Farelerde Heterotopik Kalp Nakli

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Fare heterotopik kalp transplantasyonu modeli ret ve immün yanıt mekanizmaları eğitim için önemli bir yöntem olduğu birçok araştırmacı tarafından kanıtlanmıştır. Ancak, söz konusu teknikleri hala zorlu. Standart teknikler değiştirerek 1000 nakli ile daha fazla başarı elde ettiler.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Liu, F., Kang, S. M. Heterotopic Heart Transplantation in Mice. J. Vis. Exp. (6), e238, doi:10.3791/238 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Fare heterotopik kalp transplantasyonu Dr tarafından tanıtılan bu yana yaygın olarak kullanılmaya başlanmıştır. 1973 yılında Corry ve Russell. Şimdi yeni transgenik ve gen knockout farelerde mevcuttur ret ve immün yanıt çalışmak için özellikle değerli ve çok sayıda immünolojik reaktiflerin geliştirilmiştir. Kalp nakli modeli olmasına rağmen teknik olarak daha zor, deri nakli modellere göre daha az sıkı. Biz değiştirilmiş bir teknik geliştirdiler ve 1000 farelerde heterotopik kalp nakli başarılı durumlarda içinde tamamladık. Asendan aorta ve abdominal aorta anastomoz yaparken, iki kalış dikişlerle sonra devam sütür ile anastomoz için aort iki tarafında 11-0 sütür kullanarak, donör Asendan aorta ile alıcı abdominal aorta proksimal ve distal apexes yerleştirilir. Kalış sütür anastomoz kolaylaştırır ve 11-0 kanama ve tromboz önlemek için ideal bir dikiş boyutu.

Pulmoner arter ve inferior vena kava anastomoz yaparken, iki kalış dikişlerle, donör pulmoner arter ile proksimal apeks ve alıcı vena kava distal apeks yapılır. Inferior vena kava ve donör pulmoner arter sol duvarda, proksimal apeks kalın bir düğüm sağ duvar ve inferior vena kava donör pulmoner arter sütür sonra inferior vena kava içinde devam dikişlerle kapatılır. 10-0 sütür ile inferior vena mağara dışında devam dikişlerle kapatılır. Inferior vena kava ve 10-0 sütür bir tarafta anastomoz yapılır çünkü bu yöntemi gerçekleştirmek için kolay kanama ve tromboz önlemek için doğru boyut. Bu makalede, video tamamlamak için teknik ayrıntıları sağlar.

Protocol

Donör hazırlanması ve Kalp Hasat:

  1. Fare, bir ameliyat alanında pentobarbital ve yerleştirilen yatar intraperitoneal ile anestezi.
  2. Uzun bir orta hat abdominal kesi yapılır. Karın içeriği, abdominal aorta ve inferior vena kava göstermek için sol gazlı bez ile geri çekilir.
  3. Heparin (10u/ml) 1 ml heparin için inferior vena kava enjekte edilir.
  4. Torakotomi yapılır: kaburga omurganın her iki tarafta bölünmüş ve göğüs ön duvarı, kalp maruz karşı korur kadar.
  5. Inferior vena kava, vena kava superior ve azygous ven 6-0 ipek ile bağlandı ve bitişik harfler üstün ayrılır.
  6. Asendan aort ve akciğer atardamarı çok distalde mümkün olduğunca ayrılır ve ayrılır.
  7. Pulmoner venlerin bağlandı ve bağları distal ayrılır.
  8. Kalp, 4 C serum fizyolojik ile perfüze .
  9. Kalbi buz tuz çözeltisi saklanır.

Alıcı Hazırlık ve Transplantasyon

  1. Fare, bir ameliyat alanında pentobarbital ve yerleştirilen yatar intraperitoneal ile anestezi.
  2. Uzun bir orta hat abdominal kesi yapılır. Karın içeriği, abdominal aorta ve inferior vena kava ortaya çıkarmak için gazlı bez ile karın dışında geri çekilir.
  3. , Abdominal aorta ve inferior vena kava dalları maruz kalan ve 10-0 sütür ile bağlandı.
  4. Proksimal ve distal bitişik harfler sırasıyla aorta ve inferior vena kava çevresinde yerleştirilir.
  5. Venotomi, 30 gauge iğne ile alıcı inferior vena kava yapılır. Açılış sonra donör akciğer aort mikro-makas ile eşit bir uzunluk kadar uzatılmıştır.
  6. Aortotomy, 30 gauge iğne ile alıcı abdominal aorta yapılır.
  7. Açılan abdominal aorta ve inferior vena kava, tuzlu su çözeltisi ile sulanan.
  8. Donör kalp alıcının karnın sol tarafına yerleştirilir ve gazlı bez ile kaplıdır.
  9. Kalış dikişler donör Asendan aorta ile alıcı abdominal aorta proksimal ve distal apexes yerleştirilir.
  10. Alıcının abdominal aorta ve vericinin Asendan aorta sağ tarafında anastomoz devam sütür ile tamamlandı.
  11. İki kalış dikişler, donör pulmoner arter ve alıcının inferior vena kava anastomozu için donör pulmoner arter ile proksimal apeks ve alıcının vena kava distal apeks ilk yapılır.
  12. Inferior vena kava ve donör pulmoner arter sol duvarda inferior vena kava içinde devam dikişlerle kapatılır.
  13. Proksimal apeks kalış sütür ile tek bir düğüm sonra, inferior vena kava ve vericinin pulmoner arter sağ duvar vena mağaranın dışında devam dikişlerle kapatılır.
  14. Donör kalbi alıcının karın sağ tarafında açıktır. Alıcının abdominal aorta ve donör Asendan aorta anastomoz sağ duvar devam sütür ile kapatılır.
  15. Anastomoz yapıldıktan sonra, distal ligatür anastomoz kanama kontrol etmek için kaldırılır.
  16. Anastomoz hiçbir kanama çok az varsa, proksimal ligatür kaldırılır. Vericinin kalbi hemen kan ile dolar, kalp kırmızı renk olur ve tekrar atmaya başlar.
  17. Bağırsaklar karın, 6-0 sürekli dikişlerle kapatılır iade edilir.
  18. Alıcı fare sıcak bir alan üzerine yerleştirilir. Bir saat sonra alıcı kurtarır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Sonuçlar

Biz farelerde başarıyla 1000'den fazla vaka heterotopik kalp transplantasyonu yapılan ve yabani türü, transgenik ve gen knockout farelerde de dahil olmak üzere, farelerde farklı suşlar% 90 başarı oranı üzerinden sağlanır.

Tartışma

Dr bu yana. Corry ve Russell 1973 yılında farelerde heterotopik kalp nakli tanıttı, bu model özellikle bağışıklık ret cevabı okuyan ve yeni immünsupresif stratejileri geliştirmek için değerli olduğu kanıtlanmıştır. Ortaya çıkması, çok sayıda transgenik ve gen knockout farelerde ret / tolerans mekanizmaları incelemek için yeni yollar sağladı, çünkü bu model şimdi daha geniş kullanılabilir. Vaskülarize kalp nakli modeli klinik solid organ nakli için daha uygun olabilir. Neonatal kalplerin deri nakli veya subkutan nakli teknik basit olmasına rağmen, bu nakli greft hayatta kalmak için gerekli olan neovaskülarizasyon allojenik yanıtları özellikle duyarlıdır. Böylece, deri ve derialtı duymak nakli sıkı bir tolerans testi için değil, immunosupresif ya da tolerans indükleyici protokollerin geliştirilmesi ve optimizasyonu için yararlı olabilir.

Biz verimlilik ve başarı oranlarını artırmak için çeşitli yollar damar kalp nakli tekniği güncellendi:

  1. Kalp hasat sonrası açık renk olana kadar donör kalbi çıkan aortun tuzlu su çözeltisi ile sulanmalıdır.
  2. , Abdominal aorta ve inferior vena kava alıcı dalları, işletme ve operasyon sonrası tromboz sırasında kanamayı önlemek, 10-0 sütür ile bağlandı olmalıdır.
  3. Abdominal aorta lümen ve alıcının inferior vena kava, kan kalana kadar tuzlu su çözeltisi ile sulanmalıdır. Bu operasyon sonrası tromboz önleyebilir.
  4. Anastomozlar yapma, damarların içinde hava kabarcıkları kaçınılmalıdır.
  5. Arter anastomozlar anastomozlar kanama önlemeye yardımcı olmak için, 11-0 sütür kullanmanız gerekir.
  6. Kesi abdominal aorta ve alıcının inferior vena kava, pulmoner arter ve donör kalbi Asendan aorta açılması eşit olmalıdır.
  7. Açık ve geniş bir çalışma alanına sahip olmak önemlidir, bu nedenle geçici olarak aorta ve inferior vena kava kapamak için kelepçeler yerine 6-0 sütür kullanın.

Sonuç

Farelerde heterotopik kalp nakli tekniği teknik açıdan zor olmasına rağmen, bu alloresponses eğitim için önemli bir tekniktir. Uygulama ve teknik modifikasyonlar Laboratuvarımızda% 90'ın üzerinde bir başarı oranı ile sonuçlandı. Biz, video ve beraberindeki el yazması, bu tekniği kullanmak için isteyen laboratuarlar için öğrenme eğrisi azaltmak için yardımcı olacağına inanıyoruz.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

References

  1. Corry, R. obert J., Winn, H. enry J., Russell, P. aul S. Primarily vascularized allografts of heart in mice. Transplantation. 16, 343-350 (1973).

Comments

23 Comments

  1. Hello Mr.Kang, My name is Vered Gigi and i am a graduste student in Israel for transplanted immunology. I am volunteering in a program (The NIR School of the Heart)  that expose young teenage student to the world of science, focusing on the cardiology field. As such i would love to show them this movie which is very nicely done. However, u was unable to download the movie. Is there a way that i can get the movie? Is it possible for you to e-mial me a copy for teaching porposes only? Thank you very much for your attention, Vered Gigi  my e-mail: vered.gigi@gmail.com

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 22, 2008 - 4:12 AM
  2. Hi, The video was produced by JOVE. We don’t have any copies. Sorry about that. Thank you very much for your interests.   Fengchun Liu

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 18, 2009 - 12:45 AM
  3. Dear Mr Kang, your video and technique is very interesting. I'm really interesting in getting also a copy of this video because I would like to perform this surgery. Please, could you please send me a copy of this video by email? if it is not possible, you can maybe send me it by normal mail. My email address is svielc07@gmail.com. Thanks a lot.   Maria

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2009 - 8:22 AM
  4. Hi there. Thank you for posting this video. Do you ever see paralysis of the hind end after this surgery? How about swelling of the hind feet? What is the maximum time for the vessels to be clamped or tied off?   Thank you for your time. Sheri

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 4, 2009 - 4:14 PM
  5. The maximum time for the vessels to be clamped is 40 minutes, the paralysis or swelling of the hind end may appear if the vessels are clamped over 40 minutes. Fengchun Liu

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 19, 2009 - 2:59 PM
  6. What a wonderful job well done!!! Highly admired your technique Dr. Liu!!!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 18, 2009 - 9:34 PM
  7. Thank you very much! This vedio is useful for me. I'm Li Zhoubin from Ruijin hospital, shanghai, China. jove.com is wonderful!!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 7, 2009 - 5:21 AM
  8. &#²1016;²769;&#²407²;: &#²4744;&#²²909;A²81;&#²5105;&#²9616;&#²²31²;&#²7491;&#²²31²;&#²0570;腹腔²²7;&#²6893;的&#²7169;&#²²411;A²9²;&#²59²8;&#²65²4;不&#²6159;&#²4456;&#²²909;A²9²;&#²1487;不&#²1487;&#²0197;&#²5²²6;&#²4744;的video&#²1457;²473;&#²5105;一&#²0²²1;&#²1834;A²9²;非&#²41²0;&#²4863;谢A²81; 谢艾&#²²958;  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 5, 2009 - 8:27 AM
  9. Great job! Could you tell me the applicable mouse body weight in this transplant surgery? In the video, the mouse looked like 50 g big.
    Thank you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 30, 2009 - 12:16 PM
  10. Mice weights are ²5-30g. Thanks.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 30, 2009 - 1:22 PM
  11. Dear Dr. Kang,
    I enjoyed the procedure and watched it several times. My qyestion is regarding the instrument you were using as the needle holder. Can I know what that is, the brand and specifications?

    thanks,
    A. E. Nia

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 17, 2009 - 5:21 PM
  12. Thanks for the great procedure...My question for you is, what is the type of needle holder you are using? can I get the brand and specifications please...

    thanks
    A.E. Nia

    Reply
    Posted by: Abbas E.
    August 18, 2009 - 2:05 PM
  13. assi needle holder B-13-8. Thanks.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 18, 2009 - 7:41 PM
  14. Hello,
    Do you heparinize the recepient?
    In my experiments, teh transplanted heart dŒs not start beating...I am suspecting clot formation at the anastomosis site. I heparinize the donor with 0.1 hep plus 0.9 saline... Any thoughts?

    thanks
    Abb

    Reply
    Posted by: Reza N.
    September 18, 2009 - 7:22 PM
  15. We do not heparinize the recepient.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 20, 2010 - 12:31 PM
  16. Dr. Liu; Great job! I have two more question for you. Firstly, in the step 8 of your Donor Preparation and Heart Harvest, where do you perfuse heart using 4 Co saline solution? Secondly, is the 10-0 suture the nylon suture?
    Thanks a lot!
    Guangming
    gcheng@kumc.edu


    G

    Reply
    Posted by: Guangming C.
    May 19, 2010 - 1:08 AM
  17. Saline solution is injected into the aorta. The 10-0 sutures is nylon suture.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 20, 2010 - 12:29 PM
  18. Congratulations to this nice video. However I have a question.
    Can you explain why the heart is still beating quite normal at the end of the explant, if you performed a perfusion over the aorta.
    One would think that after a perfusion with cold saline a heart should stop beating.
    Cheers Werner

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 24, 2011 - 4:04 PM
  19. &#²1016;²769;&#²407²;:

    &#²4744;&#²²909;A²81;&#²4744;精&#²8²51;的&#²5²16;ഌ²;&#²0196;&#²0154;&#²5²40;&#²6381;A²9²;不知&#²6159;&#²154²;Ŋ²1;&#²4471;&#²1040;该#²70;频的邮&#²0²14;&#²6469;Ű²7;一&#²7493;&#²3398;&#²0064;?
    谢谢
    &#²647²;

    Reply
    Posted by: arthur y.
    December 22, 2012 - 12:27 AM
  20. Dr. Liu,

    Very decent surgical technique, great job! Just curious how long it will normally take to complete the whole surgical procedure for professional level guys like you? I haven't tried it, but I was informed that it is very time consuming.

    Jian Wu (B.M., M.S.)
    Ph.D Candidate in Biomedical Science (Cardiovascular & Metabolic Diseases Track)
    University of Toledo, College of Medicine and Life Sciences

    Reply
    Posted by: JIAN W.
    May 16, 2013 - 12:00 AM
  21. Impressive idea . but i found couple of things here:
    1- A narration would be very useful!
    2- Apparently sterility is not a goal of this surgery as i saw multiple violations
    3- Harvesting the donor heart takes long , Isn't it better to intubate the donor and have it ventilated during harvest?

    Reply
    Posted by: hadi j.
    March 20, 2014 - 5:47 PM
  22. thanks for your video, could you please tell what micro potts scissors you use for aortotomy and venotomy? as i need to get suitable scissors for my experiments. thanks

    Reply
    Posted by: Anne S.
    June 6, 2015 - 11:36 AM
  23. Dr. Liu,
    Your superb skill is very impressive! Amazing! Thank you for your video!
    But why should we post comment using in English? Would you please email me, we can communicate in Chinese, that would be wonderful! zzh24085@creighton.edu

    Reply
    Posted by: zefu z.
    June 10, 2016 - 4:32 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics