سحب الدم من الفئران عن طريق الوريد الصافن والبزل القلب

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

توجه الدم ضرورية في عدد كبير من الدراسات ، على سبيل المثال لدراسة ملف الدوائية للمجمع. هنا ، ونحن لشرح كيفية سحب الدم من الفئران باستخدام اثنين من تقنيات : سحب الدم من الوريد الصافن أو من خلال ثقب في القلب.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. Drawing Blood from Rats through the Saphenous Vein and by Cardiac Puncture. J. Vis. Exp. (7), e266, doi:10.3791/266 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

سحب الدم من القوارض من الضروري بالنسبة لعدد كبير من كلا في التجارب المختبرية والدراسات المجراة. مواقع عديدة توجه الدم في القوارض : قلب الرجعية المدارية الجيوب الأنفية ، وحبل الوريد ، عرق الفك العلوي ، الوريد الصافن. كل أسلوب له مزاياه وعيوبه ، وعدم الموافقة على بعض أي أكثر في بعض البلدان (مثل الرجعية المدارية تلفت في هولندا). مناقشة أساليب مختلفة للرسم والدم 1-3 المتاحة. هنا ، نقدم اثنين من التقنيات لسحب الدم من الفئران ، مع كل التطبيقات الخاصة.

سحب الدم من الوريد الصافن ، شريطة ان يتم ذلك بشكل صحيح ، يدفع الحد الأدنى من الضائقة في الحيوانات و لا يتطلب التخدير. هذا الأسلوب يسمح المتكررة تلفت كميات صغيرة من الدم ، مثل الحاجة للدراسات الدوائية 4،5 ، وتحديد البلازما والكيمياء ، أو تهمة الدم 6.

ثقب في القلب تسمح (ويمكن استخلاص ما يصل الى 10 مل من الدم من الفئران 150 غ) جمع كميات كبيرة من الدم من حيوان واحد. هذه التقنية مفيدة للغاية ولذلك كإجراء المحطة عند سحب الدم من الصافن لن تقدم عينة كبيرة بما فيه الكفاية. نستخدم ثقب في القلب عندما نحتاج كميات كافية من المصل من سلالة معينة من الفئران أن تنمو خطوط اللمفاويات T 4-9 في المختبر.

Protocol

سحب الدم من الفئران عن طريق الوريد الصافن والبزل القلب

ملاحظة : يجب الموافقة على جميع الإجراءات من قبل رعاية الحيوانات المعهد الخاص واستخدام لجنة.

1. سحب الدم من الوريد الصافن

  1. يتم تنفيذ هذا الإجراء دون تخدير ويتطلب شخصين ، واحد الذي يعالج الفئران ، وأحد الذين ينفذ التعادل.
  2. جعل مخروط من منشفة أو الاستمرار على الفئران مع قفازات القوارض المناولة ، وترك أحد أطرافه الخلفية المكشوفة.
  3. حلق الخلفي من الساق مع الانتهازي الكهربائية حتى الوريد الصافن مرئيا. يحلق على مساحة واسعة بما فيه الكفاية ، بحيث لا شعر سوف تأتي في اتصال مع موقع الثقب. استخدام كمية صغيرة من المستحضر جهة غير عطرة للحفاظ على الشعر غير حلق بعيدا عن موقع الثقب.
  4. جعل نقطة ضغط على قاعدة الساق لجعل الوريد الصافن من انتفاخ (مشابه لاستخدام عاصبة عند سحب الدم من الإنسان أو الحيوان الكبرى). ثقب الوريد باستخدام إبرة 20G وحلج القطن في الدم لأنه يخرج باستخدام microvette. وسوف تضخ مع الساق تساعد في جذب مزيد من الدماء. عندما كنت قد جمعت ما يكفي من الدم ، ضغط عقد النظيفة على موقع البزل لوقف النزيف.

2. سحب الدم من خلال ثقب في القلب

  1. هذا الإجراء يتطلب التخدير والطرفية. يجب أن يتم التخلص فورا الحيوانات في نهاية ثقب في القلب.
  2. إعداد محقنة 5 مل مع إبرة 23G1.
  3. anesthesize عميقا للفئران ، والاختيار للتخدير بسبب قلة الحركة العفوية ، وبطء معدل التنفس ، وعدم الاستجابة للمحفزات (مثل معسر في احد اصابع القدم). لضمان التخدير لفترة طويلة ، ومكان للبرميل حقنة تحتوي على منشفة ورقية غارقة في مخدر المضطربة على أنف الفئران خلال هذا الإجراء.
  4. وضع فأر على ظهرها ، تواجه بعيدا عنك.
  5. إذا كنت اليد اليمنى ، ضع السبابة اليسرى في مستوى أدنى من أضلاعه ، ودون تطبيق أي ضغط. وسوف يكون موجودا في قلب ~ 1 سم فوق هذه النقطة ، قليلا إلى اليمين.
  6. عقد المحقنة الخاص بزاوية 45 درجة ، تضاف إبرة بين ضلعين ومشاهدة لقطرة من الدم إلى حيز الإبرة. هذا هو إشارة إلى أن كنت في القلب. حقنة دون تحريك الخاص بك ، سحب على المكبس لملء الحقنة. بمجرد حقنة مليئة ، بعناية فصلها من الإبرة وتفريغها في أنبوب. ويمكن بعد ذلك المحقنة يعاد تعلق على إبرة لسحب المزيد من الدم. ينبغي أن يكون من الممكن استخلاص 50-10 مل من الدم من الفئران ز 120-180.
  7. الموت ببطء على الفور الفئران.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

سحب الدم من الوريد الصافن هو وسيلة مريحة للحصول على كميات صغيرة من الدم من دون تخدير. إذا كان مطلوبا أخذ العينات المتكررة ، والتحقق من لوائح لضمان عدم سحب الدم الكثير من الفئران.

الرسم في الدم عن طريق ثقب في القلب هو وسيلة مريحة للحصول على كميات كبيرة من الدم ولكن هذا هو الاجراء المحطة. يجب أن يتم التخلص من الحيوانات في نهاية سحب الدم.

وينبغي أن تكون هذه التقنيات (كما هو الحال في جميع التقنيات الحيوانات الحية) القيام به أولا في وجود طبيب بيطري أو فني بيطري الذين سيكونون قادرين على تقييم بأن يتم التعامل مع الحيوانات بشكل سليم وعدم تعرض لآلام لا داعي لها و / أو استغاثة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Needle 20G 1/2 Tool BD Biosciences 305176 For puncturing the saphenous vein
Microvette 300 Tool Sarstedt Ltd 20.1308.100 To collect blood from the saphenous vein
Electric trimmer Tool Braintree Scientific, Inc. CLP-32130
Needle 23 G 1 Tool BD Biosciences 305145 For cardiac puncture
5 ml plastic syringe, slip tip Tool Fisher Scientific 14-826-12 For cardiac puncture

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Van Herck, H., Baumans, V., Brandt, C. J. W. M., Boere, H. A. G., Hesp, A. P. M., Van Lith, H. A., Schurink, M., Beynen, A. C. Blood sampling from the retro-orbital plexus, the saphenous vein and the tail vein in rats: comparative effects on selected behavioural and blood variables. Laboratory Animals. 35, 131-139 (2001).
  2. Luzzi, M., Skoumbourdis, E., Baumans, V., Conte, A., Sherwin, C., Kerwin, A., Lang, T., Morton, D., Barley, J., Moreau, E., Weilenmann, R. F., Reinhardt, V. Collecting blood from rodents: a discussion by the laboratory animal refinement and enrichment forum. Animal Technology and Welfare. 4, 99-102 (2005).
  3. Angelow, O., Schroer, R. A., Heft, S., James, V. C., Noble, J. A comparison of two methods of bleeding rats: the venous plexus of the eye versus the vena sublingualis. Jounal of Applied Toxicology. 4, 258-260 (2006).
  4. Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis. Proc. Natl. Acad. 13942-13947 (2001).
  5. Beeton, C., Pennington, M. W., Wulff, H., Singh, S., Nugent, D., Crossley, G., Khaytin, I., Chen, C. Y., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Targeting effector memory T cells with a selective peptide inhibitor of Kv1.3 channels for therapy of autoimmune diseases. Mol. Pharmacol. 1369-1381 (2005).
  6. Beeton, C., Wulff, H., Standifer, N. E., Azam, P., Mullen, K. M., Pennington, M. W., Kolski-Andreaco, A., Wei, E., Grino, A., Counts, D. R., Wang, P. H., LeeHealey, C. J., Andrews, B. S., Sankaranarayanan, A., Homerick, D., Roeck, W. W., Tehranzadeh, J., Stanhope, K. L., Zimin, P., Havel, P. J., Griffey, S., Knaus, H. G., Nepom, G. T., Gutman, G. A., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Kv1.3 channels are a therapeutic target for T cell mediated autoimmune diseases. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 17414-17419 (2006).
  7. Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -M., Gola, M., Sabatier, J. -M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. 936-944 (2001).
  8. Devaux, J., Forni, C., Beeton, C., Barbaria, J., Beraud, E., Gola, M., Crest, M. Myelin basic protein-reactive T cells induce conduction failure in vivo but not in vitro. Neuroreport. 317-320 (2003).
  9. Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and monitoring of adoptive delayed type hypersensitivity in rats. Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).

Comments

13 Comments

  1. DŒs the cardiac puncture procedure also work with mice? If not, how can I do a cardiac puncture with mice?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 1, 2008 - 6:35 PM
  2. Yes, this cardiac puncture also works with mice. It is just a little more difficult as a ²0g mouse is about 10 times smaller than the rat shown on this video but, with a little practice, the mouse cardiac puncture can be done with consistent results.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    October 1, 2008 - 6:42 PM
  3. Is it possible to draw 1 mL of whole blood from the Saphenous vein of a 150 g rat?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 26, 2008 - 10:00 PM
  4. 1 ml is a lot of blood and I doubt you can get that much reliably from the saphenous vein. I usually draw 50-100 ul, sometimes up to 300 ml.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    October 27, 2008 - 11:13 AM
  5. is there is any need to change the needle size for doing experiments in mice

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 11:08 PM
  6. I would try with a ²3G, like for rats. You can use ²5G but then you will start seeing more hemolysis.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    November 11, 2008 - 4:47 PM
  7. Why isn't hemolysis acceptable?

    Reply
    Posted by: sumali k.
    January 4, 2010 - 2:24 PM
  8. Why isn't hemolysis acceptable?

    Reply
    Posted by: sumali k.
    January 4, 2010 - 2:25 PM
  9. Whether of not hemolysis during blood draw is acceptable depends on the use you will have for the blood.
    We often use blood drawn through terminal cardiac puncture for the preparation of serum for tissue culture. In this case we try to avoid hemolysis as this affects cell survival in culture. For other applications, hemolysis may not represent a problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 4, 2010 - 2:34 PM
  10. How much heparin to you add to your tubes before collecting the blood?

    Reply
    Posted by: Alexis L.
    February 3, 2010 - 1:09 PM
  11. If you want to collect plasma, prepare a solution of 5% heparin in PBS and add 0.1 ml of it to each 3-5 ml syringe.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2010 - 1:12 PM
  12. For vena saphena: If you puncture the vein lower (next to the ankle), it's easier, because the vein in this area is more on the surface.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 17, 2011 - 3:45 AM
  13. I'm a graduate student from P.R.China.In our lab, we draw blood from mice from the retro-orbital sinus, which technique I find really disconcerting. I'm fascinated by your technique demonstrated here, and I would be grateful if Ms Beeton can send me the written protocol via e-mail.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 31, 2012 - 7:32 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics