Safen Ven ve Kardiyak Delinme Ratlarda Kan Alma

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Kan gerekli çalışmalar çok sayıda beraberlik, örneğin bir bileşiktir farmakokinetik profili çalışma. Safen ven veya kalp ponksiyonu ile kan alımından: Burada iki teknikleri kullanılarak sıçanların kan çekmek için nasıl göstermektedir.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. Drawing Blood from Rats through the Saphenous Vein and by Cardiac Puncture. J. Vis. Exp. (7), e266, doi:10.3791/266 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Kemirgenler gelen kan Çizim, hem de çok sayıda in vitro ve in vivo çalışmalar gerekli. Kan Siteleri kemirgenlerde çoktur çizer: retroorbital sinüs, juguler ven, maksiller ven, safen ven, kalp. Her tekniğin avantajları ve dezavantajları vardır ve bazılarında (örneğin, retro-orbital çekiyor Hollanda), bazı ülkelerde daha fazla uygun değildir. Çizim kan için farklı teknikler bir tartışma 1-3. Burada, sıçanlarda kan çizmek için her iki teknikleri, kendine özgü uygulamaları ile sunuyoruz.

, Düzgün bir şekilde yapılır safen ven kan beraberlik, hayvanlarda en az sıkıntı neden olur ve anestezi gerektirmez. Bu teknik, tekrarlanan plazma kimyası, ya da kan sayımı 6 belirlenmesi, 4,5 farmakokinetik çalışmalar için gerekli gibi, az miktarda kan çekiyor sağlar .

Kardiyak ponksiyon tek bir hayvan, kan, büyük miktarda (10 ml kadar kan toplanması 150 g sıçan çizilebilir) yapılmasını sağlar. Bu teknik, bu nedenle kan safen çizerken, yeterince büyük bir örnek teşkil etmeyecektir bir terminal prosedür olarak çok yararlıdır. Sıçanlarda belirli bir zorlanma, in vitro 4-9 T lenfosit hatları büyümeye yeterli miktarda serum ihtiyacınız olduğunda kalp ponksiyon kullanın .

Protocol

Safen Ven ve Kardiyak Delinme Ratlarda Kan Alma

Not: Tüm işlemler enstitünün hayvan bakımı ve kullanımı komitesi tarafından onaylanmış olmalıdır.

1. Safen ven Kan berabere

  1. Bu işlemi anestezi verilmeden yapılan ve iki kişilik, sıçan kolları ve beraberlik yapar gerektirir.
  2. Bir koni bir havlu veya bir arka bacak maruz bırakarak, kemirgen taşıma eldivenleri ile sıçan tutun.
  3. Safen ven görünür oluncaya kadar bir elektrik düzeltici bacak arka Tıraş. Hiç saç ponksiyon site ile temas gelecektir ki, yeterince büyük bir alan tıraş. Ponksiyon sitesinden olmayan saçları tıraş uzakta tutmak için küçük bir miktar olmayan kokulu el losyonu kullanın.
  4. Safen ven çıkıntı (bir insan veya büyük hayvan kan çizerken bir turnike kullanarak benzeri) yapmak için bacak üssünde bir sıkıştırma noktasına olun. Delinme 20G iğne ile ven ve kan kepçe microvette kullanarak çıkar. Bacak ile daha fazla kan pompalanması çekmek yardımcı olacaktır. Yeterli kan toplandığı zaman, kanamayı durdurmak için temiz bir kompres ponksiyon sitesinde tutun.

2. Kan beraberlik kalp ponksiyon

  1. Bu işlem anestezi gerektirir ve terminal. Hayvanlar hemen bir kardiyak ponksiyon sonunda ötenazi olmalı.
  2. 23G1 bir iğne ile 5 ml şırınga hazırlayın.
  3. Derinden sıçan anesthesize ve spontan hareket eksikliği, yavaş solunum hızını ve uyaranlar (ayak kısma gibi) yanıt eksikliği anestezi için onay. Uzun süreli anestezi sağlamak için, işlem sırasında sıçan burun volatil anestetik batırılmış kağıt havlu içeren bir şırınga varil yerleştirin.
  4. Size dönük sırtında sıçan, yerleştirin.
  5. Sağ elini iseniz, herhangi bir baskı uygulamadan, en düşük kaburga düzeyinde sol işaret parmağı yerleştirin. Kalp bu noktada yukarıda ~ 1 cm, biraz sağa doğru yer alacaktır.
  6. 45 derecelik bir açıyla şırınga Holding, iğne haline gelmek için kan bir damla, iki kaburga ve saat arasında iğne takın. Bu kalp olduğunu bir göstergesidir. Şırınga hareket olmadan, şırınga doldurmak için pistonu çekiniz. Sonra şırınga tam, iğne dikkatlice kesin ve bir tüp içine boşaltın. Sonra daha fazla kan çizmek için şırınga, iğne yeniden eklenmiş olabilir. 120-180 g sıçan 5-10 ml kan çekmek mümkün olmalıdır.
  7. Hemen sıçan euthanize.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Safen ven kan Çizim anestezi olmadan küçük miktarda kan almak için uygun bir yoldur. Tekrarlanan örnekleme gerekiyorsa, bir sıçan çok fazla kan çizmezseniz sağlamak için düzenlemeler kontrol edin.

Kalp ponksiyonu ile kan Çizim büyük miktarda kan almak için uygun bir yoldur ama bu bir terminal işlemdir. Hayvan kan beraberlik sonunda ötenazi olmalı.

Bu teknikler (canlı hayvanlar üzerinde yapılan tüm teknikler gibi), ilk hayvanların doğru işlenir ve gereksiz ağrı ve / veya sıkıntı tabi olmadığını değerlendirmek mümkün olacak bir veteriner hekim veya bir veteriner teknisyeni huzurunda yapılmalıdır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Needle 20G 1/2 Tool BD Biosciences 305176 For puncturing the saphenous vein
Microvette 300 Tool Sarstedt Ltd 20.1308.100 To collect blood from the saphenous vein
Electric trimmer Tool Braintree Scientific, Inc. CLP-32130
Needle 23 G 1 Tool BD Biosciences 305145 For cardiac puncture
5 ml plastic syringe, slip tip Tool Fisher Scientific 14-826-12 For cardiac puncture

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Van Herck, H., Baumans, V., Brandt, C. J. W. M., Boere, H. A. G., Hesp, A. P. M., Van Lith, H. A., Schurink, M., Beynen, A. C. Blood sampling from the retro-orbital plexus, the saphenous vein and the tail vein in rats: comparative effects on selected behavioural and blood variables. Laboratory Animals. 35, 131-139 (2001).
  2. Luzzi, M., Skoumbourdis, E., Baumans, V., Conte, A., Sherwin, C., Kerwin, A., Lang, T., Morton, D., Barley, J., Moreau, E., Weilenmann, R. F., Reinhardt, V. Collecting blood from rodents: a discussion by the laboratory animal refinement and enrichment forum. Animal Technology and Welfare. 4, 99-102 (2005).
  3. Angelow, O., Schroer, R. A., Heft, S., James, V. C., Noble, J. A comparison of two methods of bleeding rats: the venous plexus of the eye versus the vena sublingualis. Jounal of Applied Toxicology. 4, 258-260 (2006).
  4. Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis. Proc. Natl. Acad. 13942-13947 (2001).
  5. Beeton, C., Pennington, M. W., Wulff, H., Singh, S., Nugent, D., Crossley, G., Khaytin, I., Chen, C. Y., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Targeting effector memory T cells with a selective peptide inhibitor of Kv1.3 channels for therapy of autoimmune diseases. Mol. Pharmacol. 1369-1381 (2005).
  6. Beeton, C., Wulff, H., Standifer, N. E., Azam, P., Mullen, K. M., Pennington, M. W., Kolski-Andreaco, A., Wei, E., Grino, A., Counts, D. R., Wang, P. H., LeeHealey, C. J., Andrews, B. S., Sankaranarayanan, A., Homerick, D., Roeck, W. W., Tehranzadeh, J., Stanhope, K. L., Zimin, P., Havel, P. J., Griffey, S., Knaus, H. G., Nepom, G. T., Gutman, G. A., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Kv1.3 channels are a therapeutic target for T cell mediated autoimmune diseases. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 17414-17419 (2006).
  7. Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -M., Gola, M., Sabatier, J. -M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. 936-944 (2001).
  8. Devaux, J., Forni, C., Beeton, C., Barbaria, J., Beraud, E., Gola, M., Crest, M. Myelin basic protein-reactive T cells induce conduction failure in vivo but not in vitro. Neuroreport. 317-320 (2003).
  9. Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and monitoring of adoptive delayed type hypersensitivity in rats. Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).

Comments

13 Comments

  1. DŒs the cardiac puncture procedure also work with mice? If not, how can I do a cardiac puncture with mice?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 1, 2008 - 6:35 PM
  2. Yes, this cardiac puncture also works with mice. It is just a little more difficult as a ²0g mouse is about 10 times smaller than the rat shown on this video but, with a little practice, the mouse cardiac puncture can be done with consistent results.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    October 1, 2008 - 6:42 PM
  3. Is it possible to draw 1 mL of whole blood from the Saphenous vein of a 150 g rat?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 26, 2008 - 10:00 PM
  4. 1 ml is a lot of blood and I doubt you can get that much reliably from the saphenous vein. I usually draw 50-100 ul, sometimes up to 300 ml.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    October 27, 2008 - 11:13 AM
  5. is there is any need to change the needle size for doing experiments in mice

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 11:08 PM
  6. I would try with a ²3G, like for rats. You can use ²5G but then you will start seeing more hemolysis.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    November 11, 2008 - 4:47 PM
  7. Why isn't hemolysis acceptable?

    Reply
    Posted by: sumali k.
    January 4, 2010 - 2:24 PM
  8. Why isn't hemolysis acceptable?

    Reply
    Posted by: sumali k.
    January 4, 2010 - 2:25 PM
  9. Whether of not hemolysis during blood draw is acceptable depends on the use you will have for the blood.
    We often use blood drawn through terminal cardiac puncture for the preparation of serum for tissue culture. In this case we try to avoid hemolysis as this affects cell survival in culture. For other applications, hemolysis may not represent a problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 4, 2010 - 2:34 PM
  10. How much heparin to you add to your tubes before collecting the blood?

    Reply
    Posted by: Alexis L.
    February 3, 2010 - 1:09 PM
  11. If you want to collect plasma, prepare a solution of 5% heparin in PBS and add 0.1 ml of it to each 3-5 ml syringe.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2010 - 1:12 PM
  12. For vena saphena: If you puncture the vein lower (next to the ankle), it's easier, because the vein in this area is more on the surface.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 17, 2011 - 3:45 AM
  13. I'm a graduate student from P.R.China.In our lab, we draw blood from mice from the retro-orbital sinus, which technique I find really disconcerting. I'm fascinated by your technique demonstrated here, and I would be grateful if Ms Beeton can send me the written protocol via e-mail.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 31, 2012 - 7:32 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics