Малый трансплантации кишечника у мышей

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Мышь маленькая модель трансплантации кишечника был признан в качестве важного инструмента для изучения mechanismes от иммунного отторжения и экран новых иммуносупрессивных препаратов. Однако эта модель ограничена в использовании, поскольку методы участие является чрезвычайно технически задача. Теперь введем изменение техники.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Liu, F., Kang, S. Small Bowel Transplantation In Mice. J. Vis. Exp. (7), e258, doi:10.3791/258 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

С 1990 года развитие такролимуса основе иммунитета и улучшение хирургической техники, увеличился массив мощных иммуносупрессивных препаратов, профилактика инфекций, и подходящий выбор пациента помогли улучшить актуарных трансплантата и выживаемость пациентов ставки по всем видам кишечника трансплантации. У пациентов с необратимыми кишечной недостаточности и осложнений парентерального питания теперь должны регулярно рассматриваться для малых трансплантации кишечника. Тем не менее, показатели выживаемости при трансплантации тонкого кишечника не спешат улучшать сравнивает все более выгодно почек, печени, сердца и легких. Небольшой трансплантации кишечника-прежнему остается неудовлетворительным по сравнению с другими органами. Дальнейший прогресс зависит от более глубокого понимания иммунологии и физиологии трансплантата и могут в значительной мере способствовало животных моделях. Более широкое использование мыши маленькая модель трансплантации кишечника необходимо в исследовании иммунологии и физиологии трансплантации кишечника, а также эффективных методов в диагностике ранних отказа. Однако эта модель ограничена в использовании, поскольку методы участие является чрезвычайно технически сложной задачей. Мы разработали модифицированную технику. При принятии анастомоз воротной вены и нижней полой вены, два швов пребывания принимаются на вершине проксимальных и дистальных вершине нижней полой вены с получателем с портальной вены донора с. Левой стене нижней полой вены и воротной вены донора с закрыта с продолжением швы с внутренней стороны нижней полой вены после того, после одного узла с проксимальных пребывания вершине шва правой стенки нижней полой вены и портальной доноров с вены закрываются продолжает швов снаружи пещеры уступает поле с 10-0 швов. Этот метод проще, поскольку для выполнения анастомоза производится только на одной стороне нижней полой вены и 10-0 швов нужного размера, чтобы избежать кровотечения и тромбоз. В этой статье мы представить подробную информацию о технике в дополнение к видео.

Protocol

Подготовка доноров и малых урожая кишечника:

  1. Мышь ansetheized с внутрибрюшинного введения фенобарбитала и помещены на спине на операции на местах.
  2. Долго средней линии брюшной надрез. Проксимальной тощей кишки, была идентифицирована и лигировали с 6-0 швов. Прикрепленный мезентериальных сосудов дистальнее тощей кишки галстук лигировали с 8-0 швов.
  3. Дистальной подвздошной кишки, была идентифицирована и лигировали с 6-0 швов. Прилагается суда брыжеечной дистальнее подвздошной кишки лигируют с 8-0 швов.
  4. Портал подвергается от окружающих жира и придает тканям, лигируют и разделен панкреатодуоденальной и селезеночной вен.
  5. Брюшной аорты и подвергается воздействию верхней брыжеечной артерии от окружающих тканей.
  6. 1 мл гепарина (10u/ml) вводится в нижней полой вены для гепаринизация.
  7. Воротной вены разделен на воротах печени и верхней брыжеечной артерии отделяется от аорты, в том числе Каррель участок аорты.
  8. Тощей кишки и подвздошной кишки делятся дистальнее связей. Тонкого кишечника удаляется, затем хранится при температуре 4 ° С в солевом растворе.

Получатель подготовки и трансплантации:

  1. Мышь ansetheized с внутрибрюшинного введения фенобарбитала и помещены на спине на операции на местах.
  2. Долго средней линии брюшной надрез. Брюшной содержимое убираются вне брюшной марлей, чтобы разоблачить брюшной аорты и нижней полой вены.
  3. Ветвей брюшной аорты и нижней полой вены подвергаются и лигировали с 10-0 швов.
  4. Проксимальной и дистальной лигатуры помещена вокруг аорты и нижней полой вены, соответственно.
  5. Венотомия выполнен в нижней полой вены реципиента с 30 иглы. Открытие затем распространяется на длину равную воротной вены донора с микро-ножниц.
  6. Aortotomy выполнен в брюшной аорты получателя, 30 иглы. Открытие затем распространяется на длину равную верхней брыжеечной артерии донора Каррель патч с микро-ножницы
  7. Разрезов брюшной аорты и нижней полой вены являются перфузии физиологическим раствором.
  8. Тонкого кишечника донора помещается на левой стороне живота получателя покрытие с марлей.
  9. Пребывание швы располагаются на вершине проксимальных и дистальных вершине получателя брюшной аорты с верхней брыжеечной донора патч Каррель артерии.
  10. Анастомоз в правой части брюшной аорты реципиента и верхней брыжеечной артерии донора Каррель патч завершен первый с продолжением швов.
  11. Два швов пребывания производится сначала в проксимальных и дистальных вершине вершине нижней полой вены получателя с порталом донора для анастомоз воротной вены донора и нижней полой вены получателя.
  12. Левой стене нижней полой вены и воротной вены донора закрыта с продолжением швов во внутренней нижней полой вены.
  13. После одного узла с проксимальных шва пребывания вершине, правой стенки нижней полой вены и воротной вены донора закрыта с продолжением швов снаружи нижней полой пещере.
  14. Тонкого кишечника донора не переходит к правой стороне живота получателя. Правой стенки брюшной аорты реципиента и верхней брыжеечной артерии донора анастомоза замкнутый продолжать швов.
  15. В конце концов анастомоза сделан, дистальной лигатуры удаляется сначала проверить, кровотечение из анастомоза.
  16. Если есть мало или нет кровотечение из анастомоза проксимальных лигатуры удаляется. Тонкого кишечника донора заполняется кровью немедленно; цвет тонкой кишки становится красным.
  17. Дистального конца трансплантата подвздошной кишки является anastomosed конца в сторону проксимального отдела тощей кишки получателя с непрерывным швом из 8-0 швов.
  18. Проксимальной тощей кишки от донора экстериоризируется как стомы и закреплены кожи на правой стороне брюшной стенки с четырьмя швами каждой стороны 8-0 швов.
  19. Кишечник возвращаются в брюшную полость и закрылся с 6-0 швов продолжаться.
  20. Получатель мыши помещается на теплое место. Через час, получатель восстанавливает.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Уникальный иммунный ответ после небольшого трансплантации кишечника была предметом обширных исследований с использованием маленькая модель трансплантации кишечника у мышей. Основные иммунологические реакции, такие как трансплантат против реакции, хозяин-против-трансплантат реакция, сочетание обеих реакций, хроническое отторжение и терпимости были задействованы. Почти все иммунодепрессанты доказанных или потенциальных клиническое значение, были проверены на их эффективность в маленькая модель трансплантации кишечника.

Мы модифицировали мышей небольшого технику трансплантации кишечника в нескольких направлениях для повышения эффективности и показатели эффективности:

  1. Внутри тонкого кишечника донора должны держать ясно и никаких калом слева.
  2. Край Каррель участок аорты верхней брыжеечной артерии должна быть разделена гладкой и одинакового размера с открытием брюшной аорты получателя.
  3. Не крутите воротной вены с верхней брыжеечной артерии, когда анастомозов воротной вены с нижней полой вены получателя. Поскольку портал вены длиннее верхней брыжеечной артерии.
  4. Тонкой кишки должен быть сделан на середине живота и держать верхней брыжеечной артерии и воротной вены в надлежащем напряженность, когда восстановить циркуляцию крови, чтобы избежать тромбоза.
  5. Верхней брыжеечной артерии должны держать правильное напряжение, когда хозяин вернулся тонкого кишечника в брюшную полость полость, чтобы избежать тромбоза после закрытия брюшной полости.
  6. 0,1 мл cefuroxine (20mg/kg) остаются в полости живота, чтобы избежать инфекции, прежде чем закрыть живот.
  7. Чтобы быть уверенным не позволяйте фекалии текут в животе деятельности при выполнении небольших анастомоз кишечника, чтобы избежать инфекции после операции.
  8. Не повредите мезентериальных сосудов при сборе тонкой кишки, чтобы избежать небольшой некроз кишечника после операции.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Sutures 10-0 and 11-0 MONOSOF
Microscope Unversal S3 Carl Zeiss, Inc.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. SJ, M. iddleleton Is intestinal transplantation now an alternative to home parenteral nutrition. Proc Nutr Soc. 66, (3), 316-320 (2007).
  2. Lopez Santamaria, M., Hernadez Oliveros, F. Indications, techniques, and outcomes of small bowel transplant. Nutr Hosp. 22, Suppl 2. 113-123 (2007).
  3. Grant, D. Current results of intestinal transplantation. The International Intestinal Transplant Registry. Lancet. 347, (9018), 1801-1803 (1996).
  4. Timmermann, W., Gasser, M., Meyer, D., Kellersmann, R., Gassel, H. J., Otto, C., Thiede, A. Progress in experimental intestinal transplantation in small animal models. Acta Gastroenterol Belg. 62, (2), 216-220 (1999).

Comments

1 Comment

  1. Hi
    Dr Fengchun Liu
    Congratulations for excellent video.
    I am from Brazil and I fellow in University in São Paulo.
    I started my trainning small bowell transplantation in mice. Now it is third transplantation, your video it is much important for trainining.
    Thank´s

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 14, 2010 - 9:23 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics