分离果蝇睾丸

Biology
 

Summary

果蝇睾丸可迅速和有效地从成年男性使用解剖针分离。通过实践,人们可以很容易地在一至两天隔离睾丸足够的抗体或酶为基础的分析的高通量测序或更传统的分子生物学方法分析的DNA或RNA或蛋白质的量。

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Zamore, P. D., Ma, S. Isolation of Drosophila melanogaster Testes. J. Vis. Exp. (51), e2641, doi:10.3791/2641 (2011).

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Abstract

果蝇睾丸干细胞维持和分化,减数分裂和SOMA的生殖细胞相互作用的研究提供一个重要的模式。隔离成年男性的睾丸通常从蛹的情况下羽化后0-3天。野生型果蝇的睾丸很容易区别于其他组织的,因为他们是黄色的,但突变的果蝇睾丸,一个共同的遗传背景的实验室实验飞肠道的形状和颜色相似。表演夹层玻璃显微镜玻片上,一个黑色的背景,使得相当容易识别的睾丸。睾丸被删除的苍蝇,用解剖针。使用睾丸清扫钳的协议相比,我们的方法是远远更快,允许一个良好的实践个人剖析每小时从200-300野生型果蝇睾丸,产生400-600睾丸。 蝇,或从突变体,减少睾丸大小的睾丸更难解剖,通常每小时产量200-400睾丸。

Protocol

  1. 一个黑色背景的玻璃显微镜玻片上削减20#白皮书同样大小的显微镜幻灯片。一种颜色的幻灯片尺寸纸张上的黑色方使用永久性标记(例如,Sharpie)。白胶(Elmer的)应用的黑边,坚持到幻灯片的文件。可重复使用的幻灯片。 ¾“标签的磁带(Fisherbrand),安全的显微镜载玻片,玻璃边,到CO 2飞垫修复到位。
  2. 收集0-3日龄雄蝇。
  3. 准备一个冰桶,磷酸盐缓冲液(PBS),解剖针。
  4. 麻醉50-100使用的CO 2流的苍蝇和瓶或小瓶转移到附近的显微镜幻灯片飞垫。
  5. 移液器〜50μL冰冷的PBS在显微镜幻灯片中下降。
  6. 轻轻拿起一个男飞的解剖针DIP解剖针针的地方飞入的PBS下降到PBS,温柔的触摸腹部(即近的翅膀,)。
  7. 飞中间放置一针,胸部和腹部之间,倒推坚决 。广场之间的第六届(A6)和腹节第七届(A7)(从底部的第二个和第三个条纹)其他针,腹部拉离胸部。
  8. 睾丸除了其他器官,尤其是肠道挑逗。 ,尤其是白色的突变体,睾丸和肠道类似于。主要区别是,睾丸总是成对出现;每个睾丸有螺旋纹,白色的比肠道。
  9. 聚丙烯离心管中,在冰冷的PBS商店的睾丸。

代表性的成果:

图1
图1。男性生殖系统的背面观,从flybase.org/reports/FBim0000074.html。 Flybase归属:“米勒后,米勒(1950年)页508图38一个内部解剖和组织学的果蝇成虫在M. Demerec,编辑,果蝇的生物学,第6章,420页 - 534。冷泉港实验室出版社,传真版,1994年由冷泉港实验室出版社1994年版权使用一种来自冷泉港实验室(CSHL),许可按。 http://www.cshlpress.com 。“

Discussion

我们提供了协议隔离成年雄性果蝇睾丸。由于技术要求协调人的两只手,技能只有与实践。

Disclosures

没有利益冲突的声明。

Acknowledgments

作者感谢Vasia Vagin这种技术引入到我们的实验室。

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Dissecting needle Tool Fisher Scientific S17346
Micro Slides, Plain Tool Fisher Scientific 12-553
Microscope Light Tool Schott AG KO-1500
CO2 pad Tool Genesee Scientific 59-172
Benchtop Flowbuddy Complete System Tool Genesee Scientific 59-122WCU
Bubble Humidifier Tool Salter Labs 7100
Ball filler needle Tool Genesee Scientific 54-119
¾” Label Tape Supply Fisher Scientific 15-901-5B

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References

  1. Singh, S. R., Hou, S. X. Immunohistological Techniques for Studying the Drosophila Male Germline Stem Cell. Methods Mol Biol. 450, 45-59 (2008).

Comments

2 Comments

  1. Hello I am a doctoral student in genetics and biochemistry, very much of your work. as I also work with Drosophila, I wonder if it is possible to perform the comet assay in Drosophila gut and silver nitrate. Do you have a protocol?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 20, 2011 - 3:51 PM
  2. Awesome video. I just made a post about http://www.thebugsquad.com/fruit-flies/drosophila-melanogaster">drosophila melanogaster, I am sure that your visitors will find the information relevant.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 19, 2012 - 10:01 AM

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