טיהור פלסמיד דנ"א מ מושבות חיידקים באמצעות Miniprep Qiagen Kit

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Zhang, S., Cahalan, M. D. Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit. J. Vis. Exp. (6), e247, doi:10.3791/247 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

טיהור פלסמיד דנ"א מן החיידק היא טכניקה הליבה של שיבוט מולקולרי. טיהור בקנה מידה קטן (miniprep) מתוך פחות מ 5 מ"ל של תרבית החיידקים הוא דרך מהירה לצורך אימות לשבט או בידוד ה-DNA, ואחריו עוד תגובות אנזימטיות (שרשרת פולימראז התגובה אנזים העיכול הגבלה). הנה, אנחנו וידאו מוקלט הנהלים הכללי של miniprep באמצעות ערכת QIAprep של QIAGEN Miniprep 8, במטרה להציג את הטכניקה היעילה ביותר על כללי למתחילים טכניקות הביולוגיה המולקולרית. ההליך כולו מבוסס על תמוגה אלקליין של תאים E. coli ואחריו ספיחה של ה-DNA על סיליקה בנוכחות מלח גבוהה. הוא מורכב משלושה שלבים: 1) הכנה וניקוי של lysate חיידקי, 2) ספיחה של ה-DNA על הממברנה QIAprep, 3) כביסה elution של DNA פלסמיד. כל הצעדים נעשים ללא שימוש פנול, כלורופורם, CsCl, ברומיד ethidium, ללא משקעים אלכוהול. בדרך כלל לוקח פחות מ 2 שעות כדי לסיים את ההליך כולו.

Comments

6 Comments

  1. A very helpful and clear demonstration. Thanks!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 9:33 PM
  2. With this kit is it best to do an alcohol precipitation after or unnecessary?   Thank you

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 4, 2008 - 7:26 AM
  3.   Hello from QIAGEN, There is no need to do an alcohol precipitation after this procedure - the DNA is ready to use as eluted from the QIAprep column. You can see the handbook for this kit online here if you would like:     http://www1.qiagen.com/literature/handbooks/literature.aspx?id=1000²48 -QIAGEN Technical Service     http://www1.qiagen.com/Contact/QIAGENWorldWide.aspx

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 4, 2008 - 8:18 AM
  4. By using this kit, what can I do if I'd like to increase the yield of plasmid with a low copy number? What is the maximum volume of culture that can be harvested?
    Thank you very much.

    Reply
    Posted by: Soon Keat O.
    July 18, 2009 - 10:51 AM
  5. Your demonstration is very good but you didn't mentioned the volumes of buffer added and the speed and time of centrifuge

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 2, 2010 - 10:40 AM
  6. Thanks for doing that video. There's not a lot of theory in there, but it is surely helpful for beginners. I'm holding onto it for future coworkers.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 23, 2010 - 5:02 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics