Dra blod från råttor genom ytlig ven och från hjärtat

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Blod drar är nödvändiga i ett stort antal studier, till exempel för att studera farmakokinetiken profil av en förening. Här visar vi hur man drar blod från råttor med hjälp av två tekniker: blod dra av ytlig ven eller från hjärtat.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. Drawing Blood from Rats through the Saphenous Vein and by Cardiac Puncture. J. Vis. Exp. (7), e266, doi:10.3791/266 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Ritning blod från gnagare är nödvändigt för ett stort antal både in vitro och in vivo-studier. Webbplatser av blod drar är många i gnagare: retro-orbital sinus, halsvenen, maxillary ven, ytlig ven, hjärta. Varje teknik har sina fördelar och nackdelar, och vissa är inte godkända längre i vissa länder (t ex, retro-orbital drar i Holland). En diskussion om olika tekniker för att dra blod finns 1-3. Här presenterar vi två tekniker för att dra blod från råttor, alla med sina specifika tillämpningar.

Blod dra från ytlig ven, förutsatt att det görs på rätt sätt, framkallar minimala lidande hos djur och inte kräver narkos. Denna teknik möjliggör upprepad drar av små mängder av blod, som behövs för farmakokinetiska studier 4,5, bestämma plasmakemi eller blodvärden 6.

Hjärtat punktering tillåter insamling av stora mängder av blod från ett enskilt djur (upp till 10 ml blod kan dras från en 150 g råtta). Denna teknik är därför mycket värdefullt som en terminal förfarande vid utarbetandet blod från ytlig inte skulle ge ett tillräckligt stort urval. Vi använder hjärt punktering när vi behöver tillräckliga mängder av serum från en viss stam av råttor för att växa T-lymfocyter linjer in vitro 4-9.

Protocol

Dra blod från råttor genom ytlig ven och från hjärtat

OBS: Alla förfaranden ska godkännas av din högskolans djurvård och använda kommitté.

1. Blod dra av ytlig ven

  1. Detta görs utan bedövning och det behövs två personer, en som hanterar råttan, och en som utför lottningen.
  2. Gör en kon av en handduk eller hålla råttan med gnagare handskar, lämnar en bakbenen utsätts för.
  3. Shave baksidan av benet med en elektrisk trimmer tills ytlig ven är synlig. Raka ett tillräckligt stort område så att inget hår kommer i kontakt med punktionsstället. Använd en liten mängd icke-doftande handkräm för att hålla icke-rakade håret bort från punktionsstället.
  4. Gör en kompression punkt vid basen av benet för att göra ytlig ut ven utbuktning (påminner om att använda ett tryckförband vid utarbetandet blod från en människa eller ett stort djur). Punktera venen med en 20G nål och skopa i blodet som det kommer ut med en microvette. Pumpning med benet kommer att hjälpa dra mer blod. När du har samlat tillräckligt med blod, hålla en ren kompress på injektionsstället för att stoppa blödning.

2. Blod dra från hjärtat

  1. Denna procedur kräver narkos och är terminalen. Djur skall omedelbart avlivas i slutet av en hjärt punktering.
  2. Förbered en 5 ml spruta med en 23G1 nål.
  3. Djupt anesthesize råttan och kontrollera för anestesi av en brist på spontana rörelser, långsam andning, och avsaknad av reaktion på stimuli (t.ex. nypa en tå). För att säkerställa långvarig anestesi, placera en sprutan innehåller hushållspapper indränkt i inhalationsanestetikum på råtta näsa under förfarandet.
  4. Placera råttan på rygg, vänd bort från dig.
  5. Om du är högerhänt, placera vänster pekfinger på samma nivå som den lägsta revben, utan att något tryck. Hjärtat kommer att vara belägen ca 1 cm ovanför denna punkt, något till höger.
  6. Håll din spruta på en 45-graders vinkel, in nålen mellan två revben och titta på en droppe blod att komma in nålen. Detta är en indikation på att du är i hjärtat. Utan att flytta din spruta och dra i kolven för att fylla sprutan. När sprutan är full försiktigt bort det från injektionsnålen och tömma den till ett rör. Sprutan kan sedan åter fäst nålen för att dra mer blod. Det bör vara möjligt att dra 5-10 ml blod från en 120-180 g råtta.
  7. Omedelbart avliva råttan.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Ritning blod från ytlig ven är ett bekvämt sätt att få små mängder av blod utan bedövning. Om upprepad provtagning krävs, kontrollera förordningar för att säkerställa att du inte drar alltför mycket blod från en råtta.

Teckning blod från hjärtat är ett bekvämt sätt att få stora mängder blod men detta är en terminal förfarande. Djuret ska avlivas i slutet av blodet oavgjort.

Dessa tekniker (som alla tekniker på levande djur) bör först göras i närvaro av en veterinär eller en veterinär tekniker som kommer att kunna bedöma att djuren behandlas väl och inte utsätts för onödig smärta och / eller ångest.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Needle 20G 1/2 Tool BD Biosciences 305176 For puncturing the saphenous vein
Microvette 300 Tool Sarstedt Ltd 20.1308.100 To collect blood from the saphenous vein
Electric trimmer Tool Braintree Scientific, Inc. CLP-32130
Needle 23 G 1 Tool BD Biosciences 305145 For cardiac puncture
5 ml plastic syringe, slip tip Tool Fisher Scientific 14-826-12 For cardiac puncture

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Van Herck, H., Baumans, V., Brandt, C. J. W. M., Boere, H. A. G., Hesp, A. P. M., Van Lith, H. A., Schurink, M., Beynen, A. C. Blood sampling from the retro-orbital plexus, the saphenous vein and the tail vein in rats: comparative effects on selected behavioural and blood variables. Laboratory Animals. 35, 131-139 (2001).
  2. Luzzi, M., Skoumbourdis, E., Baumans, V., Conte, A., Sherwin, C., Kerwin, A., Lang, T., Morton, D., Barley, J., Moreau, E., Weilenmann, R. F., Reinhardt, V. Collecting blood from rodents: a discussion by the laboratory animal refinement and enrichment forum. Animal Technology and Welfare. 4, 99-102 (2005).
  3. Angelow, O., Schroer, R. A., Heft, S., James, V. C., Noble, J. A comparison of two methods of bleeding rats: the venous plexus of the eye versus the vena sublingualis. Jounal of Applied Toxicology. 4, 258-260 (2006).
  4. Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis. Proc. Natl. Acad. 13942-13947 (2001).
  5. Beeton, C., Pennington, M. W., Wulff, H., Singh, S., Nugent, D., Crossley, G., Khaytin, I., Chen, C. Y., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Targeting effector memory T cells with a selective peptide inhibitor of Kv1.3 channels for therapy of autoimmune diseases. Mol. Pharmacol. 1369-1381 (2005).
  6. Beeton, C., Wulff, H., Standifer, N. E., Azam, P., Mullen, K. M., Pennington, M. W., Kolski-Andreaco, A., Wei, E., Grino, A., Counts, D. R., Wang, P. H., LeeHealey, C. J., Andrews, B. S., Sankaranarayanan, A., Homerick, D., Roeck, W. W., Tehranzadeh, J., Stanhope, K. L., Zimin, P., Havel, P. J., Griffey, S., Knaus, H. G., Nepom, G. T., Gutman, G. A., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Kv1.3 channels are a therapeutic target for T cell mediated autoimmune diseases. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 17414-17419 (2006).
  7. Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -M., Gola, M., Sabatier, J. -M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. 936-944 (2001).
  8. Devaux, J., Forni, C., Beeton, C., Barbaria, J., Beraud, E., Gola, M., Crest, M. Myelin basic protein-reactive T cells induce conduction failure in vivo but not in vitro. Neuroreport. 317-320 (2003).
  9. Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and monitoring of adoptive delayed type hypersensitivity in rats. Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).

Comments

13 Comments

  1. DŒs the cardiac puncture procedure also work with mice? If not, how can I do a cardiac puncture with mice?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 1, 2008 - 6:35 PM
  2. Yes, this cardiac puncture also works with mice. It is just a little more difficult as a ²0g mouse is about 10 times smaller than the rat shown on this video but, with a little practice, the mouse cardiac puncture can be done with consistent results.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    October 1, 2008 - 6:42 PM
  3. Is it possible to draw 1 mL of whole blood from the Saphenous vein of a 150 g rat?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 26, 2008 - 10:00 PM
  4. 1 ml is a lot of blood and I doubt you can get that much reliably from the saphenous vein. I usually draw 50-100 ul, sometimes up to 300 ml.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    October 27, 2008 - 11:13 AM
  5. is there is any need to change the needle size for doing experiments in mice

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 11:08 PM
  6. I would try with a ²3G, like for rats. You can use ²5G but then you will start seeing more hemolysis.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    November 11, 2008 - 4:47 PM
  7. Why isn't hemolysis acceptable?

    Reply
    Posted by: sumali k.
    January 4, 2010 - 2:24 PM
  8. Why isn't hemolysis acceptable?

    Reply
    Posted by: sumali k.
    January 4, 2010 - 2:25 PM
  9. Whether of not hemolysis during blood draw is acceptable depends on the use you will have for the blood.
    We often use blood drawn through terminal cardiac puncture for the preparation of serum for tissue culture. In this case we try to avoid hemolysis as this affects cell survival in culture. For other applications, hemolysis may not represent a problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 4, 2010 - 2:34 PM
  10. How much heparin to you add to your tubes before collecting the blood?

    Reply
    Posted by: Alexis L.
    February 3, 2010 - 1:09 PM
  11. If you want to collect plasma, prepare a solution of 5% heparin in PBS and add 0.1 ml of it to each 3-5 ml syringe.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2010 - 1:12 PM
  12. For vena saphena: If you puncture the vein lower (next to the ankle), it's easier, because the vein in this area is more on the surface.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 17, 2011 - 3:45 AM
  13. I'm a graduate student from P.R.China.In our lab, we draw blood from mice from the retro-orbital sinus, which technique I find really disconcerting. I'm fascinated by your technique demonstrated here, and I would be grateful if Ms Beeton can send me the written protocol via e-mail.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 31, 2012 - 7:32 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics