마우스에 작은 창자 이식

Biology

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Summary

마우스 작은 창자 이식 모델은 면역 거부하고 화면의 새로운 immunosuppressive 약물 mechanismes을 연구하는 중요한 도구로 인식되었습니다. 그러나이 모델은 관련된 기술이 매우 기술적으로 도전하기 때문에 사용하는 제한됩니다. 이제 우리는 수정 기법을 소개합니다.

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Liu, F., Kang, S. Small Bowel Transplantation In Mice. J. Vis. Exp. (7), e258, doi:10.3791/258 (2007).

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Abstract

1990 년 이후, tacrolimus 기반 immunosuppression와 향상된 수술 기법, 강력한 immunosuppressive 약물의 증가 배열, 감염의 예방 및 적절한 환자 선택의 개발은 소장 이식 모든 종류의 보험 수리적 그래프트 및 환자 생존 속도를 향상 도움이되었습니다. 비경 구 영양의 돌이킬 수없는 장 실패와 합병증 환자는 이제 정기적으로 소장 이식을 위해 고려되어야합니다. 그러나, 작은 창자 이식의 생존 속도가 개선하기 위해 느린되었습니다들은 신장, 간, 심장 및 폐와 함께 점점 호의를 비교합니다. 작은 창자 이식은 다른 장기에 비해 아직 만족스럽지 못하다. 또한 발전 면역학 및 이식의 생리학의 이해에 따라 수 있으며 크게 동물 모델에 의해 용이하실 수 있습니다. 마우스 작은 창자 이식 모델의 광범위한 사용은 이식 굿의 면역학과 생리학의 연구뿐만 아니라 초기 거부를 진단하는 효율적인 방법으로 필요합니다. 그러나이 모델은 관련된 기술이 매우 기술적으로 도전하기 때문에 사용하는 제한됩니다. 우리는 수정 기술을 개발했습니다. 포털 정맥 및 하부 대정 맥의 교합 (anastomosis)을 만들 때, 두 사람은 남아의 봉합은 기증자의 문맥과 함께 근위 아펙스과받는 사람의 하부 대정 맥의 말초 꼭대기에서 이루어집니다. 근위 아펙스 체류 한 매듭 후 오른쪽 하부 대정 맥의 벽 및 기증자의 포털을 봉합 후, 하부 대정 맥과 기증자의 포털 정맥의 왼쪽 벽면은 하부 대정 맥의 내부에서 계속 봉합과 함께 폐쇄 정맥은 10-0 봉합과 하부 베나 동굴 밖으로 지속적으로 봉합과 함께 폐쇄됩니다. 문합 단지 하부 대정 맥과 10-0 봉합의 한쪽에 만들어되기 때문에이 방법을 수행하기 쉬운 것은 출혈과 혈전증을 피하기 위해 오른쪽 크기입니다. 이 문서에서는, 우리는 비디오를 보완하기 위해 기술의 세부 사항을 제공합니다.

Protocol

기증자 준비와 작은 창자 수확 :

  1. 마우스는 작동 분야에 pentobarbital과 배치 부정사의 intraperitoneal 주사와 함께 ansetheized 있습니다.
  2. 긴 정중선 복부 절개가 이루어집니다. 공장의 근위를 식별하고 6-0 봉합과 출혈도 잡았입니다. 공장 타이로 말초 혈관이 부착된 mesenteric 8-0 봉합과 출혈도 잡았 있습니다.
  3. 회장의 말초를 식별하고 6-0 봉합과 출혈도 잡았입니다. 회장에 말초 첨부된 mesenteric 선박은 8-0 봉합과 출혈도 잡았 있습니다.
  4. 포털은 주변의 지방과 연결된 조직에서 노출되어 출혈도 잡았과 pancreaticoduodenal와 지라 정맥을 나눌 수 있습니다.
  5. 복부 대동맥은 노출과 주변 조직에서 우수한 mesenteric 동맥을 노출합니다.
  6. 헤파린 (10u/ml) 1 ML은 heparinization에 대한 열등 베나의 정맥에 주입합니다.
  7. 포털 정맥은 간을 hilum에 나뉘어 있으며, 우수한 mesenteric 동맥은 대동맥의 카렐 패치를 포함하여 대동맥에서 나누어집니다.
  8. 공장과 회장은 관계에 말초 나누어집니다. 전체 작은 창자를 제거 후, ​​° C 생리 식염수에 4 저장됩니다.

수신자 준비 및 이식 :

  1. 마우스는 작동 분야에 pentobarbital과 배치 부정사의 intraperitoneal 주사와 함께 ansetheized 있습니다.
  2. 긴 정중선 복부 절개가 이루어집니다. 복부 내용은 복부 대동맥과 하부 대정 맥을 노출 거즈와 복부 외부 철회 있습니다.
  3. 복부 대동맥 및 하부 대정 맥의 지점은 노출과 10-0 봉합과 출혈도 잡았 있습니다.
  4. 근위 및 말초 묶인는 각각 대동맥 및 하부 베나의 정맥 주위에 배치됩니다.
  5. venotomy는 30 게이지 바늘로받는 사람의 하부 대정 맥에서 이루어집니다. 오프닝은 다음 마이크로 가위로 기증자의 포털 정맥와 같은 길이로 연장됩니다.
  6. aortotomy는 30 게이지 바늘로받는 사람의 복부 대동맥에서 이루어집니다. 오프닝은 다음 마이크로 가위로 기증자의 뛰어난 mesenteric의 동맥 카렐 패치와 같은 길이로 연장됩니다
  7. 복부 대동맥 및 하부 대정 맥의 incisions는 생리 식염수로 perfused 있습니다.
  8. 기증자의 작은 창자는 거즈로 덮고있는받는 사람의 복부의 왼쪽에 위치합니다.
  9. 숙박 봉합은 근위 꼭대기와 기증자의 뛰어난 mesenteric의 동맥 카렐 패치와 함께받는 복부 대동맥의 말초 정점에 위치하고 있습니다.
  10. 받는 사람의 복부 대동맥과 기증자의 뛰어난 mesenteric의 동맥 카렐 패치의 오른쪽의 문합은 계속 봉합 처음에 완료됩니다.
  11. 두 사람은 남아의 봉합은 기증자의 포털 정맥과받는 사람의 하부 대정 맥의 문합을위한 기증자의 포털과 근위 아펙스과받는 사람의 하부 대정 맥의 말초 꼭대기에서 먼저입니다.
  12. 하부 대정 맥과 기증자의 포털 정맥의 왼쪽 벽면은 하부 대정 맥 내부의 지속적인 봉합과 함께 닫힙니다.
  13. 근위 아펙스 숙박 봉합, 하부 대정 맥의 오른쪽 벽과 기증자의 포털 정맥 한 매듭은 하부 베나 동굴 밖으로 지속적으로 봉합과 폐쇄 후.
  14. 기증자의 작은 창자는받는 사람의 복부의 오른쪽으로 켜집니다. 받는 사람의 복부 대동맥과 기증자의 뛰어난 mesenteric의 동맥 문합의 오른쪽 벽은 계속 봉합과 함께 닫힙니다.
  15. 모든 문합가 만든 후, 말초 묶인는 문합에서 출혈을 확인 먼저 제거됩니다.
  16. 문합에서 거의 또는 전혀 출혈이있다면 근위 묶인가 제거됩니다. 기증자의 작은 창자는 즉시 혈액으로 가득합니다, 작은 창자의 색상은 빨간색됩니다.
  17. 그라 프트 회장의 말초 부분이 8-0 봉합의 지속적인 치료와 함께받는 공장의 근위 부분에 엔드 - 투 - 측면을 anastomosed입니다.
  18. 기증자의 근위 공장은 같은 exteriorized입니다 stoma과 네 개의 봉합 8-0 봉합 양쪽과 복부 벽의 오른쪽에있는 피부에 안전.
  19. 창자는 복강에 반환하고 6-0 계속 봉합과 함께 폐쇄됩니다.
  20. 받는 마우스가 따뜻한 지역에 위치합니다. 일시간 후,받는 사람은 복구합니다.

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Discussion

작은 창자 이식 후 독특한 면역 반응이 생쥐의 작은 창자 이식 모델을 사용하여 광범위한 연구의 대상이되고있다. 이러한 이식 - 대 - 반응, 호스트 - 대 - 그라 프트 반응 모두 반응, 만성 거부와 관용의 조합이 관여되었을 같은 기본적인 면역 반응. 증명 또는 잠재 임상 관련의 거의 모든 immunosuppressive 요원은 작은 창자 이식 모델에서 효능에 대한 테스트되었습니다.

우리는 효율성과 성공 속도를 개선하기 위해 여러 가지 방법으로 마우스 작은 창자 이식 기법을 수정 :

  1. 기증자의 작은 창자의 내부는 분명하고 남아있는 대변 유지되어야합니다.
  2. 우수한 mesenteric 동맥의 대동맥의 카렐 패치의 가장자리는받는 사람의 복부 대동맥의 개통과 함께 부드럽고 동일한 크기를 나누어해야합니다.
  3. 받는 사람의 하부 대정 맥과 문맥을 anastomoses 뛰어난 mesenteric 동맥과 정맥 포털을 비꼬아하지 마십시오. 포털은 우수한 mesenteric 동맥보다 정맥 이상이기 때문에.
  4. 혈전증을 피하기 위해 혈액 순환을 다시하면 작은 창자는 복부의 중앙에 위치하고 적절한 긴장의 우수한 mesenteric의 동맥과 정맥 포털을 유지하여야한다.
  5. 호스트 작은 창자의 복부를 닫은 후 혈전증을 방지하기 위해 복부 캐비티로 돌아왔을 때 뛰어난 mesenteric 동맥 적절한 긴장을 유지한다.
  6. 0.1 ML cefuroxine (20mg/kg)은 복부를 닫기 전에 감염을 방지하기 위해 복부에 고인 남아 있습니다.
  7. 수술 후 감염을 피하기 위해 작은 창자 교합 (anastomosis)을 수행할 때 반드시하려면 복부 활동에 대변의 흐름을해서는 안된다.
  8. 수술 후 작은 창자의 괴사를 피하기 위해 작은 창자를 수확 때 mesenteric 혈관을 손상하지 마십시오.

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Sutures 10-0 and 11-0 MONOSOF
Microscope Unversal S3 Carl Zeiss, Inc.

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References

  1. SJ, M. iddleleton Is intestinal transplantation now an alternative to home parenteral nutrition. Proc Nutr Soc. 66, (3), 316-320 (2007).
  2. Lopez Santamaria, M., Hernadez Oliveros, F. Indications, techniques, and outcomes of small bowel transplant. Nutr Hosp. 22, Suppl 2. 113-123 (2007).
  3. Grant, D. Current results of intestinal transplantation. The International Intestinal Transplant Registry. Lancet. 347, (9018), 1801-1803 (1996).
  4. Timmermann, W., Gasser, M., Meyer, D., Kellersmann, R., Gassel, H. J., Otto, C., Thiede, A. Progress in experimental intestinal transplantation in small animal models. Acta Gastroenterol Belg. 62, (2), 216-220 (1999).

Comments

1 Comment

  1. Hi
    Dr Fengchun Liu
    Congratulations for excellent video.
    I am from Brazil and I fellow in University in São Paulo.
    I started my trainning small bowell transplantation in mice. Now it is third transplantation, your video it is much important for trainining.
    Thank´s

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 14, 2010 - 9:23 PM

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