Transplantation de l'intestin chez les souris

Biology

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Summary

La souris petit modèle de transplantation intestinale a été reconnue comme un outil important pour étudier mechanismes de rejet immunitaire et de l'écran de nouveaux médicaments immunosuppresseurs. Toutefois, ce modèle est limité à utiliser, car les techniques impliqués est un défi extrêmement technique. Maintenant nous présentons la technique modifiée.

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Liu, F., Kang, S. Small Bowel Transplantation In Mice. J. Vis. Exp. (7), e258, doi:10.3791/258 (2007).

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Abstract

Depuis 1990, le développement de tacrolimus immunosuppresseur à base et l'amélioration des techniques chirurgicales, le tableau a augmenté de puissants médicaments immunosuppresseurs, la prophylaxie des infections, et la sélection des patients a permis d'améliorer greffe adaptés actuarielles et les taux de survie des patients pour tous les types de greffe de l'intestin. Les patients souffrant d'insuffisance intestinale irréversible et les complications de la nutrition parentérale doivent désormais être systématiquement considérés comme des fins de transplantation intestin grêle. Toutefois, les taux de survie pour la transplantation intestinale petits ont été lents à améliorer les compare plus favorablement avec rénales, hépatiques, cardiaques et pulmonaires. La transplantation de l'intestin est encore insatisfaisante par rapport à d'autres organes. D'autres progrès peuvent dépendre sur une meilleure compréhension de l'immunologie et la physiologie de la greffe et peut être grandement facilitée par des modèles animaux. Une plus large utilisation de la souris intestinale greffe petit modèle est nécessaire dans l'étude de l'immunologie et la physiologie de la transplantation de l'intestin ainsi que des méthodes efficaces pour diagnostiquer rejet précoce. Toutefois, ce modèle est limité à utiliser, car les techniques impliqués est extrêmement difficile techniquement. Nous avons développé une technique modifiée. Lors de l'anastomose de la veine porte et la veine cave inférieure, deux sutures sont faites rester à la pointe proximale et distale de l'apex inférieure au destinataire s veine cave avec la veine porte le donateur s. La paroi gauche de la veine cave inférieure et la veine porte donateurs est fermé avec des sutures continue dans l'intérieur de la veine cave inférieure après, au bout d'un noeud avec le séjour de suture proximale sommet du mur à droite de la veine cave inférieure et le portail du donateur s veineuse sont fermées avec sutures continue en dehors de la grotte de veine avec des sutures 10-0. Cette méthode est plus facile à réaliser, car l'anastomose est faite seulement sur un côté de la veine cave inférieure et 10-0 sutures est la bonne taille pour éviter les saignements et des thromboses. Dans cet article, nous fournir des détails sur la technique pour compléter la vidéo.

Protocol

La préparation des donateurs et la récolte intestin grêle:

  1. La souris est ansetheized avec une injection intrapéritonéale de pentobarbital et placé en position couchée sur le champ opératoire.
  2. Une longue incision médiane abdominale est faite. La partie proximale du jéjunum est identifié et ligaturé avec 6-0 points de suture. Attaché vaisseaux mésentériques distale à la cravate du jéjunum sont ligués avec 8-0 points de suture.
  3. L'iléon distal est identifié et ligaturé avec 6-0 points de suture. Les vaisseaux mésentériques attachés à l'iléon distal sont ligués avec 8-0 points de suture.
  4. Le portail est exposé à partir des tissus environnants graisse et joints, ligaturés et divisés les veines pancréatico et spléniques.
  5. L'aorte abdominale est exposé et exposé l'artère mésentérique supérieure à partir des tissus environnants.
  6. 1 ml d'héparine (10u/ml) est injecté dans la veine cave inférieure pour héparinisation.
  7. La veine porte se divise au niveau du hile du foie, et l'artère mésentérique supérieure est séparée de l'aorte, y compris un patch Carrel de l'aorte.
  8. Le jéjunum et l'iléon distal sont divisés aux traverses. L'intestin grêle entier est enlevé, puis conservés à 4 ° C dans une solution saline.

Récipiendaire de préparation et de transplantation:

  1. La souris est ansetheized avec une injection intrapéritonéale de pentobarbital et placé en position couchée sur le champ opératoire.
  2. Une longue incision médiane abdominale est faite. Contenu abdominal sont rentrés en dehors de l'abdomen avec une gaze afin d'exposer l'aorte abdominale et la veine cave inférieure.
  3. Les branches de l'aorte abdominale et la veine cave inférieure sont exposés et ligaturé avec 10-0 points de suture.
  4. La ligature proximale et distale est placée autour de l'aorte et la veine cave inférieure, respectivement.
  5. Le venotomy est faite dans la veine cave inférieure du receveur avec une aiguille de calibre 30. L'ouverture est ensuite étendu à une longueur égale à la veine porte du donneur avec des micro-ciseaux.
  6. Le aortotomie est faite dans l'aorte abdominale du destinataire avec une aiguille de calibre 30. L'ouverture est ensuite étendu à une longueur égale à la supériorité du donateur correctif Carrel artère mésentérique avec micro-ciseaux
  7. Les incisions de l'aorte abdominale et la veine cave inférieure sont perfusés avec une solution saline.
  8. L'intestin grêle du donneur est placée sur le côté gauche de l'abdomen du destinataire couvrant avec de la gaze.
  9. Les sutures sont placées rester à la pointe proximale et distale de l'apex bénéficiaires aorte abdominale avec donateur correctif mésentérique supérieure Carrel artère.
  10. L'anastomose du côté droit de l'aorte abdominale du receveur et du donneur supérieure correctif Carrel artère mésentérique sont complétée en premier lieu avec des sutures de continuer.
  11. Deux sutures sont réalisées en premier séjour à l'apex et le sommet proximale distale inférieure du destinataire veine cave avec le portail du donateur pour l'anastomose de la veine porte du donneur et du receveur inférieure veine cave.
  12. La paroi gauche de la veine cave inférieure et la veine porte est fermée donateurs avec des sutures continue à l'intérieur de la veine cave inférieure.
  13. Après un noeud avec la suture proximale séjour sommet, le mur de droite de la veine cave inférieure et la veine porte du donneur est fermée avec des sutures continue en dehors de la grotte de veine.
  14. L'intestin grêle du donneur est tourné sur le côté droit de l'abdomen du destinataire. Le mur de droite de l'aorte abdominale du receveur et le donneur supérieure anastomose artère mésentérique est fermée avec des sutures continuer.
  15. Après tout anastomose est faite, la ligature distale est retiré d'abord pour vérifier que le saignement de l'anastomose.
  16. S'il ya peu ou pas de saignements de l'anastomose proximale la ligature est enlevée. L'intestin grêle du donneur est rempli de sang immédiatement la couleur de l'intestin grêle devient rouge.
  17. L'extrémité distale de l'iléon du greffon est anastomosée bout-en-un côté à la partie proximale du jéjunum destinataire avec un surjet de 8-0 points de suture.
  18. Le jéjunum proximal du donneur est extériorisé comme une. Stomie et fixé à la peau sur le côté droit de la paroi abdominale, avec quatre points de suture de chaque côté de 8-0 points de suture
  19. Les intestins sont retournés à la cavité abdominale et fermée avec des sutures 6-0 continuer.
  20. La souris receveuse est placée sur zone chaude. Après une heure, le destinataire récupère.

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Discussion

L'unique réponse immunitaire après transplantation de l'intestin a été l'objet de recherches approfondies à l'aide de petites modèle de transplantation intestinale chez la souris. Les réactions immunologiques de base, tels que du greffon contre-réactions, l'hôte contre l'greffon réaction, une combinaison des deux réactions, le rejet chronique et la tolérance ont été impliqués. Presque tous les agents immunosuppresseurs de la pertinence clinique prouvée ou potentiels ont été testés pour leur efficacité dans le modèle de la transplantation intestinale petits.

Nous avons modifié la technique de la souris petite greffe de l'intestin de plusieurs façons à améliorer l'efficacité et les taux de réussite:

  1. L'intérieur de l'intestin grêle donneur doivent être claires et ne gardant les excréments laissés.
  2. Le bord du patch Carrel de l'aorte de l'artère mésentérique supérieure devrait être divisé de taille lisse et égale, avec l'ouverture de l'aorte abdominale du receveur.
  3. Ne pas tourner la veine porte avec l'artère mésentérique supérieure lorsque anastomoses de la veine cave inférieure portail avec du destinataire cave. Parce que le portail soit plus longue que la veine de l'artère mésentérique supérieure.
  4. L'intestin grêle doit être mis sur le milieu de l'abdomen et de maintenir l'artère mésentérique supérieure et la veine porte en tension correcte lors reconstruire la circulation sanguine pour éviter la thrombose.
  5. L'artère mésentérique supérieure doit être de conserver la tension correcte lors de l'intestin petite hostie retourné dans la cavité abdominale afin d'éviter la thrombose après la fermeture de l'abdomen.
  6. 0,1 ml céfuroxine (20mg/kg) sont laissés dans la cavité abdominale pour éviter l'infection avant la fermeture de l'abdomen.
  7. Pour être sûr ne pas laisser couler les matières fécales dans l'activité l'abdomen lors de la réalisation de l'anastomose de l'intestin grêle pour éviter l'infection après l'opération.
  8. Ne pas endommager les vaisseaux mésentériques lors de la récolte de l'intestin grêle pour éviter une nécrose intestinale après l'opération.

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Sutures 10-0 and 11-0 MONOSOF
Microscope Unversal S3 Carl Zeiss, Inc.

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References

  1. SJ, M. iddleleton Is intestinal transplantation now an alternative to home parenteral nutrition. Proc Nutr Soc. 66, (3), 316-320 (2007).
  2. Lopez Santamaria, M., Hernadez Oliveros, F. Indications, techniques, and outcomes of small bowel transplant. Nutr Hosp. 22, Suppl 2. 113-123 (2007).
  3. Grant, D. Current results of intestinal transplantation. The International Intestinal Transplant Registry. Lancet. 347, (9018), 1801-1803 (1996).
  4. Timmermann, W., Gasser, M., Meyer, D., Kellersmann, R., Gassel, H. J., Otto, C., Thiede, A. Progress in experimental intestinal transplantation in small animal models. Acta Gastroenterol Belg. 62, (2), 216-220 (1999).

Comments

1 Comment

  1. Hi
    Dr Fengchun Liu
    Congratulations for excellent video.
    I am from Brazil and I fellow in University in São Paulo.
    I started my trainning small bowell transplantation in mice. Now it is third transplantation, your video it is much important for trainining.
    Thank´s

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 14, 2010 - 9:23 PM

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