Automatic Translation

This translation into Swedish was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages

 JoVE Biology

Ex vivo mekanisk belastning av senan

1, 2

1Department of Bioengineering, University of California, Berkeley, 2Department of Bioengineering, University of California, Berkeley; Division of Occupational Medicine, University of California, San Francisco

Article
    Downloads Comments Metrics Publish with JoVE

    You must be subscribed to JoVE to access this content.

    Enter your email to receive a free trial:

    Welcome!

    Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!


    By clicking "Submit", you agree to our policies.

    Admit it, you like to watch.

     

    Summary

    En ny in vitro-system för samtidig laddning fyra senor i kulturen beskrivs.

    Date Published: 5/28/2007, Issue 4; doi: 10.3791/209

    Cite this Article

    Asundi, K., Rempel, D. Ex vivo Mechanical Loading of Tendon. J. Vis. Exp. (4), e209, doi:10.3791/209 (2007).

    Abstract

    Skador på senor (t.ex. handleden tendinit, epicondyltis) på grund av överanvändning är vanliga i idrottsaktiviteter och på arbetsplatsen. De flesta är förknippade med repetitiva, hög aktivitet kraft handen. Mekanismerna av cellulära och strukturella skador på grund av cykliska belastning är inte kända. Syftet med denna video är att presentera ett nytt system som samtidigt kan lasta fyra senor i vävnadskultur. I videon beskrivs metoderna för sterilt skörd och hur senor lastas på ett fastspänningssystem som sedan doppas i media och hålls vid 37 ° C. En klämma är fast medan den andra flyttas med ett linjärt ställdon. Senan dragkraften övervakas med en lastcell i serie med den mobila klämman. Ställdonen styrs med ett LabView-program. De fyra senor kan upprepade laddas med olika mönster av lastning, repetitionsfrekvens, lastnings-och längd. Fylla kan fortsätta några minuter till 48 timmar. I slutet av lastning, är de senor bort och mitten av substansen utvinns för biokemiska analyser. Detta system möjliggör för undersökning av effekterna av belastning mönster på genuttryck och strukturella förändringar i senan. I slutändan kan mekanismer för skador på grund av överanvändning vara studier med resultaten gäller för behandling och prevention.

    Protocol

    1. Tillägg media CO 2-oberoende medier med fetalt bovinserum, L-glutamin, antibiotika, och askorbinsyra
    2. Alikvotera 40 ml i 50 ml centrifugrör (1 för varje senan)
    3. Alikvotera 10 ml i 15 rör ml centrifugrör (1 för varje senan)
    4. Sterilisera kirurgiska instrument, lakan autoklav, pincetter och momentnyckel i autoklav
    5. Sterilisera klämmor och kraft tips mikrometer genom att blötlägga i 70% etanol över en natt
    6. Harvest senor från bakbenen av kaninen. Kanin borde ha dödshjälp inte mer än två timmar sedan.
    7. Placera senor i 15 ml centrifugrör fylld med media
    8. Lägg ut en steriliserad autoklav blad för att skapa en steril fält
    9. Mät tvärsnittsarea av senan
      1. Placera mikrometer tips om mikrometer, rikta rätt
      2. Grip senor från ändarna
      3. Montera tunnaste senor avsnitt i spåret
      4. Har assistent plats 50g vikt
      5. Vänta i 30 sekunder, läs tjocklek (CSA = tjocklek x 1,3)
    10. Placera senan tillbaka i 15 ml centrifugrör
    11. Upprepa med varje sena som ska läsas
    12. Avlägsna ställdonet från bas
    13. Klipp två 15mm med 40mm band och en 3mm med 5mm bit från steril gasbinda för varje senor
    14. Rulla varje remsa tätt och rum mellan spåren av den distala klämman
    15. Ta bort senor från centrifugrör och lägg på klämma, den distala änden av senan på den distala klämman och fibrocartilage regionen av senan på den proximala klämman
    16. Placera 3x5 gasväv bit på toppen av den distala änden av senan, och säkra klämman
    17. Säkra proximal klämma, se senor förblir i linje mellan klämmorna och med tillräckligt slack att det inte är under spänning när klämmorna är åtdragna. Dra åt klämmorna till 1N-m
    18. Placera 50 ml centrifugrör med media i botten
    19. Placera manöverdon i botten
    20. Upprepa med varje sena som ska läsas
    21. Placera basen över vattenbad
    22. Laddar Protokoll
      1. Förutsättning senor
      2. Applicera 0,5 N belastning, längd mäter senor (detta är mätlängd)
      3. Applicera cyklisk belastning
    23. Avlägsna ställdonet från bas
    24. Släpp sena från klämmor
    25. Process senor

    Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

    Discussion

    Videon presenterar ett nytt system för samtidig laddning av upp till fyra leva senor i vävnadskultur. Typiska lastning löptider är 2 till 48 timmar. Efter lastning, är de senor bort och behandlas för genuttryck. Systemet gör det möjligt för undersökning av effekten av lastning mönster på förändringar i gener associerade med degenerativa förändringar i senan. Dessa experiment kan ge lite insikt i mekanismer för skador i samband med repetitiva lastning. De ger också insikt i belastning som kan orsaka vävnadsskada. Ytterst kan resultaten användas för att förebygga och behandla överanvändning skador på senor och ligament.

    Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

    Disclosures

    References

    1. Asundi, K., Kursa, K., Lotz, J. C., Rempel, D. In vitro system for applying cyclic loads to connective tissues under displacement or force control. Ann Biomed Eng. 35, 1188-1195 (2007).
    2. Asundi, K. R., Rempel, D. M. Cyclic loading inhibits expression of MMP-3 but not MMP-1 in an in vitro rabbit flexor tendon model. Clin Biomech. In Press Forthcoming.
    3. Asundi, K. R., Rempel, D. M. MMP-1, IL-1β and COX-2 mRNA Expression is Modulated by Static Load in Rabbit Flexor Tendon. Ann Biomed Eng. In Press Forthcoming.

    Comments

    0 Comments

    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Metrics

    Waiting
    simple hit counter