伏在静脈を通って心臓穿刺によりラットから採血

Biology

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Summary

血液は、化合物の薬物動態プロファイルを研究するために、例えば、多くの研究に必要な描画します。伏在静脈からまたは心臓穿刺によって採血:ここでは、2つの手法を用いてラットから血液を描画する方法を示します。

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Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. Drawing Blood from Rats through the Saphenous Vein and by Cardiac Puncture. J. Vis. Exp. (7), e266, doi:10.3791/266 (2007).

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Abstract

げっ歯類から血液を描画すると、in vitroおよびin vivo試験の両方の数が多いために必要です。後眼窩洞、頸静脈、上顎静脈、伏在静脈、心臓:血液引き分けのサイトは、げっ歯類にたくさんあり​​ます。各手法には長所と短所がありますし、いくつかは(例えば、眼窩がオランダに引き分け)一部の国ではそれ以上承認されていません。血液を描画するためのさまざまな技術の議論 1〜3ご利用いただけます。ここで、我々は、ラットから血液を描画するための2つの手法、その特定のアプリケーションとのそれぞれを紹介。

それは、適切に行われて提供さ伏在静脈からの採血は、動物に最小限の苦痛を誘発し、麻酔を必要としません。このテクニックは、繰り返しがプラズマ化学、または血球数6決定、4,5薬物動態試験に必要なような、血の少量の描画が可能。

心臓穿刺は、単一の動物から血液を大量に(血液の最大10mlを150gのラットから引き出すことができる)の収集が可能。伏在から血液を描画するときと、十分な大きさのサンプルを提供しないと、端末の手順として、この手法では、したがって、非常に便利です。我々はin vitroで4-9のTリンパ球の線を成長させるためにラットの特定の菌株から血清の十分な量を必要なときに我々は、心臓穿刺を使用してください。

Protocol

伏在静脈を通って心臓穿刺によりラットから採血

:すべての手順は、研究所の動物のケアと使用に関する委員会によって承認されなければならない。

1。伏在静脈からの採血

  1. この手順は、麻酔なしで行われ、二人、ラットを処理する1つ、および描画を行うものが必要です。
  2. タオルの外コーンを行う、または1つ後肢が露出のまま、齧歯類の取り扱い手袋でラットを開催。
  3. 伏在静脈が見えるようになるまで電動トリマーで足の裏を剃る。ない毛は穿刺部位に接触しませんので、十分な大きさの面積を剃る。離れて穿刺部位から非剃毛を保つために、非香りハンドローションの少量を使用してください。
  4. 伏在静脈の膨らみアウト(人間や大型動物から血液を描画するときに止血帯を使用する場合と同様)を作るために足の付け根に圧縮ポイントを作る。穿刺静脈20G針を使用して、それがmicrovetteを使用して出てくる血液をスクープ。足でポンピングするとより多くの血液を描くのに役立ちます。あなたが十分な血液を収集したら、出血を止めるために穿刺部位にきれいな圧縮を続けます。

2。心臓穿刺による採血

  1. この手順では、麻酔を必要とし、端末です。動物はすぐに心臓穿刺の最後に安楽死されている必要があります。
  2. 23G1針と5mlの注射器を準備します。
  3. 深くラットをanesthesizeと自発運動の不足、遅い呼吸率、および刺激(例えばつま先をつまんなど)に対する応答の欠如によって麻酔をチェック。長時間の麻酔を確保するために、手順の実行中にラットの鼻の上に揮発性麻酔薬に浸したペーパータオルを含むシリンジバレルを置きます。
  4. あなたから離れて直面して、その背中にラットを置きます。
  5. あなたが右利きの場合、任意の圧力を適用せずに、最下位の肋骨のレベルで左手の人差し指を置きます。心臓は、この点、上記の約1 cmのやや右側に配置されます。
  6. 45度の角度で注射器を保持し、2本の肋骨の間に針を挿入し、針に入るために血液の降下を監視します。これは、中心部にいることを示しています。あなたの注射器を移動せずに、注射器を埋めるためにプランジャーを引く。注射器がいっぱいになると、慎重に針から外し、チューブにそれを空にします。注射器は、より多くの血液を描画するために針に再接続することができます。それは、120〜180グラムのラットから血液を5〜10 mlを描画することができるはずです。
  7. すぐにラットを安楽死させる。

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Discussion

伏在静脈から血液を描画すると、麻酔なしで血液の少量を取る場合に便利です。繰り返しサンプリングが必要な場合は、一方のラットからあまりに多くの血を引くことがないように規制を確認してください。

心臓穿刺により血液を描画すると、血液を大量に取得する便利な方法ですが、これは端末の手順です。動物は採血の最後に安楽死されている必要があります。

これらの技術は、(生きた動物のすべての技術のような)最初の動物が適切に処理され、不必要な苦痛および/または苦痛にさらされていないことを評価できるようになる獣医師や動物看護士の存在下で行われる必要があります。

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Needle 20G 1/2 Tool BD Biosciences 305176 For puncturing the saphenous vein
Microvette 300 Tool Sarstedt Ltd 20.1308.100 To collect blood from the saphenous vein
Electric trimmer Tool Braintree Scientific, Inc. CLP-32130
Needle 23 G 1 Tool BD Biosciences 305145 For cardiac puncture
5 ml plastic syringe, slip tip Tool Fisher Scientific 14-826-12 For cardiac puncture

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Van Herck, H., Baumans, V., Brandt, C. J. W. M., Boere, H. A. G., Hesp, A. P. M., Van Lith, H. A., Schurink, M., Beynen, A. C. Blood sampling from the retro-orbital plexus, the saphenous vein and the tail vein in rats: comparative effects on selected behavioural and blood variables. Laboratory Animals. 35, 131-139 (2001).
  2. Luzzi, M., Skoumbourdis, E., Baumans, V., Conte, A., Sherwin, C., Kerwin, A., Lang, T., Morton, D., Barley, J., Moreau, E., Weilenmann, R. F., Reinhardt, V. Collecting blood from rodents: a discussion by the laboratory animal refinement and enrichment forum. Animal Technology and Welfare. 4, 99-102 (2005).
  3. Angelow, O., Schroer, R. A., Heft, S., James, V. C., Noble, J. A comparison of two methods of bleeding rats: the venous plexus of the eye versus the vena sublingualis. Jounal of Applied Toxicology. 4, 258-260 (2006).
  4. Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis. Proc. Natl. Acad. 13942-13947 (2001).
  5. Beeton, C., Pennington, M. W., Wulff, H., Singh, S., Nugent, D., Crossley, G., Khaytin, I., Chen, C. Y., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Targeting effector memory T cells with a selective peptide inhibitor of Kv1.3 channels for therapy of autoimmune diseases. Mol. Pharmacol. 1369-1381 (2005).
  6. Beeton, C., Wulff, H., Standifer, N. E., Azam, P., Mullen, K. M., Pennington, M. W., Kolski-Andreaco, A., Wei, E., Grino, A., Counts, D. R., Wang, P. H., LeeHealey, C. J., Andrews, B. S., Sankaranarayanan, A., Homerick, D., Roeck, W. W., Tehranzadeh, J., Stanhope, K. L., Zimin, P., Havel, P. J., Griffey, S., Knaus, H. G., Nepom, G. T., Gutman, G. A., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Kv1.3 channels are a therapeutic target for T cell mediated autoimmune diseases. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 17414-17419 (2006).
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  9. Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and monitoring of adoptive delayed type hypersensitivity in rats. Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).

Comments

13 Comments

  1. DŒs the cardiac puncture procedure also work with mice? If not, how can I do a cardiac puncture with mice?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 1, 2008 - 6:35 PM
  2. Yes, this cardiac puncture also works with mice. It is just a little more difficult as a ²0g mouse is about 10 times smaller than the rat shown on this video but, with a little practice, the mouse cardiac puncture can be done with consistent results.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    October 1, 2008 - 6:42 PM
  3. Is it possible to draw 1 mL of whole blood from the Saphenous vein of a 150 g rat?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 26, 2008 - 10:00 PM
  4. 1 ml is a lot of blood and I doubt you can get that much reliably from the saphenous vein. I usually draw 50-100 ul, sometimes up to 300 ml.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    October 27, 2008 - 11:13 AM
  5. is there is any need to change the needle size for doing experiments in mice

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 11:08 PM
  6. I would try with a ²3G, like for rats. You can use ²5G but then you will start seeing more hemolysis.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    November 11, 2008 - 4:47 PM
  7. Why isn't hemolysis acceptable?

    Reply
    Posted by: sumali k.
    January 4, 2010 - 2:24 PM
  8. Why isn't hemolysis acceptable?

    Reply
    Posted by: sumali k.
    January 4, 2010 - 2:25 PM
  9. Whether of not hemolysis during blood draw is acceptable depends on the use you will have for the blood.
    We often use blood drawn through terminal cardiac puncture for the preparation of serum for tissue culture. In this case we try to avoid hemolysis as this affects cell survival in culture. For other applications, hemolysis may not represent a problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 4, 2010 - 2:34 PM
  10. How much heparin to you add to your tubes before collecting the blood?

    Reply
    Posted by: Alexis L.
    February 3, 2010 - 1:09 PM
  11. If you want to collect plasma, prepare a solution of 5% heparin in PBS and add 0.1 ml of it to each 3-5 ml syringe.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2010 - 1:12 PM
  12. For vena saphena: If you puncture the vein lower (next to the ankle), it's easier, because the vein in this area is more on the surface.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 17, 2011 - 3:45 AM
  13. I'm a graduate student from P.R.China.In our lab, we draw blood from mice from the retro-orbital sinus, which technique I find really disconcerting. I'm fascinated by your technique demonstrated here, and I would be grateful if Ms Beeton can send me the written protocol via e-mail.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 31, 2012 - 7:32 PM

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