IonFlux : 플레이트 리더 심플리 시티와 함께​​ 자동화된 패치 클램프 시스템 - 광고

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Summary

IonFlux 자동 패치 클램프 시스템은 높은 처리량, 전기 생리학 애플 리케이션의 광범위한 비용 효율적인 이온 채널 검사를 제공합니다. 빠른 복합 교환, 데이터 포인트 당 저렴한 비용, 편리하고 잘 플레이트 형식은 리간드 및 전압 - 게이 티드 이온 채널 대상 모두에 대한 시스템이 이상적입니다. IonFlux 16 수동 패치 클램프 장비의에 대한 비용 진정한 자동 패치 클램프 성능을 제공하면서 IonFlux HT는 하루 업계 최고 10,000 데이터 포인트를 제공합니다.

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Abstract

이온 채널은 중추 신경 시스템과 신경 및 근육의 생리 규제에 중요한 역할을한다. 결과적으로 그들은 같은 당뇨병과 간질 등 수많은 질병의 조건에 연루, 새로운 약품에 대한 선도적인 목표물되었습니다. 패치 클램프 방법은 체외에서 이온 채널의 활동을 평가하기위한 황금 표준입니다. 수동 방식으로 구현하면, 패치 클램프 분석은 물론 의미있는 약물 발견과 개발 노력에 필요한 임계값 아래와 같습니다 하루에 약 10 데이터 포인트로 제한됩니다. IonFlux 플랫폼을 포함하여 모두 전압 및 리간드 - 게이 티드 이온 채널 애플 리케이션의 넓은 범위를 수용 두 확장 가능한 구성으로 제공 편리하고 높은 처리량을 잘 플레이트 형식으로 패치 클램프 방식을 자동화하는 독점 자 플레이트 Microfluidic 기술을 사용합니다. IonFlux HT는 약물 발견과 개발에 높은 처리량 검사에 적합합니다. 이 버전은 하루에 10,000 개의 데이터 지점까지 제작이 가능합니다. 추가 처리량, 최대 4 개의 IonFlux HT 시스템은 최대 하루 40,000 데이터 포인트에 대해 하나의 액체 처리 로봇 주변 못하였 느니라 수 있습니다. 데이터 포인트 당 낮은 비용과 최소한의 복합 사용은 약물 검사, 약물 개발, 안전 독성학, 그리고 이온 채널 연구 IonFlux HT 이상적인합니다. IonFlux 16 같은 세포주 개발, 돌연변이 선별하고, 분석 개발과 같은 중간 처리 애플 리케이션을위한 비용 효율적인 솔루션입니다. 사상 처음으로, 사용자가 수동으로 패치 클램프 장비에 유사한 비용 진정한 자동 패치 클램프 기술에 액세스할 수 있습니다.

Protocol

1. IonFlux 시스템 개요

  1. IonFlux 시스템은 benchtop 악기, SBS 표준 웰 플레이트 형식의 독점 microfluidic 장치 및 완벽한 수집 및 분석 소프트웨어 패키지로 구성되어 있습니다.
  2. 기타 자동 패치 클램프기구와는 달리, IonFlux 독자 플레이트 판독기성이 유사한 매우 작은 풋프린트을 유지합니다. 그것은 쉽게 benchtop에 맞는, 그리고 일반적으로 사용되는 실험실 자동화 로봇 사용할 통합을 가지고 IonFlux은 기존의 높은 처리량 검사 작업 흐름뿐만 아니라 연구소에 완벽하게 맞게 할 수 있습니다.
  3. IonFlux 20 세포의 인구가 각각의 레코딩 영역에 패치하고, 자신의 해류가 단일 데이터 지점을 생산하기 평균는 것을 의미합니다 앙상블 녹음을 활용합니다. 이러한 접근 방식은 높은 성공률을 생산하고 세포 변화의 영향을 최소화합니다.
  4. 각 384 자 플레이트 256 독특한 화합물을 처리하고 512 데이터 포인트를 생성할 수 있습니다. IonFlux 16 프로세스와 함께 사용 96 - 웰 플레이트 64 화합물 및 128 데이터 포인트를 생성합니다.
  5. 높은 처리량 전기 생리학 화면을 실행할 수있는 능력을 갖는 것은 이온 채널 실험의 다양한 문을 엽니다. 일반적인 어플 리케이션에는 GABA와 nicotinic 수용체와 같은 나트륨과 칼륨 채널과 같은 전압 문이 채널, hERG의 칼륨 채널에 초점을 안전 독극물과 같은 리간드 문이 채널 실험을 포함합니다. 돌연변이와 세포 라인 화면도 수행할 수 있습니다. 또한, IonFlux은 이온 채널의 기능 표현의 분석이 가능합니다.

2. 데이터 수집 및 분석

  1. IonFlux 시스템은 데이터 수집 및 분석을위한 고급 소프트웨어 패키지와 함께 제공됩니다. 설정, 런타임, 데이터 분석 : 소프트웨어가로드되면 사용자는 세 가지 기본 화면을 볼 수 있습니다.
  2. 설치 모드는 실험을 정의하는 데 필요한 컨트롤을 모두 포함하고 있습니다. 이 모드에서는 실험은 초기화되며 전체 또는 반액 번호판이 지정되어 있습니다. 활용 화합물의 테이블은 또한 설정 모드에서 가져옵니다.
  3. 프라임, 함정, 브레이크 및 데이터 수집 : 실험 순서 탭에서 매개 변수가 실험의 네 가지 단계에 대해 설정됩니다. 여기서 전압 프로토콜이 정의됩니다.
  4. 런타임 모드가 수집되는대로 데이터를 보여줍니다. 실시간 스위프 창은 모든 채널에 대해 각각의 전압 펄스 동안에 발생하는 전류를 표시합니다. 실험 진행 상황도보고됩니다.
  5. 데이터 분석 모드는 완료 실험을 신속하게 검토 및 분석이 가능합니다. 도구는 청소 및 추적 데이터뿐만 아니라 화합물 소개와 같은 특정 이벤트를 로깅을보고 제공됩니다. 히트지도 모듈은 화면에서 가장 유망한 화합물을 파악하는 데 도움을줍니다. 모든 데이터는 쉽게 Excel 및 다른 데이터베이스 응용 프로그램에. CSV 형식으로 내보낼 수 있습니다.

3. IonFlux 응용 프로그램 - GABAA의 변조기

  1. 실험과 대상 화면의 다양한는 IonFlux 시스템에서 수행할 수 있습니다. 여기 예제는 Millipore에서 HEK293 세포로 표현 인간 GABA - A 수용체의 변조기에 대한 분석을 증명합니다. 이 리간드 - 게이 티드 염화물 채널 따라서 간질, 불안 및 불면증에 중요한 약물 표적을 구성, CNS 억제에 관여합니다.
  2. 심사 assays를 수행하려면, 셀 ensembles은 수용체에 allosteric 사이트에서 바인딩 변환 물질의 농도 상승의 존재에 기본 리간드 GABA의 농도에 노출 EC20했다.
  3. 줄거리 3 NM 및 0.5 μm의의 EC50 값이 취득했다하는 즉 트리아졸람과 다이아제팜 신경 안정제 .. 이건 극도의 클래스에 두 긍정적인 allosteric 변조기, 투약에 대한 응답 곡선을 보여줍니다.
  4. 명백한 GABA 친화력에있는 변조기에 의존 변화는 다음 cumulatively이 경우, 3 μm의의 다이아제팜에 변조기의 고정 농도의 존재의 다른 GABA 농도를 적용하여 산출된 것입니다.
  5. 이런 유형의 실험은 IonFlux 악기에서 사용할 수있는 흐름을 통해 유체 설계에 의해 활성화됩니다. GABA에 대한 EC50은 변조기의 존재 증가 바인딩 친화력으로 인해 낮은 농도로 약 1 μm의에 의해 이동되었습니다.

4. IonFlux 응용 프로그램 - hNav1.8의 연결 나트륨 채널의 블라

  1. IonFlux 악기도 여기의 연결 hNav1.8 나트륨 채널, 고통의 인식에 관련된 전압 - 문이 채널 차단제에 대한 전형적인 그림과 예제를 포함하여 다른 약리 실험을 용이하게합니다. 이 분석에서는 HEK293 세포에서 표현 나 + 채널, 매초마다 적용 -120 MV 뮤직 비디오에서 0 전압 클램프 단계에 의해 활성화되었다.
  2. 채널 depolarizat 사이에 푹 상태를 다시 입력부터이 프로토콜은 따라서, 채널의 토닉 블록에 대한 정보를 제공합니다이온. 누적 차단기 선량 - 반응 곡선은 각각, 320 μm의 34 μm의의 IC50 값을 제공 지역 anesthetics lidocaine과 tetracaine에 대한 그림입니다.
  3. 두 번째 그래프에서 hNaV1.8에 대한 lidocaine 친화력이 hNaV1.7에 대한 다른 전압 - 문이 나 + 채널이 고통의 감각에 관련된 것을 비교합니다. hNaV 1.7에 대한 IC50는 hNaV1.8에 비해이 채널 lidocaine을 바인딩하면 10 배로 낮은 친화력을 드러내는 세 MM,로 발견되었습니다.

5. IonFlux 응용 프로그램 - hERG 심사

  1. IonFlux 악기도 hERG 검사 등 안전 약리학 어플 리케이션에 사용할 수 있습니다. hERG의 칼륨 채널은 사람들이 금단 증상을 선도 시장에서 다양한 약물과 관련된 불리한 심장 사건에 연루되어, 그리고 그것은 이제 새로운 약물 화합물이 채널에 대한 검사를하는 것이 필요합니다.
  2. 차단기 선량 - 반응 곡선은 즉 세 널리 사용되는 참조 화합물, terfenadine, cisapride 및 quinidine에 대한 CHO 세포의 표현 특성 전압 - 의존 hERG 채널을 수행했다.
  3. 그래프 hERG 채널이 활성화되면 같은 hERG의 꼬리 전류를 공개하는 데 사용하기 때문에 빠른 불활 성화 속도가 필요한 두 개의 펄스 프로토콜에 의해 얻은 전형적인 현재의 프로필을 보여줍니다. 그래프 활성화 전압 - 의존성과 IonFlux 악기에 기록된 hERG 전류의 정류 특성을 보여줍니다.
  4. 이 녹음은 밀접하게 문학의 대표 수락 채널 동작을 복제합니다. 차단기는 선량 - 반응 곡선은 60 nm의 세 가지 기준 화합물, 160 NM, 1 MM에 대한 IC50 값을 구합니다.

Disclosures

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

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