IonFlux:自动酶标仪简单的修补程序与夹紧系统 - 广告

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Summary

IonFlux自动膜片钳系统提供高吞吐量,成本效益的离子通道的电应用广泛筛选。化合物的快速交换,每个数据点的成本低,方便孔板格式,使系统对配体和电压门控离子通道的目标的理想选择。 IonFlux HT提供业界领先的每天10000个数据点,而IonFlux 16提供真正的自动补丁手动膜片钳钻机成本的钳位性能。

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Abstract

离子通道的中枢神经系统,神经和肌肉的生理调节发挥的关键作用。因此,他们一直在牵连的许多疾病,如糖尿病和癫痫的条件,并为新的药物的领先指标。膜片钳方法是评估离子通道活性的体外的黄金标准。当手动方式实现,膜片钳实验大约每天10个数据点,这远低于有意义的药物发现和开发的努力所需要的阈值是有限的。 IonFlux平台使用专有的孔板微流控技术,自动化的一个方便和高吞吐量的孔板格式,两个可配置,以适应广泛的应用范围,包括电压和配体门控离子通道的膜片钳方法。 IonFlux HT是适合于高通量筛选药物发现和开发。这个版本是能够生产多达10,000个数据点每天。额外的吞吐量,最多四个IonFlux HT系统,可以围绕一个单一的液体处理机器人摆着高达40,000每天的数据点。每个数据点的成本低,使用最小的复合药物筛选,药物开发,安全性毒理学,和离子通道的研究IonFlux羟色胺的理想。 IonFlux 16是一个温和的吞吐量的应用,如细胞系的发展,突变体筛选,和检测开发成本效益的解决方案。有史以来第一次,用户必须手动膜片钳钻机在可比成本获得真正的自动化膜片钳技术。

Protocol

1。 IonFlux系统概述

  1. IonFlux系统是由一个台式仪器,SBS标准孔板格式专有的微流体装置,以及一个完整的采集和分析软件包。
  2. 不像其他的自动化膜片钳工具,IonFlux读者保持密切类似于酶标仪一个非常小的足迹。它很容易适应的台式,并与常用的实验室自动化机器人集成,使IonFlux无缝融入现有的高通量筛选的工作流程以及研究实验室。
  3. IonFlux利用合奏录音,这意味着在每个记录区,人口,20个细胞的修补和他们的平均电流产生单个数据点。这种方法产生的高成功率和细胞变异的影响降到最低。
  4. 每384孔板可以处理256种独特的化合物,并产生512个数据点。 96孔板IonFlux 16个进程使用的64个化合物,并产生128个数据点。
  5. 在运行的能力高通量电屏幕打开门广泛的离子通道实验。常见的应用包括配体门控通道,如GABA和烟碱受体,如钠和钾离子通道的电压门控通道,并侧重于HERG钾离子通道的安全性毒理学试验。突变体和细胞株的屏幕,也可以进行。此外,IonFlux使离子通道的功能表达分析。

2。数据采集​​和分析

  1. IonFlux系统配备了先进的数据采集和分析软件包。一旦软件被加载时,用户将看到三个主要屏幕:安装,运行和数据分析。
  2. 安装模式包含了所有需要定义一个实验的控制。在这种模式下,实验初始化指定的全部或一半的板。利用化合物的表是进口设置模式。
  3. 在实验序列“选项卡,参数设置实验的四个阶段:总理,陷阱,中断,数据采集。在这里,电压定义协议的。
  4. 运行模式下显示的,因为它正在收集的数据。实时扫描窗口显示在每个电压脉冲,每个通道产生的电流。实验进展也有报道。
  5. 数据分析模式,可以快速完成实验的审查和分析。工具都提供了观看扫描和跟踪数据,以及用于记录特定的事件,如复方引进。一击地图模块,可以帮助确定在屏幕上的最有前途的化合物。所有数据都可以很容易被导出。csv格式的Excel和其他的数据库应用程序。

3。 IonFlux应用 - GABAA调制器

  1. 一个可以进行多种实验和目标屏幕上的IonFlux系统。在这里,一个例子是从Millipore公司在HEK293细胞中表达人的GABA - A受体的调制器,检测证明。这种配体门控的氯离子通道参与了中枢神经抑制,从而构成了一个重要的药物靶标,在癫痫症,焦虑,失眠。
  2. 为了进行筛选试验,细胞合奏被暴露EC20本机配体γ-氨基丁酸的浓度,在升序调制的物质,对受体的变构部位结合浓度的存在。
  3. 该图显示两个正变构调制器中的苯二氮卓类,即三唑仑和地西泮,其中的EC50值分别为3 nm和0.5微米的剂量 ​​- 反应曲线。
  4. GABA的亲和力明显的调制器依赖的转变,累计申请中存在一个调制器的固定浓度GABA的浓度不同,在这种情况下,地西泮3微米,然后确定。
  5. 启用这种类型的实验是由流过的流体设计,在IonFlux文书。由于存在调制器的结合亲和力,增加浓度向低浓度约1微米为GABA的EC50为转移。

4。 IonFlux应用 - 神经hNav1.8钠通道阻滞剂

  1. IonFlux仪器也有利于其他药理实验,包括这里显示典型的神经元hNav1.8钠离子通道参与对疼痛的感知,电压门控通道阻滞剂的例子。在这个实验中,Na +通道,在HEK293细胞中表达被激活从-120 mV时为0毫伏的电压钳步骤,适用于每一个第二。
  2. 因此,该协议提供通道进补块的信息,自通道重新进入休息状态之间depolarizat离子。麻药利多卡因和丁卡因累积受体阻滞剂的剂量 - 反应曲线说明,分别为320微米,34微米的IC50值,。
  3. 在第二张图,hNaV1.8利多卡因亲和力相比的hNaV1.7,另一种电压门控Na +通道参与痛觉。 hNaV 1.7的IC50被发现,揭示了一个10倍的低亲和力,当这个渠道结合利多卡因3毫米,相比hNaV1.8。

5。 IonFlux应用 - HERG筛选

  1. IonFlux仪器也可用于安全药理学的应用,如HERG筛选。 HERG钾离子通道已与市场上的各种药物相关的不良心脏事件的牵连,导致他们的撤退;,它现在需要的,对这个渠道筛选新的药物化合物。
  2. 拦截器的剂量 - 反应曲线为特征的电压依赖HERG在三个常用的参考化合物,即特非那定,西沙必利和奎尼丁CHO细胞表达的渠道。
  3. 图表显示了典型的当前配置文件,获得两个脉冲协议,这是必要的,因为其迅速灭活率作为用来揭示HERG尾电流,HERG通道被激活时。图表显示激活电压的依赖,并在IonFlux仪器记录的HERG电流的整改属性。
  4. 这些录音密切复制行为在文学的代表接受通道。受体阻滞剂的剂量 - 反应曲线揭示的IC50为60纳米参考化合物,160纳米,1毫米值。

Disclosures

没有利益冲突的声明。

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