चूहे से saphenous नस के माध्यम से रक्त और कार्डिएक पंचर द्वारा आरेखण

Biology

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Summary

रक्त खींचता है अध्ययन की एक बड़ी संख्या में आवश्यक हैं, एक यौगिक की फार्माकोकाइनेटिक्स प्रोफ़ाइल का अध्ययन करने के लिए उदाहरण के लिए. यहाँ, हम का प्रदर्शन कैसे दो तकनीकों का उपयोग करते हुए चूहों से खून आकर्षित करने के लिए: saphenous नस से या हृदय पंचर द्वारा रक्त आकर्षित.

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Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. Drawing Blood from Rats through the Saphenous Vein and by Cardiac Puncture. J. Vis. Exp. (7), e266, doi:10.3791/266 (2007).

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Abstract

कृन्तकों से रक्त आकर्षित इन विट्रो में और vivo अध्ययन में दोनों की बड़ी संख्या के लिए आवश्यक है. खून की साइटें ड्रॉ कृन्तकों में कई हैं: रेट्रो कक्षीय साइनस, गले का शिरा, दाढ़ की हड्डी का नस, saphenous नस, दिल. प्रत्येक तकनीक के अपने फायदे और नुकसान है, और कुछ किसी भी अधिक कुछ देशों में अनुमोदित नहीं कर रहे हैं (जैसे, रेट्रो कक्षीय हॉलैंड में छोड़ता है). ड्राइंग रक्त के लिए विभिन्न तकनीकों का एक चर्चा उपलब्ध 1-3 कर रहे हैं. यहाँ, हम चूहों से रक्त ड्राइंग के लिए दो तकनीकों, प्रत्येक अपनी विशिष्ट अनुप्रयोगों के साथ प्रस्तुत करते हैं.

Saphenous नस से खून आकर्षित, बशर्ते वह ठीक से किया है, पशुओं में कम से कम संकट लाती है और संज्ञाहरण की आवश्यकता नहीं है. इस तकनीक की अनुमति देता है दोहराया खून की छोटी मात्रा के खींचता है, जैसे pharmacokinetic 4,5 अध्ययन के लिए की जरूरत है, प्लाज्मा, रसायन शास्त्र, या रक्त 6 मायने रखता निर्धारित है.

कार्डिएक पंचर की अनुमति देता है एक एकल जानवर से रक्त की बड़ी मात्रा का संग्रह (रक्त का 10 मिलीलीटर 150 ग्राम चूहे से खींचा जा सकता है है). इसलिए इस तकनीक बहुत उपयोगी है एक टर्मिनल प्रक्रिया के रूप में जब saphenous से रक्त ड्राइंग एक बड़ा पर्याप्त नमूना प्रदान नहीं होता. हम हृदय पंचर का उपयोग करें जब हम 4-9 इन विट्रो में टी लिम्फोसाइट लाइनों बढ़ने चूहों के एक विशिष्ट तनाव से सीरम की पर्याप्त मात्रा की जरूरत है.

Protocol

चूहे से saphenous नस के माध्यम से रक्त और कार्डिएक पंचर द्वारा आरेखण

नोट: सभी प्रक्रियाओं अपने संस्थान जानवरों की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया जाना चाहिए.

1. Saphenous नस से खून आकर्षित

  1. यह प्रक्रिया संज्ञाहरण के बिना प्रदर्शन किया है और दो व्यक्तियों, जो चूहे संभालती है, और एक है जो आकर्षित प्रदर्शन की आवश्यकता है.
  2. एक तौलिया के बाहर एक शंकु या कृंतक से निपटने के दस्ताने के साथ चूहे पकड़, एक पिछले अंग उजागर छोड़ने.
  3. एक बिजली trimmer के साथ पैर की पीठ दाढ़ी saphenous नस तक दिखाई देता है. एक बड़ा पर्याप्त क्षेत्र दाढ़ी, ताकि कोई बाल पंचर साइट के साथ संपर्क में आ जाएगा. गैर सुगंधित हाथ लोशन की एक छोटी राशि का उपयोग करने के लिए गैर - मुंडा बाल पंचर साइट से दूर रखने के लिए.
  4. पैर के आधार पर एक सम्पीडन बिंदु बनाओ saphenous नस उभाड़ना बाहर (एक टूनिकेट का उपयोग कर जब एक मानव या एक बड़े जानवर से रक्त ड्राइंग के समान). पंचर एक 20G सुई का उपयोग नस और रक्त स्कूप के रूप में इसे बाहर आता है एक microvette का उपयोग. पैर के साथ पंप और अधिक खून आकर्षित करने में मदद करेगा. जब आप पर्याप्त रक्त एकत्र किया है, पंचर साइट पर एक साफ सेक पकड़ रक्तस्राव को रोकने.

2. हृदय पंचर द्वारा रक्त आकर्षित

  1. यह प्रक्रिया संज्ञाहरण की आवश्यकता है और टर्मिनल है. पशु तुरंत एक हृदय पंचर के अंत में euthanized किया जाना चाहिए.
  2. एक 23G1 सुई के साथ एक 5 मिलीलीटर सिरिंज तैयार.
  3. गहरा चूहे anesthesize और सहज आंदोलन की कमी, धीमी गति से साँस लेने की दर, और उत्तेजनाओं है (जैसे एक पैर की अंगुली pinching) के जवाब की कमी से संज्ञाहरण की जांच करने के लिए. लंबे समय तक संज्ञाहरण सुनिश्चित करने के लिए, एक सिरिंज प्रति बैरल से युक्त कागज प्रक्रिया के दौरान चूहे की नाक पर अस्थिर संवेदनाहारी में लथपथ तौलिया जगह है.
  4. अपनी पीठ पर चूहे, तुम से दूर का सामना करना पड़ रखें.
  5. यदि आप दाएँ हाथ के हैं, सबसे कम पसलियों के स्तर पर किसी भी दबाव लागू करने के बिना अपनी बाईं तर्जनी जगह. दिल ~ इस बिंदु से ऊपर 1 सेमी, थोड़ा सही करने के लिए स्थित हो जाएगा.
  6. एक 45 डिग्री के कोण पर अपने सिरिंज होल्डिंग, दो पसलियों और घड़ी के बीच सुई में आने के लिए रक्त की एक बूंद के लिए सुई सम्मिलित. यह एक संकेत है कि आप दिल में हैं. अपने सिरिंज चलती बिना, सिरिंज भरने सवार पर खींचो. एक बार सिरिंज भरा है, सुई से ध्यान से इसे काट और यह एक ट्यूब में खाली है. सिरिंज तो कर सकते हैं और अधिक खून ड्राइंग के लिए सुई हो फिर से जुड़ी है. यह संभव हो सकता है एक 120-180 छ चूहे से रक्त के 5-10 मिलीलीटर आकर्षित करना चाहिए.
  7. तुरंत चूहे euthanize.

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Discussion

Saphenous नस से खून आकर्षित संज्ञाहरण के बिना रक्त की छोटी मात्रा में मिल के लिए एक सुविधाजनक तरीका है. यदि दोहराया नमूने की आवश्यकता है, नियमों की जांच करने के लिए सुनिश्चित करें तुम एक चूहे से बहुत ज्यादा खून आकर्षित नहीं करते.

हृदय पंचर के द्वारा रक्त आकर्षित खून की बड़ी मात्रा में प्राप्त करने के लिए एक सुविधाजनक तरीका है, लेकिन यह एक टर्मिनल प्रक्रिया है. जानवर खून आकर्षित के अंत में euthanized किया जाना चाहिए.

इन तकनीकों में (जीवित जानवरों पर सभी तकनीकों के रूप में) पहली बार एक पशुचिकित्सा या एक पशु चिकित्सा तकनीशियन जो आकलन है कि पशुओं को ठीक से नियंत्रित किया जाता है और अनावश्यक दर्द और / या संकट के अधीन नहीं हैं सक्षम हो जाएगा की उपस्थिति में किया जाना चाहिए.

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Needle 20G 1/2 Tool BD Biosciences 305176 For puncturing the saphenous vein
Microvette 300 Tool Sarstedt Ltd 20.1308.100 To collect blood from the saphenous vein
Electric trimmer Tool Braintree Scientific, Inc. CLP-32130
Needle 23 G 1 Tool BD Biosciences 305145 For cardiac puncture
5 ml plastic syringe, slip tip Tool Fisher Scientific 14-826-12 For cardiac puncture

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References

  1. Van Herck, H., Baumans, V., Brandt, C. J. W. M., Boere, H. A. G., Hesp, A. P. M., Van Lith, H. A., Schurink, M., Beynen, A. C. Blood sampling from the retro-orbital plexus, the saphenous vein and the tail vein in rats: comparative effects on selected behavioural and blood variables. Laboratory Animals. 35, 131-139 (2001).
  2. Luzzi, M., Skoumbourdis, E., Baumans, V., Conte, A., Sherwin, C., Kerwin, A., Lang, T., Morton, D., Barley, J., Moreau, E., Weilenmann, R. F., Reinhardt, V. Collecting blood from rodents: a discussion by the laboratory animal refinement and enrichment forum. Animal Technology and Welfare. 4, 99-102 (2005).
  3. Angelow, O., Schroer, R. A., Heft, S., James, V. C., Noble, J. A comparison of two methods of bleeding rats: the venous plexus of the eye versus the vena sublingualis. Jounal of Applied Toxicology. 4, 258-260 (2006).
  4. Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis. Proc. Natl. Acad. 13942-13947 (2001).
  5. Beeton, C., Pennington, M. W., Wulff, H., Singh, S., Nugent, D., Crossley, G., Khaytin, I., Chen, C. Y., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Targeting effector memory T cells with a selective peptide inhibitor of Kv1.3 channels for therapy of autoimmune diseases. Mol. Pharmacol. 1369-1381 (2005).
  6. Beeton, C., Wulff, H., Standifer, N. E., Azam, P., Mullen, K. M., Pennington, M. W., Kolski-Andreaco, A., Wei, E., Grino, A., Counts, D. R., Wang, P. H., LeeHealey, C. J., Andrews, B. S., Sankaranarayanan, A., Homerick, D., Roeck, W. W., Tehranzadeh, J., Stanhope, K. L., Zimin, P., Havel, P. J., Griffey, S., Knaus, H. G., Nepom, G. T., Gutman, G. A., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Kv1.3 channels are a therapeutic target for T cell mediated autoimmune diseases. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 17414-17419 (2006).
  7. Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -M., Gola, M., Sabatier, J. -M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. 936-944 (2001).
  8. Devaux, J., Forni, C., Beeton, C., Barbaria, J., Beraud, E., Gola, M., Crest, M. Myelin basic protein-reactive T cells induce conduction failure in vivo but not in vitro. Neuroreport. 317-320 (2003).
  9. Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and monitoring of adoptive delayed type hypersensitivity in rats. Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).

Comments

13 Comments

  1. DŒs the cardiac puncture procedure also work with mice? If not, how can I do a cardiac puncture with mice?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 1, 2008 - 6:35 PM
  2. Yes, this cardiac puncture also works with mice. It is just a little more difficult as a ²0g mouse is about 10 times smaller than the rat shown on this video but, with a little practice, the mouse cardiac puncture can be done with consistent results.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    October 1, 2008 - 6:42 PM
  3. Is it possible to draw 1 mL of whole blood from the Saphenous vein of a 150 g rat?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 26, 2008 - 10:00 PM
  4. 1 ml is a lot of blood and I doubt you can get that much reliably from the saphenous vein. I usually draw 50-100 ul, sometimes up to 300 ml.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    October 27, 2008 - 11:13 AM
  5. is there is any need to change the needle size for doing experiments in mice

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 11:08 PM
  6. I would try with a ²3G, like for rats. You can use ²5G but then you will start seeing more hemolysis.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    November 11, 2008 - 4:47 PM
  7. Why isn't hemolysis acceptable?

    Reply
    Posted by: sumali k.
    January 4, 2010 - 2:24 PM
  8. Why isn't hemolysis acceptable?

    Reply
    Posted by: sumali k.
    January 4, 2010 - 2:25 PM
  9. Whether of not hemolysis during blood draw is acceptable depends on the use you will have for the blood.
    We often use blood drawn through terminal cardiac puncture for the preparation of serum for tissue culture. In this case we try to avoid hemolysis as this affects cell survival in culture. For other applications, hemolysis may not represent a problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 4, 2010 - 2:34 PM
  10. How much heparin to you add to your tubes before collecting the blood?

    Reply
    Posted by: Alexis L.
    February 3, 2010 - 1:09 PM
  11. If you want to collect plasma, prepare a solution of 5% heparin in PBS and add 0.1 ml of it to each 3-5 ml syringe.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2010 - 1:12 PM
  12. For vena saphena: If you puncture the vein lower (next to the ankle), it's easier, because the vein in this area is more on the surface.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 17, 2011 - 3:45 AM
  13. I'm a graduate student from P.R.China.In our lab, we draw blood from mice from the retro-orbital sinus, which technique I find really disconcerting. I'm fascinated by your technique demonstrated here, and I would be grateful if Ms Beeton can send me the written protocol via e-mail.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 31, 2012 - 7:32 PM

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