IonFlux: Automatiserad Patch Clamp System med plattläsare Enkelhet - Annons

Application Notes
 

Sign in to register to receive emails with product information.

Summary

Den IonFlux Automated Patch Clamp System ger hög genomströmning, kostnadseffektiv jonkanal screening för ett brett spektrum av elektrofysiologi applikationer. Snabb förening utbyte, låg kostnad per datapunkt, och bekväm väl format platta gör systemet idealiskt för både ligand-och spänningskänsliga mål jonkanal. Den IonFlux HT ger en branschledande 10 tusen datapunkter per dag, medan IonFlux 16 ger sann automatiserad prestanda patch clamp för om kostnaden för en manuell patch clamp rigg.

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Jonkanaler spelar en avgörande roll i regleringen av det centrala nervsystemet och fysiologi av nerver och muskler. Som ett resultat har de varit inblandade i ett flertal sjukdomstillstånd som diabetes och epilepsi, och är ledande mål för nya läkemedel. Plåstret clamp metoden är den gyllene standarden för att utvärdera verksamheten jonkanal in vitro. När genomförs en manuell mode, är plåstret klämma analysen begränsas till cirka 10 datapunkter per dag, vilket är långt under den tröskel som krävs för meningsfulla läkemedelsforskning och utveckling. Den IonFlux Plattformen använder egenutvecklade brunnar mikroflödessystem teknik för att automatisera metoden patch clamp på ett bekvämt och hög kapacitet brunnar format som kommer i två skalbara konfigurationer för att rymma ett brett spektrum av tillämpningar, inklusive både spänning och ligandreglerade jonkanaler. Den IonFlux HT lämpar sig för hög throughput screening inom läkemedelsforskning och utveckling. Denna version är kapabel att producera upp till 10.000 datapunkter per dag. För ytterligare genomströmning, kan upp till fyra IonFlux HT-system vara klädd runt en enda vätskehantering robot för upp till 40.000 datapunkter per dag. Den låga kostnaden per datapunkt och minimal förening användning gör IonFlux HT idealisk för drug screening, läkemedelsutveckling, säkerhet toxikologi och jonkanal forskning. Den IonFlux 16 är en kostnadseffektiv lösning för måttlig genomströmning applikationer såsom cellinje utveckling, mutant screening och analys utveckling. För första gången någonsin användare har tillgång till äkta automatiserad patch clamp tekniken till en jämförbar kostnad för en manuell patch clamp rigg.

Protocol

1. IonFlux Systemöversikt

  1. Den IonFlux-systemet består av en bänk instrument, en patentskyddad mikroflödessystem enhet i en SBS-standard brunnar format, och en komplett insamling och analys programpaket.
  2. Till skillnad från andra automatiserade instrument patch clamp upprätthåller IonFlux läsaren en mycket liten yta som är nära-liknar en plattläsaren. Den passar lätt på bänk, och har tillgång integration med ofta använda robotar laboratorium automatisering, vilket gör att IonFlux att passa perfekt in i befintliga höga arbetsflöden throughput screening och forskningslaboratorier.
  3. Den IonFlux använder ensemblen inspelning, vilket innebär att en befolkning på 20 celler patchade i varje inspelning zon, och deras strömmar genomsnitt att utarbeta en enda datapunkt. Denna metod ger ett bra resultat och minimerar effekten av cellen variabilitet.
  4. Varje 384-brunnar kan bearbeta 256 unika föreningar och producera 512 datapunkter. Den 96-brunnar som används med IonFlux 16 processer 64 föreningar och producerar 128 datapunkter.
  5. Efter att ha möjlighet att köra hög skärmar elektrofysiologi öppnar dörren till ett brett utbud av jonkanaler experiment. Vanliga tillämpningar inkluderar experiment med ligand gated kanaler som GABA och nikotinreceptorer, spänning gated kanaler som natrium och kalium kanaler och säkerhet toxikologi med fokus på hERG kalium kanal. Mutant och cellinje skärmar kan också göras. Dessutom möjliggör IonFlux analys av den funktionella uttryck av jonkanaler.

2. Datainsamling och analys

  1. Den IonFlux Systemet levereras med en avancerad mjukvara för datainsamling och analys. När programvaran är laddad, kommer användaren att se tre huvudskärmar: Setup, Runtime och analys av data.
  2. Inställningsläget innehåller alla de kontroller som behövs för att definiera ett experiment. I detta läge är experiment initieras och hela eller halva plattan är utsedd. Tabellen utnyttjad föreningar är också importeras i set-up-läge.
  3. I den experimentella Sequence fliken är parametrar för de fyra faserna av försöket Prime, Trap, Break, och datainsamling. Här är spänningen protokoll definieras.
  4. Den Runtime läge visar de data som samlas in. Real-time Sopa fönstret visar alstras under varje spänning puls för varje kanal. Experimentell framsteg rapporteras också.
  5. Dataanalys läget möjliggör snabb genomgång och analys av genomförda experiment. Verktyg finns för visning sopa och spåra data, samt för att logga speciella händelser såsom förening introduktion. En Hit Karta modul hjälper till att identifiera de mest lovande föreningar i skärmen. Alla data kan enkelt exporteras. CSV-format till Excel och andra databasapplikationer.

3. IonFlux Program - GABAA Modulators

  1. Ett brett utbud av experiment och skärmar mål kan utföras på IonFlux System. Här är ett exempel visats analys för modulatorer av den mänskliga GABA-A receptorn, uttryckt i HEK293 celler från Millipore. Detta ligandreglerade kloridkanal är inblandad i CNS-hämning, vilket utgör ett viktigt läkemedel mål i epilepsi, ångest och sömnlöshet.
  2. För att utföra screening-analyser, var cell ensembler utsatta för EC20 koncentrationer av de infödda ligand GABA, i närvaro av stigande koncentrationer av modulator substanser som binder till allosteriskt plats på receptorn.
  3. Tomterna visar dos-respons-kurvor för två positiva allosteriskt modulatorer i bensodiazepin klassen, nämligen triazolam och diazepam, som EC50 värden på 3 Nm och 0,5 mikroM erhölls.
  4. Modulatorn-beroende förändring uppenbar GABA affinitet fastställdes sedan genom en sammantagen tillämpning av olika GABA koncentrationer i närvaro av en fast koncentration av modulator, i detta fall, 3 mikroM diazepam.
  5. Denna typ av experiment är aktiverat av genomströmning fluidic designen finns i IonFlux instrument. EC50 för GABA försköts med cirka 1 mikroM till lägre koncentrationer på grund av ökade bindningsaffinitet i närvaro av modulatorn.

4. IonFlux Program - Blockering av neuronala hNav1.8 Natrium Channel

  1. Den IonFlux instrument underlättar även andra farmakologiska experiment, bland annat exemplet typiskt för blockerare av neuronala hNav1.8 natrium kanal, en spänningskänsliga kanaler är inblandade i uppfattningen av smärta. I detta test var Na +-kanalen, uttryckt i HEK293 celler aktiveras av spänning klämma steg från -120 mV till 0 mV, tillämpad varje sekund.
  2. Detta protokoll ger därför information om tonic block av kanalen, eftersom den kanal som kommer in igen vilade tillstånd mellan depolarizatjoner. Kumulativ blockerare dos-respons-kurvor illustreras för lokalbedövningsmedel lidokain och tetrakaine, vilket ger IC50-värden på 320 ìm och 34 mikroM, respektive.
  3. I en andra grafen är lidokain affinitet för hNaV1.8 jämfört med för hNaV1.7, en annan spänningskänsliga Na +-kanal involverad i smärtupplevelse. IC50 för hNaV 1,7 befanns vara 3 mm, avslöjar en tio gånger lägre affinitet när denna kanal binder lidokain, jämfört med hNaV1.8.

5. IonFlux Program - hERG Screening

  1. Den IonFlux Instrumentet kan även användas för tillämpningar säkerhetsfarmakologi som hERG screening. Den hERG kalium kanal har varit inblandad i negativa kardiella händelser i samband med olika läkemedel på marknaden, vilket leder till att de dras tillbaka, och det krävs nu att alla nya läkemedelssubstanser vara avskärmade mot denna kanal.
  2. Blockerare dos-respons-kurvor utfördes för karakteristiska spänning beroendet hERG kanaler uttryckt i CHO celler för tre vanliga referens föreningar, nämligen terfenadin, cisaprid och kinidin.
  3. Diagrammen visar den typiska profilen erhålls när hERG kanaler aktiveras genom ett två-puls-protokollet, som är nödvändig på grund av dess snabba inaktiveringen takt, som används för att avslöja hERG svans strömmar. Diagrammen visar aktiveringen spännings-beroende och egenskaper rättelse av hERG ström som registreras i IonFlux instrumentet.
  4. Dessa inspelningar replikera nära accepteras kanal beteende representerade i litteraturen. Den blockerare dos-respons-kurvor avslöjar IC50-värden för de tre referensåren föreningar av 60 nm, 160 nm och 1 mm.

Disclosures

Inga intressekonflikter deklareras.

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics