IonFlux: Автоматизированная система зажим патч с пластины Простота Reader - РЕКЛАМА

Application Notes
 

Sign in to register to receive emails with product information.

Summary

IonFlux Автоматизированная система зажим патч обеспечивает высокую пропускную способность, экономически эффективный ионный канал скрининга для широкого спектра приложений электрофизиологии. Быстрый обмен соединение, низкая стоимость каждой точки данных, а также удобные форматы пластины, чтобы система идеально подходит как для лиганд-и напряжения закрытого цели ионного канала. IonFlux HT обеспечивает передовые 10000 точек данных в день, в то время IonFlux 16 позволяет полностью автоматизирован производительность зажим патч для о стоимости ручной установки зажим патч.

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Ионные каналы играют важную роль в регуляции центральной нервной системе и физиологии нервов и мышц. В результате они были вовлечены в многочисленные условия, болезни, такие как диабет и эпилепсия, и являются ведущими целями новых лекарств. Метод патч зажим золотой стандарт для оценки активности ионных каналов в пробирке. При реализации в руководстве моды, анализ патч зажим ограничена примерно до 10 точек данных в день, что значительно ниже порога необходимого для значимого открытия и разработки лекарственных усилий. Платформа IonFlux использует собственные Ну пластины микрожидкостных технологии для автоматизации метода патч зажим в удобном и высокую пропускную способность и формата пластина, которая поставляется в двух конфигурациях масштабируемой для размещения широкого спектра приложений, включая как напряжения и лиганд-ионные каналы. IonFlux HT предназначен для высокопроизводительного скрининга в открытия и разработки лекарственных. Эта версия способна производить до 10000 точек данных в день. Для дополнительной пропускной способности, до четырех IonFlux HT системы могут быть выстроены вокруг одного робота перевалке жидких до 40000 точек данных в день. Низкая стоимость на каждую точку данных и минимальным использованием соединения делают IonFlux идеальным HT для скрининга препаратов, разработки лекарств, безопасности токсикологии, а также ионного канала исследований. IonFlux 16 представляет собой экономически эффективное решение для средних приложений, таких как пропускная способность клеточной линии развития, мутант скрининга и анализа развития. Впервые когда-либо, пользователи имеют доступ к истинным автоматизированная технология зажим патч на сопоставимые затраты на ручной установки зажим патч.

Protocol

1. IonFlux Обзор системы

  1. Система IonFlux состоит из настольного прибора, собственных микрожидкостных устройств в СБС-стандартный формат и пластинки, и полное приобретение и пакет программного обеспечения для анализа.
  2. В отличие от других автоматизированных инструментов зажим патч, IonFlux читатель поддерживает очень небольшой размер которой тесно напоминает ридер. Он легко умещается на настольных, и располагает интеграции с широко используемые роботы лаборатории автоматизации, что позволяет IonFlux, чтобы соответствовать легко в существующий высокий скрининг рабочие процессы, а также научно-исследовательские лаборатории.
  3. IonFlux использует ансамбль записи, это означает, что население 20 ячеек заделаны в каждой записи зоны, и их токов усредняются для получения одной точки данных. Такой подход дает высокий уровень успеха и минимизирует эффект клеточной изменчивости.
  4. Каждый 384-луночного планшета может обрабатывать 256 уникальных соединений и производить 512 точек данных. 96-луночного планшета используется с IonFlux 16 процессов 64 соединений и производит 128 точек данных.
  5. Имея возможность запуска экранов с высоким электрофизиологии пропускной открывает двери для широкого круга экспериментов ионного канала. Общие приложения включают в себя эксперименты с лигандом закрытых каналов, таких как ГАМК и никотиновые рецепторы, напряжения закрытого каналы, такие как натрий и калий каналы и безопасности токсикологии упором на калиевого канала hERG. Мутант и клеточной линии экраны могут быть выполнены. Кроме того, IonFlux позволяет анализировать функциональное выражение ионных каналов.

2. Устройства сбора данных и анализа

  1. Система IonFlux поставляется с передовой программный комплекс для сбора данных и анализа. После того как программа загружена, пользователь увидит три основных экрана: установки, выполнения и анализа данных.
  2. Режим настройки содержит все элементы управления, необходимые для определения эксперимента. В этом режиме эксперимента подготовлены, а все или половину пластины обозначен. Таблица используемых соединений также импортируемые в режиме настройки.
  3. В экспериментальной вкладке Sequence, параметры задаются на четыре фазы эксперимента: премьер-ловушки, брейк, и сбора данных. Здесь напряжение протоколов определены.
  4. Время режим показывает данные, как это собирается. В режиме реального времени развертки окно отображает токов, генерируемых в течение каждого импульса напряжения на каждый канал. Экспериментальные прогресс также сообщается.
  5. Режим Анализ данных позволяет быстро обзор и анализ завершенных экспериментов. Инструменты предназначены для просмотра подметать и данные трассировки, а также для регистрации определенных событий, таких как соединения внедрения. Модуль Hit карта помогает выявить наиболее перспективных соединений в экран. Все данные могут быть легко экспортированы в формате. CSV для Excel и других приложений баз данных.

3. IonFlux Приложения - ГАМК-модуляторы

  1. Разнообразные эксперименты и целевых экраны могут быть выполнены на IonFlux системы. Здесь пример продемонстрировал тест для модуляторов человека ГАМК-рецепторов, выраженное в НЕК293 от Millipore. Этот лиганд закрытого канала хлорида участвует в торможение ЦНС, таким образом, составляющих важную цель препарата при эпилепсии, тревоги и бессонницы.
  2. Для проведения скрининга, сотовые ансамбли подвергались EC20 концентрации родной лигандом ГАМК, в присутствии возрастания концентрации веществ, которые связывают модулятор на аллостерических сайта на рецептор.
  3. Графики показывают, кривых доза-реакция для двух положительных аллостерических модуляторы в бензодиазепина класса, а именно триазолам и диазепам, для которых EC50 значения 3 нм и 0,5 мкм были получены.
  4. Модулятор-зависимый сдвиг в очевидной близости ГАМК тогда определяется кумулятивно применяя различные концентрации ГАМК в присутствии фиксированной концентрации модулятор, в данном случае, 3 мкМ диазепама.
  5. Такого рода эксперимент включено по проточной жидкостный дизайна доступны в IonFlux инструментов. EC50 для ГАМК был перенесен примерно на 1 мкМ до более низкой концентрации из-за увеличения аффинности связывания в присутствии модулятора.

4. IonFlux применения - Блокаторы нейронов hNav1.8 натриевых каналов

  1. IonFlux инструмент облегчает также других фармакологических экспериментов, в том числе пример, показанный здесь типичны для блокаторов нейронов hNav1.8 натриевых каналов, напряжения закрытого канала, участвующих в восприятии боли. В данном анализе Na + каналов, выраженная в НЕК293 был активирован ступеней напряжения зажим от -120 мВ до 0 мВ, применяемые в секунду.
  2. Этот протокол, следовательно, обеспечивает информацию о тоник блок канала, так как канал снова вступает отдыхали состояние между depolarizatионов. Накопительное блокатор кривых доза-реакция проиллюстрированы на местные анестетики лидокаин и тетракаин, обеспечивая IC50 значения 320 мкм и 34 мкм соответственно.
  3. На втором графике, лидокаин сродством к hNaV1.8 сравнивается, что для hNaV1.7, другого напряжения закрытого Na + каналов, участвующих в болевых ощущений. IC50 для hNaV 1,7 было установлено, что 3 мм, раскрывая десять раз ниже, близость, когда этот канал связывает лидокаин, по сравнению с hNaV1.8.

5. IonFlux Приложения - hERG Скрининг

  1. IonFlux прибор может также использоваться для обеспечения безопасности фармакологии приложений, таких как скрининг hERG. Канал hERG калия был вовлечен в неблагоприятных сердечных событий, связанных с различными лекарств на рынке, что приводит к их снятия; и в настоящее время требуется, чтобы все соединения нового препарата пройти обследование на этом канале.
  2. Blocker кривых доза-реакция проводились для характерная зависимость напряжения каналов hERG выражается в клетках СНО на три часто используемых ссылкой соединений, а именно: терфенадин, цизаприд и хинидин.
  3. Графики показывают типичный текущий профиль, полученные при hERG каналы активируются двухимпульсного протокола, которая необходима из-за его быстрой скорости инактивации, как использованы для выявления токов hERG хвост. Графики показывают, активация напряжения зависимость и ректификации свойства текущего hERG записан в IonFlux инструмента.
  4. Эти записи тесно повторить принято поведение канала представлены в литературе. Блокатор кривых доза-реакция выявить IC50 значения для трех ссылкой соединений 60 нм, 160 нм и 1 мМ.

Disclosures

Нет конфликта интересов объявлены.

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics