Purifying Plasmid DNA från kolonier Använda Qiagen Miniprep Kit

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Zhang, S., Cahalan, M. D. Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit. J. Vis. Exp. (6), e247, doi:10.3791/247 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Plasmid DNA-rening från E. coli är en central teknik för molekylär kloning. Småskalig rening (miniprep) från mindre än 5 ml bakteriekultur är ett snabbt sätt för klon verifiering eller isolering av DNA, följt av ytterligare enzymatiska reaktioner (polymeraskedjereaktion och restriktionsenzymanalys matsmältningen). Här har vi video-inspelade de allmänna förfarandena i miniprep genom QIAGEN är QIAprep 8 Miniprep Kit, som syftar till att införa detta mycket effektiv teknik för att den allmänna nybörjare för molekylärbiologisk teknik. Hela proceduren är baserad på alkalisk lys av E. coli-celler följt av adsorption av DNA på kisel i närvaro av höga salt. Den består av tre steg: 1) förberedelse och clearing av en bakteriell lysat, 2) adsorption av DNA på QIAprep membran, 3) tvättning och eluering av plasmid-DNA. Alla steg utförs utan användning av fenol, kloroform, CsCl, etidiumbromid och utan alkohol nederbörd. Det tar vanligtvis mindre än 2 timmar att slutföra hela förfarandet.

Comments

6 Comments

  1. A very helpful and clear demonstration. Thanks!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 9:33 PM
  2. With this kit is it best to do an alcohol precipitation after or unnecessary?   Thank you

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 4, 2008 - 7:26 AM
  3.   Hello from QIAGEN, There is no need to do an alcohol precipitation after this procedure - the DNA is ready to use as eluted from the QIAprep column. You can see the handbook for this kit online here if you would like:     http://www1.qiagen.com/literature/handbooks/literature.aspx?id=1000²48 -QIAGEN Technical Service     http://www1.qiagen.com/Contact/QIAGENWorldWide.aspx

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 4, 2008 - 8:18 AM
  4. By using this kit, what can I do if I'd like to increase the yield of plasmid with a low copy number? What is the maximum volume of culture that can be harvested?
    Thank you very much.

    Reply
    Posted by: Soon Keat O.
    July 18, 2009 - 10:51 AM
  5. Your demonstration is very good but you didn't mentioned the volumes of buffer added and the speed and time of centrifuge

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 2, 2010 - 10:40 AM
  6. Thanks for doing that video. There's not a lot of theory in there, but it is surely helpful for beginners. I'm holding onto it for future coworkers.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 23, 2010 - 5:02 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics