Transplante de intestino delgado em ratos

Biology

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Summary

O rato modelo de transplante de intestino delgado tem sido reconhecida como uma importante ferramenta para estudar mechanismes da rejeição imunológica e tela novas drogas imunossupressoras. No entanto, este modelo é limitado a usar, porque as técnicas envolvidas é um desafio extremamente técnico. Agora vamos introduzir a técnica modificada.

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Liu, F., Kang, S. Small Bowel Transplantation In Mice. J. Vis. Exp. (7), e258, doi:10.3791/258 (2007).

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Abstract

Desde 1990, o desenvolvimento de tacrolimus baseado imunossupressão e melhorou as técnicas cirúrgicas, a matriz aumentada de potentes medicamentos imunossupressores, profilaxia de infecções, e seleção de pacientes adequados ajudou a melhorar enxerto atuariais e taxas de sobrevida do paciente para todos os tipos de transplante de intestino. Pacientes com insuficiência intestinal irreversíveis e complicações da nutrição parenteral deve agora ser rotineiramente consideradas para o transplante do intestino delgado. No entanto, as taxas de sobrevida para o transplante do intestino delgado têm sido lentas para melhorar cada vez mais se compara favoravelmente com renal, coração, fígado e pulmão. O transplante de intestino delgado ainda é insatisfatório em comparação com outros órgãos. Progressos pode depender melhor compreensão da imunologia e fisiologia do enxerto e pode ser muito facilitada pelos modelos animais. Uma utilização mais ampla do mouse modelo de transplante de intestino delgado é necessário no estudo da imunologia e fisiologia do intestino transplante, bem como métodos eficientes para diagnosticar a rejeição inicial. No entanto, este modelo é limitado a usar, porque as técnicas envolvidas é extremamente tecnicamente desafiador. Nós desenvolvemos uma técnica modificada. Ao fazer anastomose da veia porta ea veia cava inferior, duas suturas são feitas permanecer no ápice proximal e ápice distal do destinatário s veia cava inferior com veia porta do doador s. A parede esquerda da veia cava inferior e veia porta do doador s é fechada com suturas contínua no interior da veia cava inferior, após, depois de um nó com a estadia ápice proximal da sutura da parede lateral direita da veia cava inferior e portal do doador s veias são fechadas com suturas contínua fora da caverna cava inferior com 10-0 suturas. Este método é mais fácil de executar, pois a anastomose é feita apenas de um lado da veia cava inferior e 10-0 suturas é o tamanho certo para evitar o sangramento e trombose. Neste artigo, vamos fornecer detalhes da técnica para complementar o vídeo.

Protocol

Preparação de doadores e captação do intestino delgado:

  1. O rato é ansetheized com uma injeção intraperitoneal de pentobarbital supina e colocado no campo de operação.
  2. A incisão mediana abdominal longa é feita. O proximal do jejuno, é identificada e ligada com 6-0. Anexado vasos mesentéricos distal para o tie jejuno estão ligados com 8-0 suturas.
  3. Distal do íleo é identificado e ligada com 6-0. Vasos mesentéricos anexado ao íleo distal são ligados com 8-0 suturas.
  4. O portal é exposto a partir dos tecidos circundantes gordura e anexado, ligadas e seccionadas as veias pancreaticoduodenal e esplênica.
  5. A aorta abdominal é exposto e exposto a artéria mesentérica superior dos tecidos circundantes.
  6. 1 ml de heparina (10U/ml) é injetado na veia cava inferior para heparinização.
  7. A veia portal está dividido no hilo do fígado e da artéria mesentérica superior é dividido da aorta, incluindo um patch Carrel da aorta.
  8. Jejuno e íleo distal são divididos para os laços. O intestino delgado é removido, em seguida, armazenados a 4 ° C em solução salina.

Destinatário preparação e transplante:

  1. O rato é ansetheized com uma injeção intraperitoneal de pentobarbital supina e colocado no campo de operação.
  2. A incisão mediana abdominal longa é feita. Conteúdo abdominal são retraídos fora do abdominal com gaze para expor a aorta abdominal e veia cava inferior.
  3. Os ramos da aorta abdominal e veia cava inferior estão expostos e ligados com 10-0 suturas.
  4. A ligadura proximal e distal é colocado ao redor da aorta e veia cava inferior, respectivamente.
  5. O venotomia é feita na veia cava inferior do receptor com uma agulha de calibre 30. A abertura é então estendido para um comprimento de igual a veia porta do doador com micro-tesoura.
  6. Aortotomia é feita na aorta abdominal do receptor com uma agulha de calibre 30. A abertura é então estendido para um comprimento de igual ao doador superiores remendo Carrel mesentérica artéria com micro-tesoura
  7. As incisões da aorta abdominal e veia cava inferior são perfundidos com solução salina.
  8. Intestino delgado do doador é colocado no lado esquerdo do abdômen do receptor cobrindo com gaze.
  9. As suturas são colocadas permanecer no ápice proximal e ápice distal do destinatário aorta abdominal com superior doador remendo Carrel mesentérica artéria.
  10. A anastomose do lado direito da aorta abdominal do receptor e doador mesentérica superior remendo Carrel artéria forem concluídas primeiro com sutura contínua.
  11. Duas suturas são feitas ficar primeiro no ápice proximal e distal do ápice do destinatário veia cava inferior com portal do doador para a anastomose da veia porta do doador e do receptor veia cava inferior.
  12. A parede esquerda da veia cava inferior e veia porta do doador é fechada com suturas contínua no interior da veia cava inferior.
  13. Depois de um nó com a sutura proximal ápice estadia, a parede lateral direita da veia cava inferior e veia porta do doador é fechada com suturas contínua fora da caverna cava inferior.
  14. Intestino delgado do doador é entregue para o lado direito do abdômen do receptor. A parede da direita da aorta abdominal do receptor e do doador anastomose da artéria mesentérica superior é fechada com suturas continuar.
  15. Afinal anastomose é feita, a ligadura distal é removido primeiro para verificar o sangramento da anastomose.
  16. Se houver pouco ou nenhum sangramento da anastomose proximal à ligadura é removido. Intestino delgado do doador é cheia de sangue imediatamente, a cor do intestino delgado torna-se vermelho.
  17. A extremidade distal do íleo do enxerto é anastomosado término-lateral para a parte proximal do jejuno destinatário com uma sutura contínua de 8-0 suturas.
  18. Jejuno proximal do doador é exteriorizado como um arquivo. Estoma e garantiu para a pele do lado direito da parede abdominal, com quatro suturas cada lado da sutura 8-0
  19. Os intestinos são retornados para a cavidade abdominal e fechou com 6-0 continuar.
  20. O mouse destinatário é colocado em área quente. Depois de uma hora, o destinatário recupera.

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Discussion

A única resposta imunológica após o transplante do intestino delgado tem sido objeto de extensa pesquisa usando o modelo de transplante de intestino delgado em ratos. As reações imunológicas básicos, tais como enxerto-versus-reações, anfitriã do enxerto-versus-reação, uma combinação de ambas as reações de rejeição, crônicas e tolerância têm sido envolvidos. Quase todos os agentes imunossupressores de comprovada ou potencial relevância clínica foram testadas para a sua eficácia no modelo de transplante de intestino delgado.

Nós modificamos o mouse técnica de transplante de intestino delgado de várias maneiras para melhorar a eficiência e as taxas de sucesso:

  1. O interior do intestino delgado doador deve manter clara e sem qualquer fezes esquerda.
  2. A borda do patch Carrel da aorta da artéria mesentérica superior deve ser dividida tamanho suave e igual com a abertura da aorta abdominal do receptor.
  3. Não torça a veia porta com a artéria mesentérica superior quando anastomoses da veia portal com inferior destinatário veia cava. Porque o portal é veia mais do que o da artéria mesentérica superior.
  4. Do intestino delgado deve ser colocado no meio do abdômen e manter a artéria mesentérica superior e veia porta na tensão adequada quando reconstruir a circulação do sangue para evitar trombose.
  5. A artéria mesentérica superior deve ser manter a tensão adequada quando o intestino pequena hóstia voltou para dentro da cavidade abdominal para evitar a trombose após o fechamento do abdômen.
  6. 0,1 ml cefuroxine (20mg/kg) são deixados na cavidade abdominal para evitar a infecção antes de fechar o abdome.
  7. Para ter certeza de não deixar o fluxo de fezes para a atividade abdômen durante a execução da anastomose do intestino delgado para evitar a infecção após a operação.
  8. Não danificar os vasos mesentéricos, quando a colheita do intestino delgado para evitar a necrose do intestino delgado após a operação.

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Sutures 10-0 and 11-0 MONOSOF
Microscope Unversal S3 Carl Zeiss, Inc.

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References

  1. SJ, M. iddleleton Is intestinal transplantation now an alternative to home parenteral nutrition. Proc Nutr Soc. 66, (3), 316-320 (2007).
  2. Lopez Santamaria, M., Hernadez Oliveros, F. Indications, techniques, and outcomes of small bowel transplant. Nutr Hosp. 22, Suppl 2. 113-123 (2007).
  3. Grant, D. Current results of intestinal transplantation. The International Intestinal Transplant Registry. Lancet. 347, (9018), 1801-1803 (1996).
  4. Timmermann, W., Gasser, M., Meyer, D., Kellersmann, R., Gassel, H. J., Otto, C., Thiede, A. Progress in experimental intestinal transplantation in small animal models. Acta Gastroenterol Belg. 62, (2), 216-220 (1999).

Comments

1 Comment

  1. Hi
    Dr Fengchun Liu
    Congratulations for excellent video.
    I am from Brazil and I fellow in University in São Paulo.
    I started my trainning small bowell transplantation in mice. Now it is third transplantation, your video it is much important for trainining.
    Thank´s

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 14, 2010 - 9:23 PM

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