Trapianto di intestino piccolo Nei topi

Biology

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Summary

Il piccolo topo modello di trapianto di intestino è stato riconosciuto come un importante strumento per studiare mechanismes di rigetto immunitario e schermo nuovi farmaci immunosoppressori. Tuttavia, questo modello è limitata da usare perché le tecniche in questione è estremamente tecnico sfida. Ora introduciamo la tecnica modificata.

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Liu, F., Kang, S. Small Bowel Transplantation In Mice. J. Vis. Exp. (7), e258, doi:10.3791/258 (2007).

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Abstract

Dal 1990, lo sviluppo di immunosoppressione a base di tacrolimus e miglioramento delle tecniche chirurgiche, il crescente numero di potenti farmaci immunosoppressivi, la profilassi delle infezioni e la selezione dei pazienti idonei contribuito a migliorare innesto attuariali e tassi di sopravvivenza dei pazienti per tutti i tipi di trapianto di intestino. I pazienti con insufficienza intestinale irreversibile e le complicanze della nutrizione parenterale dovrebbe essere considerata di routine per il trapianto di intestino tenue. Tuttavia, i tassi di sopravvivenza per i piccoli trapianto di intestino hanno tardato a migliorare confronta sempre più favorevolmente con insufficienza renale, fegato, cuore e polmone. Il trapianto di intestino tenue è ancora insoddisfacente rispetto ad altri organi. Ulteriori progressi può dipendere da una migliore comprensione della fisiologia e immunologia del trapianto e può essere notevolmente facilitato da modelli animali. Un uso più ampio del modello di piccolo intestino trapianto mouse è occorrenti per lo studio dell'immunologia e della fisiologia del trapianto di intestino e metodi efficienti nella diagnosi precoce rifiuto. Tuttavia, questo modello è limitata da usare perché le tecniche in questione è estremamente impegnativo tecnicamente. Abbiamo sviluppato una tecnica modificata. Quando si effettuano anastomosi della vena porta e vena cava inferiore, due suture sono fatte al vertice prossimale e distale all'apice del destinatario s vena cava inferiore con la vena porta del donatore s. La parete sinistra della vena cava inferiore e la vena porta del donatore s è chiusa con sutura continua in parte interna della vena cava inferiore dopo, dopo un nodo con il soggiorno apice prossimale sutura la parete destra della vena cava inferiore e il portale del donatore s vene sono chiuse con punti di sutura continua al di fuori della grotta vena 10-0 con punti di sutura. Questo metodo è più facile da eseguire, perché anastomosi è fatta solo da una parte della vena cava inferiore e 10-0 suture è la dimensione giusta per evitare di sanguinamento e trombosi. In questo articolo, forniamo i dettagli della tecnica per integrare il video.

Protocol

Donatori di preparazione e raccolta del piccolo intestino:

  1. Il mouse è ansetheized con un'iniezione intraperitoneale di supina pentobarbital e immessi sul campo di funzionamento.
  2. Una lunga incisione addominale mediana è fatto. Prossimale del digiuno è identificato e legatura con 6-0 punti di sutura. Allegati vasi mesenterici distale al tie digiuno sono legatura con 8-0 punti di sutura.
  3. La distale dell'ileo viene identificato e legatura con 6-0 punti di sutura. I vasi mesenterici attaccato distale dell'ileo sono legatura con 8-0 punti di sutura.
  4. Il portale è esposto dai tessuti circostanti grasso e attaccato, legata e sezionata le vene pancreaticoduodenali e splenica.
  5. L'aorta addominale è esposto ed esposto l'arteria mesenterica superiore dai tessuti circostanti.
  6. 1 ml di eparina (10u/ml) viene iniettato nella vena cava inferiore per eparinizzazione.
  7. La vena porta è diviso all'ilo del fegato, e l'arteria mesenterica superiore è diviso da aorta, tra cui una patch di Carrel dell'aorta.
  8. Il digiuno e ileo distale sono divisi per i legami. Tutto l'intestino piccolo è stato rimosso, poi conservato a 4 ° C in soluzione salina.

Destinatario preparazione e trapianto:

  1. Il mouse è ansetheized con un'iniezione intraperitoneale di supina pentobarbital e immessi sul campo di funzionamento.
  2. Una lunga incisione addominale mediana è fatto. Contenuto addominale sono retratto al di fuori del addominale con una garza per esporre l'aorta addominale e la vena cava inferiore.
  3. I rami dell'aorta addominale e la vena cava inferiore sono esposti e legatura 10-0 con punti di sutura.
  4. La legatura prossimale e distale viene posizionato intorno alla aorta e vena cava inferiore, rispettivamente.
  5. Il venotomy è fatto in vena cava inferiore del ricevente con un ago da 30 gauge. L'apertura è poi estesa a una lunghezza pari alla vena porta del donatore con micro-forbici.
  6. Il aortotomy è realizzato in dell'aorta addominale del destinatario con un ago da 30 gauge. L'apertura è poi estesa a una lunghezza pari al donatore superiore patch di Carrel arteria mesenterica con micro-forbici
  7. Le incisioni dell'aorta addominale e la vena cava inferiore sono perfusi con soluzione salina.
  8. Tenue del donatore è posizionato sul lato sinistro dell'addome del destinatario copertura con garza.
  9. Le suture sono posti al vertice prossimale e distale all'apice del destinatario aorta addominale con donatore superiore patch di Carrel dell'arteria mesenterica.
  10. L'anastomosi del lato destro della aorta addominale del destinatario e del donatore superiore dell'arteria mesenterica patch di Carrel sono stati completati prima con punti di sutura continua.
  11. Due punti di sutura soggiorno sono fatte prima al vertice prossimale e distale del vertice del destinatario vena cava inferiore con portale del donatore per l'anastomosi della vena porta del donatore e del ricevente vena cava inferiore.
  12. La parete sinistra della vena cava inferiore e la vena porta del donatore è chiusa con sutura continua nella parte interna della vena cava inferiore.
  13. Dopo un nodo con la sutura prossimale soggiorno apice, la parete destra della vena cava inferiore e vena porta del donatore viene chiusa con sutura continua al di fuori della vena cava inferiore.
  14. Tenue del donatore viene capovolta sul lato destro dell'addome del destinatario. La parete destra della aorta addominale del destinatario e del donatore superiore anastomosi dell'arteria mesenterica è chiusa con punti di sutura continua.
  15. Dopo tutto anastomosi è fatto, la legatura distale viene rimosso prima a controllare il sanguinamento dal anastomosi.
  16. Se c'è sanguinamento poco o niente dalla anastomosi la legatura prossimale viene rimosso. Tenue del donatore è pieno di sangue immediatamente il colore del piccolo intestino diventa rosso.
  17. L'estremità distale dell'ileo innesto è anastomizzato end-to-side alla parte prossimale del digiuno destinatario con una sutura continua di 8-0 punti di sutura.
  18. Il digiuno prossimale del donatore viene esteriorizzata come una stomia e fissato per la pelle sul lato destro della parete addominale con quattro punti di sutura per lato di 8-0 punti di sutura.
  19. Gli intestini vengono restituiti alla cavità addominale e si chiude con 6-0 punti di sutura continua.
  20. Il mouse destinatario è posto sulla zona calda. Dopo un'ora, il destinatario recupera.

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Discussion

L'unica risposta immunitaria dopo trapianto di intestino tenue è stato oggetto di approfondite ricerche utilizzando piccoli modello trapianto di intestino nel topo. Le reazioni immunologiche di base, come il trapianto-contro-reazioni, host-graft-versus-reazione, una combinazione di entrambe le reazioni, il rigetto cronico e la tolleranza sono stati coinvolti. Quasi tutti gli agenti immunosoppressivi di provata o potenziale rilevanza clinica sono stati testati per la loro efficacia nel modello piccolo trapianto di intestino.

Abbiamo modificato il piccolo topo tecnica di trapianto di intestino in diversi modi per migliorare l'efficienza e il tasso di successo:

  1. L'interno del piccolo intestino donatore dovrebbe essere chiara e non mantenendo le feci sinistra.
  2. Il bordo del patch di Carrel dell'aorta dell'arteria mesenterica superiore dovrebbe essere diviso dimensioni liscia e di parità con l'apertura della aorta addominale del destinatario.
  3. Non torcere la vena porta con l'arteria mesenterica superiore, quando anastomosi con la vena porta destinatario vena cava inferiore. Poiché il portale è vena più lungo l'arteria mesenterica superiore.
  4. Il piccolo intestino deve essere collocato al centro dell'addome e mantenere l'arteria mesenterica superiore e vena porta in giusta tensione quando ricostruire la circolazione del sangue per evitare trombosi.
  5. L'arteria mesenterica superiore dovrebbe essere tenere la giusta tensione quando l'intestino piccola ostia tornato nella cavità addominale per evitare la trombosi dopo la chiusura dell'addome.
  6. 0,1 ml cefuroxine (20mg/kg) sono rimasti nella cavità addominale per evitare l'infezione prima di chiudere l'addome.
  7. Per essere sicuri di non lasciare che il flusso di feci in addome l'attività durante l'esecuzione della anastomosi piccolo intestino per evitare l'infezione dopo l'intervento.
  8. Non danneggiare i vasi mesenterici, durante la raccolta del piccolo intestino per evitare la necrosi piccolo intestino dopo l'operazione.

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Sutures 10-0 and 11-0 MONOSOF
Microscope Unversal S3 Carl Zeiss, Inc.

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References

  1. SJ, M. iddleleton Is intestinal transplantation now an alternative to home parenteral nutrition. Proc Nutr Soc. 66, (3), 316-320 (2007).
  2. Lopez Santamaria, M., Hernadez Oliveros, F. Indications, techniques, and outcomes of small bowel transplant. Nutr Hosp. 22, Suppl 2. 113-123 (2007).
  3. Grant, D. Current results of intestinal transplantation. The International Intestinal Transplant Registry. Lancet. 347, (9018), 1801-1803 (1996).
  4. Timmermann, W., Gasser, M., Meyer, D., Kellersmann, R., Gassel, H. J., Otto, C., Thiede, A. Progress in experimental intestinal transplantation in small animal models. Acta Gastroenterol Belg. 62, (2), 216-220 (1999).

Comments

1 Comment

  1. Hi
    Dr Fengchun Liu
    Congratulations for excellent video.
    I am from Brazil and I fellow in University in São Paulo.
    I started my trainning small bowell transplantation in mice. Now it is third transplantation, your video it is much important for trainining.
    Thank´s

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 14, 2010 - 9:23 PM

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