,使基本的显微手术经验的外科医生进行,成活率高(80-90%)的程序。

没有缝合吻合口,出血的危险性,血栓形成,椎弓根扭结的变化是减少。收缩或在现场血液最初穿过袖口流明碰撞的动荡是一个新的袖口技术的潜在风险,虽然这可以通过选择合适的袖带尺寸最小化。此外,体积小,不匹配可以很容易地处理与袖口吻合,再次减少缝合直径不同的船只所固有的风险。一个成功的袖口吻合的一些最重要的考虑因素如下:

  1. 一个单次注射苯巴比妥(50毫克/公斤的IP),应足以麻醉90分钟的动物。操作情况下,持续时间超过70-80分钟,应追加剂量按15mg/kg的IP应用。可以测试麻醉深度,术中重复脚趾捏反射试验。
  2. 应进行中期股骨截骨捐助后肢/收件人后肢减轻移植过程中接骨。
  3. 精心挑选的袖口大小是至关重要的成功血运重建。
  4. 为了避免血栓形成,肝素(50IU)应管理捐助1分钟前移植灌注。

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Disclosures

没有利益冲突的声明。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Nembutal® OVATION Pharmaceuticals
Heparin Immuno Ebewe Pharma
Custodiol HTK Solution Essential Pharmaceuticals
Adventitia Scissors ASSI ASSI®SAS-21 R-8T
Forceps ASSI ASSI®JFC-7
Dilator Forceps ASSI ASSI®D-5AZ
Polymide Tubes River Tech Medical #17; #19

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References

  1. Shapiro, R. I., Cerra, F. B. A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb. J Surg Res. 24, (6), 501-506 (1978).
  2. Petruzzo, P. The international registry on hand and composite tissue transplantation. Transplantation. 86, (4), 487-492 (2008).
  3. Schneeberger, S. First forearm transplantation: outcome at 3 years. Am J Transplant. 7, (7), 1753-1762 (2007).

Comments

1 Comment

  1. I'm a medical Laboratory Scientist, a young graduate of Virology working in Microbiology, National Hospital, Abuja, Nigeria, Africa. My interest is on tissue culture technology, please, how i get your assistance? Please contact me as follows: +²34-8064²²9²75

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 14, 2010 - 3:24 AM

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