ampliPHOX इन्फ्लुएंजा के लिए एक डीएनए माइक्रोएरे पर वर्णमिति जांच

Immunology and Infection

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Summary

ampliPHOX वर्णमिति पहचान तकनीक के प्रोटीन के लिए प्रतिदीप्ति पता लगाने के लिए एक सस्ता विकल्प के रूप में प्रस्तुत किया है. Photopolymerization के आधार पर, ampliPHOX ठोस बहुलक बस कुछ ही मिनटों में नग्न आंखों को दिखाई धब्बे पैदा करता है. परिणाम तो imaged और एक सरल अभी तक शक्तिशाली सॉफ्टवेयर पैकेज के साथ स्वचालित रूप से व्याख्या की.

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Moulton, K. R., Taylor, A. W., Rowlen, K. L., Dawson, E. D. ampliPHOX Colorimetric Detection on a DNA Microarray for Influenza. J. Vis. Exp. (52), e2682, doi:10.3791/2682 (2011).

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Abstract

Protocol

1. RT-पीसीआर का उपयोग नमूना प्रवर्धन

  1. नैदानिक ​​सामग्री या एक वायरल QIAcube स्वचालित न्यूक्लिक एसिड निकासी मंच के साथ संयोजन के रूप में Qiagen MinElute वायरस स्पिन किट का उपयोग कर से अलग है. वायरल शाही सेना से निकालें Extractions 200 μl नमूना पर 60 μl के अंतिम elution मात्रा के साथ प्रदर्शन कर रहे हैं. -70 पर स्टोर अर्क डिग्री सेल्सियस या बाद में उपयोग के लिए कम है.
  2. क्षेत्र मुक्त एक टेम्पलेट में, बर्फ पर निर्माता प्रोटोकॉल के अनुसार RT-पीसीआर मास्टर मिश्रण तैयार है. RT-पीसीआर के दौरान बायोटिन शामिल करने के लिए, dNTP मिश्रण निर्माता आपूर्ति की जगह में एक biotinylated dNTP मिश्रण का उपयोग करें. biotinylated dNTP मिश्रण का उपयोग की लागत कम से कम $ 1 USD परख / है. बायोटिन biotinylated प्राइमर का उपयोग जैसे निगमन के वैकल्पिक तरीकों को भी इस्तेमाल किया जा सकता है. जोड़ें प्राइमर एक फ्लू के लिए 1.0 सुक्ष्ममापी के अंतिम सांद्रता में घोला जा सकता है, फ्लू बी के लिए 1.0 सुक्ष्ममापी, और आंतरिक नियंत्रण के लिए 0.14 सुक्ष्ममापी. फ्लू एक प्राइमर सेट मैट्रिक्स जीन खंड (1032 NT के उत्पाद) amplifies और फ्लू बी प्राइमर सेट एक जीन गैर संरचनात्मक खंड (811 NT के उत्पाद) amplifies. प्रत्येक FluChip प्राइमर सेट एक 5 'phosphoryl समूह के लिए एकल असहाय डीएनए पीसीआर निम्नलिखित लैम्ब्डा exonuclease के साथ enzymatic पाचन के माध्यम से पीढ़ी की सुविधा के साथ एक प्राइमर शामिल हैं. परिणामस्वरूप एकल असहाय उत्पाद बहुत कम डबल असहाय समकक्ष से संकरण समय की आवश्यकता है और काफी समग्र परख समय shortens. इन प्राइमरों के एक पूर्व तैयार मिश्रण के रूप में के रूप में अच्छी तरह से आंतरिक नियंत्रण टेम्पलेट शाही सेना InDevR से एक सीमित आधार पर इच्छुक शोधकर्ताओं के लिए उपलब्ध हैं.
  3. संक्षेप में भंवर और पतली दीवारों ट्यूबों पीसीआर में मास्टर मिश्रण के 18 μl वितरित.
  4. टेम्पलेट के अलावा के लिए एक उपयुक्त कार्य क्षेत्र के लिए बर्फ पर ट्यूबों, स्थानांतरण और प्रत्येक प्रतिक्रिया ट्यूब के लिए 2 μl टेम्पलेट जोड़ें.
  5. स्थानांतरण एक थर्मल cycler, और निम्नलिखित थर्मल प्रोफ़ाइल चलाने के लिए पीसीआर ट्यूबों: 50 में रिवर्स प्रतिलेखन ° 30 मिनट, एंजाइम निष्क्रियता 95 / सक्रियण के लिए सी और सी के लिए 15 मिनट, 40 95 ° C 30 के लिए पीसीआर चक्र, 55 ° ° सी 30 के लिए, और 72 डिग्री सेल्सियस के लिए 1 मिनट और 72 पर अंतिम विस्तार ° सी 10 मिनट के लिए.

2. RT-पीसीआर के उत्पादों की कम घनत्व डीएनए संकरण

  1. आदेश में FluChip संकरण के लिए एकल असहाय डीएनए उत्पन्न करने के लिए, 1.0 μl लैम्ब्डा exonuclease एंजाइम, साथ प्रतिक्रिया बफर के 2.2 μl और nuclease मुफ्त पानी के 0.8 μl संयोजन enzymatic पाचन मिश्रण तैयार करते हैं. इन राशियों के एक एकल नमूने के लिए कर रहे हैं, लेकिन बस पचा नमूनों की कुल संख्या के लिए बढ़ाया जा सकता है. थर्मल cycler से नमूने निकालें और प्रत्येक प्रतिक्रिया के लिए तैयार मिश्रण के 4 μl जोड़ने के लिए पीसीआर उत्पाद के phosphorylated कतरा को पचाने. थर्मल cycler और 10 मिनट enzymatic पाचन और गर्मी विखंडन चरणों को पूरा करने के लिए 95 डिग्री सेल्सियस के द्वारा पीछा किया 15 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस के लिए थर्मल cycler के कार्यक्रम के लिए नमूने लौटें.
  2. एप्लाइड प्रोटीन इंक (Tempe, AZ) द्वारा कस्टम इन्फ्लूएंजा प्रोटीन का इस्तेमाल किया एल्डिहाइड functionalized गिलास स्लाइड पर मुद्रित कर रहे हैं. 5'-एमिनो समाप्त कब्जा दृश्यों एक अनुकूलित खोलना बफर के साथ संयुक्त कर रहे हैं और 20 सुक्ष्ममापी के अंतिम एकाग्रता में छपी हैं (सकारात्मक नियंत्रण अनुक्रम जो अतिरिक्त 3'-बायोटिन एक संशोधन है और 500 एनएम के एक अंतिम एकाग्रता में देखा है के लिए छोड़कर) . एक विधि खोलना गैर संपर्क, में 300 सुक्ष्ममापी और 700 सुक्ष्ममापी के केंद्र पिच के लिए केंद्र के एक इष्टतम स्थान व्यास के साथ प्रयोग किया जाता है.
  3. भंडारण बॉक्स से निकालें प्रोटीन और प्रोटीन के आसपास सुरक्षात्मक शीट को हटाने और अच्छी तरह से परिधि के चारों ओर मजबूती से दबाने द्वारा एकल उपयोग संकरण कुओं लागू करें.
  4. एक 5 मिनट पूर्व संकरण 60-90 rpm पर एक कक्षीय प्रकार के बरतन का उपयोग कर धोने के लिए शुद्ध पानी की 110 मिलीलीटर से युक्त एक धोने बिन में प्लेस स्लाइड. धीरे से अच्छी तरह से किनारे करने के लिए एक ऊतक छू वाइपर और पानी दुष्ट को दूर करने की अनुमति सरणी सूखी.
  5. खंडित ssDNA उत्पादों में से प्रत्येक के साथ 22 2x संकरण बफर के μl, और pipet माइक्रोएरे कुओं में संकरण के समाधान के 40 μl मिश्रण.
  6. स्लाइड बंद नमी कक्ष में 60 मिनट के लिए संकरण के लिए अनुमति दें.
  7. आर्द्रता चैम्बर से स्लाइड्स निकालें, संक्षेप में एक बोतल कुल्ला में स्लाइड रैक में रखने से पहले धो बफर विकास के साथ arrays कुल्ला. आमतौर पर धो बफर विकास के rinsing मात्रा सरणी 2 प्रति मिलीलीटर है. प्लेस स्लाइड स्लाइड्स धोने बिन में 1 मिनट के लिए 60-90 rpm पर 110 मिलीलीटर धो बफर ए कक्षीय हिलनेवाला पर प्लेस बिन युक्त युक्त रैक.
  8. धो बफर से स्लाइड रैक निकालें, संक्षेप में धो बफर विकास, स्थानांतरण स्लाइड धो बफर बी युक्त बिन रैक के साथ कुल्ला, और 5 मिनट के लिए 60-90 rpm पर हिला.
  9. धीरे प्रत्येक स्लाइड पर सरणी शुष्क है, और आर्द्रता चैम्बर में ampliPHOX वर्णमिति जांच चरणों के लिए तैयारी में सूखे स्लाइड्स जगह.

3. ampliPHOX: ampliTAG के साथ संकरित उत्पाद और अंशांकन चिप्स लेबलिंग

  1. कम्बाइन AmpliTAG के 10 μl, 2x ampliTAG बफर, और प्रत्येक संसाधित किया जा सरणी के लिए शुद्ध पानी की 10 μl के 20 μl. अभिकर्मक मात्रा बस नमूनों की कुल संख्या के लिए बढ़ाया जा सकता है है. सभी नमूना arrays और अंशांकन सरणियों की जरूरत के लिए खाते में पर्याप्त लेबलिंग मिश्रण तैयार करने के लिए सुनिश्चित करें. अंशांकन की जरूरत चिप्स की संख्या चाहे आप एक पूर्ण अंशांकन (एक नए उपकरण या अभिकर्मकों के नए बहुत के लिए), या सिर्फ एक साधन की जांच प्रदर्शन कर रहे हैं पर निर्भर करता है. अंशांकन के लिए एक पूर्ण, 3 अंशांकन चिप्स, लेबल किया जाना चाहिए और एक अभिकर्मक की जांच करने के लिए, सिर्फ एक ही अंशांकन चिप लेबल किया जाना चाहिए. कृपया ध्यान दें कि पहले अंशांकन सरणियों में चिह्नित कर रहे हैं, वे पूर्व संकरण धोने कदम है कि इन्फ्लूएंजा arrays के लिए पहले वर्णित किया गया है के माध्यम से जाना चाहिए.
  2. प्रत्येक सरणी के लिए लेबल के मिश्रण के 40 μl स्थानांतरण और प्रतिक्रिया के लिए 5 मिनट के लिए एक बंद आर्द्रता चैम्बर में आगे बढ़ना लेबलिंग की अनुमति.
  3. तुरंत धो बफर डी के साथ एक स्लाइड रैक में स्लाइड्स रखने से पहले एक बोतल कुल्ला सरणियों कुल्ला. रैक धो बफर सी की 110 मिलीग्राम से युक्त बिन में स्थानांतरण, और 5 मिनट के लिए 60-90 rpm पर हिला.
  4. एक दूसरे धोने शुद्ध पानी से भरा बिन का प्रयोग, नमक अवशेषों को हटाने के लिए प्रदर्शन करने के लिए लगातार तीन संक्षिप्त पानी dips. धीरे से कुओं के किनारे करने के लिए एक ऊतक वाइपर छू द्वारा arrays सूखी.
  5. प्रोटीन अब ठीक ampliTAG के साथ लेबल, और ampliPHOX पता लगाने प्रक्रिया के शेष किया जा सकता है. Photoactivation और लेबल arrays के इमेजिंग 24 घंटे के भीतर पूरा किया जाना चाहिए, और अतिरिक्त arrays उपयोग करें जब तक एक अंधेरे स्लाइड बॉक्स में संग्रहीत किया जा सकता है.

4. ampliPHOX: अंशांकन, संकेत प्रवर्धन और इमेजिंग

  1. पर ampliPHOX पाठक करें और यह सुनिश्चित ampliVIEW सॉफ्टवेयर photoactivation के लिए तैयार है.
  2. इष्टतम photoactivation अंशांकन चिप्स का उपयोग कर समय का निर्धारण करते हैं. संक्षिप्त परिचय है कि इस प्रकार के अलावा, इस प्रक्रिया भी ampliPHOX आपरेशन मैनुअल में विस्तार में उल्लिखित है. अंशांकन चिप्स एक biotinylated नियंत्रण अनुक्रम कि अंशांकन चिप है कि एक सकारात्मक संकेत के रूप में सॉफ्टवेयर के द्वारा निर्धारित उत्पादन की पंक्तियों की संख्या को अधिकतम करने के लक्ष्य के साथ परख की संवेदनशीलता, अनुकूलन का उपयोग कर रहे हैं के dilutions की एक श्रृंखला के होते हैं.
  3. 4 से निकालें ampliPHY ° सी, कमरे के तापमान पर गर्म अनुमति है, और संक्षेप में भंवर के लिए मिश्रण. Pipet ampliPHY शीशी में ampliPHY बढ़ाने के 3 μl, और 10 सेकंड के लिए अच्छी तरह भंवर.
  4. समान रूप से अच्छी तरह से ampliTAG - लेबल सरणी युक्त माइक्रोएरे में ampliPHY समाधान के 40 μl हस्तांतरण सुनिश्चित करना है कि कोई बुलबुले मौजूद हैं. प्रत्येक आवेदन के बीच ampliPHY शीशी बंद. AmpliPHOX रीडर के photoactivation खाड़ी में माइक्रोएरे स्लाइड डालें.
  5. पहले अंशांकन सरणी के लिए, सॉफ्टवेयर का lefthand पैनल पर 'टाइम' बॉक्स में डिफ़ॉल्ट photoactivation के समय का उपयोग, और photoactivation शुरू करने के लिए हरी 'शुरू' बटन पर क्लिक करें. एक बार जब पूरा, सरणी हटाने और शुद्ध पानी के लिए अतिरिक्त ampliPHY निकालने से कुल्ला. साफ बहुलक गठन के कुछ धब्बे पर अब दिखाई जानी चाहिए.
  6. बहुलक स्पॉट 2 मिनट के लिए शुष्क करने की अनुमति दें, तो वितरित की दो बूँदें सरणी पर ampliRED और 2 मिनट के लिए आगे बढ़ना धुंधला की अनुमति.
  7. अगले, जल्दी शुद्ध पानी और एक ऊतक पोंछ के साथ सूखी साथ माइक्रोएरे कुल्ला.
  8. AmpliPHOX रीडर के इमेजिंग खाड़ी में माइक्रोएरे सम्मिलित करें, और इमेजिंग टैब में 'कैद नई छवि' बटन पर क्लिक करें. एक बार imaged, फसल समायोजित और छवि को बचाने.
  9. विश्लेषण टैब में, अंशांकन चिप मुखौटा और 'ऑटो नियुक्ति' बटन का चयन करने के लिए विश्लेषण शुरू. सॉफ्टवेयर स्वचालित रूप से एक 'सारांश रिकार्ड मात्रा निर्धारित परिणाम दिखाने का उत्पादन होगा. इन परिणामों के आधार पर, photoactivation के समय दूसरी अंशांकन सरणी के लिए 10 सेकंड के द्वारा निकाला जाता है, और प्रक्रिया को दोहराया है.
  10. एक बार इष्टतम photoactivation के समय निर्धारित किया गया है, नमूना arrays एक ही संकेत प्रवर्धन और इमेजिंग प्रोटोकॉल अंशांकन arrays के लिए इस्तेमाल किया उपयोग संसाधित किया जा सकता है.
  11. एक बार छवि नमूना arrays के लिए कब्जा कर लिया है, अपने इन्फ्लूएंजा सरणी लेआउट यहाँ वर्णित के रूप में विशेष सरणी लेआउट के लिए एक मुखौटा हो सकता है created.The ampliVIEW सॉफ्टवेयर स्वचालित छवि विश्लेषण प्रदर्शन और प्रत्येक नमूना के लिए इन्फ्लूएंजा subtyping परिणाम पैदा करने में सक्षम है.

5. प्रतिनिधि परिणाम:

चित्रा 1
चित्रा 1 ampliPHOX वर्णमिति पहचान पद्धति के योजनाबद्ध चित्रण. (ए) Biotinylated लक्ष्य डीएनए सरणी में प्रत्येक स्थान के लिए संकरित है, और (बी) ampliTAG के साथ लेबल. (सी) ampliPHY समाधान फिर, जोड़ा जाता है और (डी) को दिखाई बहुलक स्पॉट के रूप में प्रकाश उजागर. (ई) बहुलक का गठन धब्बे बाद में एक गैर विषैले डाई करने के लिए इसके विपरीत में सुधार के साथ दाग रहे हैं.

"ontent> चित्रा 2
चित्रा 2 (ए) इन्फ्लुएंजा कम घनत्व माइक्रोएरे लेआउट. 1-7 दृश्यों और 10-13, और दृश्यों 8, 9 लक्ष्य इन्फ्लूएंजा बी (बी) ampliPHOX और (सी) एक 2009 उपन्यास H1N1 ('स्वाइन फ्लू') नमूना एक ही पहचान पैटर्न दिखा प्रतिदीप्ति छवियों दोनों द्वारा लक्ष्य इन्फ्लूएंजा तरीकों.

चित्रा 3
चित्रा 3 बाएं से सही, इन्फ्लूएंजा एक H3N2, मानव मूल के H1N1, 2009 उपन्यास H1N1 (सूअर मूल के), और एक नकारात्मक नमूना के लिए प्रतिनिधि ampliPHOX छवियों के लिए .. सभी 3 उपप्रकारों सरणी पर नेत्रहीन अलग पैटर्न दिखा. नकारात्मक में सूचना है कि केवल MS2 आंतरिक नियंत्रण में देखा जाता है, RT-पीसीआर प्रवर्धन का संकेत नहीं हिचकते था.

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Discussion

ampliPHOX वर्णमिति का पता लगाने प्रौद्योगिकी यहाँ प्रस्तुत है एक तेजी से, कम घनत्व माइक्रोएरे अनुप्रयोगों के लिए एकल रंग प्रतिदीप्ति पता लगाने के लिए सस्ता विकल्प है. Schematically चित्र 1 में दिखाया गया है, पता लगाने के सिद्धांत photoinitiator लेबल (1B) का उपयोग पर आधारित है. Monomer युक्त समाधान (1C) की उपस्थिति में, प्रकाश जोखिम photoinitiator (ampliTAG) लेबल क्षेत्रों में केवल एक polymerization के रिएक्शन (1D) ट्रिगर करने के लिए कारण बनता है. हालांकि इन्फ्लूएंजा पहचान और subtyping के लिए एक डीएनए सरणी पर यहाँ का प्रदर्शन, प्रौद्योगिकी के लिए किसी भी biotinylated एक माइक्रोएरे पर कब्जा कर लिया उत्पाद का पता लगाने के लिए बढ़ाया जा सकता है. एक उदाहरण के रूप में, हमारे photopolymerization आधारित पता लगाने का उपयोग कर एक अलग अभिकर्मक रसायन शास्त्र पर पहले काम दोनों न्यूक्लिक एसिड और एंटीबॉडी आधारित arrays पर प्रदर्शन किया गया 12 दूसरों को भी photopolymerization आधारित एक प्रणाली के एंटीबॉडी और प्रोटीन आधारित अनुप्रयोगों के लिए सबूत की अवधारणा से पता चला है. . इन मामलों में, अलग अभिकर्मक एक आभ्यांतरिक गैस के साथ purging की आवश्यकता chemistries उपयोग थे. 13,14

इन्फ्लूएंजा कम घनत्व माइक्रोएरे प्रतिनिधि और छवियों का एक योजनाबद्ध चित्रा 2 में देखा जा सकता है. 2A चित्र में दिखाया गया है, सरणी एक स्थानिक मार्कर / खोलना नियंत्रण (लाल रंग में) और 14 अद्वितीय कब्जा दृश्यों (नीले में), प्रत्येक तीन प्रतियों में देखा होता. कब्जा दृश्यों एमिनो समाप्त सिंथेटिक कम (~ 25 मेर) इन्फ्लूएंजा लक्ष्य है कि आनुवंशिक इन्फ्लूएंजा के विशिष्ट प्रकार या उपप्रकार के प्रतिनिधि कर रहे हैं पर कब्जा करने के लिए डिज़ाइन oligonucleotides कर रहे हैं. कब्जा दृश्यों को अलग इन्फ्लूएंजा एक उपप्रकार के लिए चिप पर अलग अलग पैटर्न का उत्पादन करने के लिए डिजाइन किए हैं. आंकड़े 2B 2C और ampliPHOX और पारंपरिक प्रतिदीप्ति द्वारा एक 2009 उपन्यास H1N1 नमूना, क्रमशः का पता लगाने के एक प्रत्यक्ष तुलना दिखाते हैं. प्रतिदीप्ति परिणाम एक confocal प्रतिदीप्ति माइक्रोएरे स्कैनर (Genetix aQuire) का उपयोग कर उत्पन्न किया गया. एक ही समग्र पता लगाने के पैटर्न दोनों तरीकों के लिए आसानी से देखा जा सकता है है, लेकिन, ampliPHOX परिणाम नग्न आंखों को दिखाई है.

तीन प्रतिनिधि इन्फ्लूएंजा एक सकारात्मक नमूनों और एक नकारात्मक नमूना के रूप में प्रोटोकॉल यहाँ वर्णित द्वारा संसाधित से ampliPHOX परिणाम 3 चित्र में दिखाया जाता है. आंकड़े 3A 3B, और एक मानव मूल H3N2, H1N1 मानव मूल, और सूअर मूल के H1N1 (2009 उपन्यास H1N1), क्रमशः के लिए 3C शो परिणाम. इन 3 छवियों के लिए समग्र पता लगाने के पैटर्न में एक स्पष्ट अंतर को आसानी से देखा जा सकता है. उदाहरण के लिए, यह देखा जा सकता है कि 2 दृश्यों और 3 इन्फ्लूएंजा एक उपप्रकार दिखाया (3A -3 सी) के सभी के लिए उत्पादन में संकेत है, लेकिन है कि 10 दृश्यों, 12, और 13 केवल मूल सूअर के लिए संकेत H1N1 नमूना उत्पादन (3C) . यह दृष्टिकोण पहले से इस्तेमाल किया गया है सफलतापूर्वक लिखें और एक माइक्रोएरे पर subtype इन्फ्लूएंजा वायरस 6,8,10 महत्वपूर्ण बात है, नकारात्मक 3D चित्र में दिखाया नमूना आंतरिक नियंत्रण अनुक्रम पर संकेत से पता चलता है, RT-पीसीआर प्रतिक्रिया के निषेध नहीं है या विफलता का संकेत है.

इन छवियों की व्याख्या आसानी से ampliVIEW सॉफ्टवेयर द्वारा स्वचालित है. उपयोगकर्ता पहली बार सॉफ्टवेयर का उपयोग करता है माइक्रोएरे लेआउट को परिभाषित करने के लिए, और तब वर्णन करने के लिए जो लक्ष्य इस लेआउट के लिए एक निश्चित "उत्तर" उत्पन्न करने के लिए मौजूद होना चाहिए. उदाहरण के लिए, इन्फ्लूएंजा चित्रा 2A में दिखाया लेआउट "एक सकारात्मक फ्लू", "फ्लू बी सकारात्मक", "गैर मौसमी इन्फ्लूएंजा ए", "मौसमी इन्फ्लूएंजा ए", और "नकारात्मक" के रूप में ऐसे तार्किक परिणाम के आधार पर, उत्पन्न कर सकता है परिणामों में वांछित है. एक बार इन तार्किक कार्य बना रहे हैं और बचाया, सॉफ्टवेयर स्वचालित रूप से छवियों की व्याख्या थोड़ा उपयोगकर्ता इनपुट के साथ एक परिणाम प्रदान कर सकते हैं.

ampliPHOX पहचान तकनीक मिनट में प्रतिदीप्ति के लिए इसी तरह की संवेदनशीलता के साथ कम घनत्व प्रोटीन के लिए दृश्य, वर्णमिति परिणाम उत्पन्न करता है. हम मानते हैं के संयोजन के आसान उपयोग करने के लिए, एक कम लागत साधन के साथ सस्ती अभिकर्मकों पारंपरिक माइक्रोएरे तरीकों का पता लगाने के लिए एक आकर्षक विकल्प प्रदान करता है, खासकर के रूप में अधिक लक्षित है, कम घनत्व डीएनए / जीनोमिक निदान हो तेजी से आवेदनों की एक किस्म में इस्तेमाल किया.

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Disclosures

लेखकों के सभी InDevR, Inc, एक के लिए लाभ इकाई के कर्मचारी हैं. InDevR ampliPHOX प्रौद्योगिकी के साथ साथ वर्णित है commercializing.

Acknowledgments

InDevR इस काम के वित्तपोषण के लिए NIH / U01AI070276 NIAID और R43AI077112 मानता है.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Qiagen MinElute Virus Spin Kit Qiagen 57704 single 60 μl elution
QIAcube Qiagen 9001292 optional
ABI 9800 Fast Thermal Cycler Applied Biosystems 4441166
Qiagen OneStep RT-PCR kit Qiagen 210210 kit dNTPs not used
2x Spotting Buffer InDevR Inc. MI-5007
Biotinylated dNTP Mix InDevR Inc. MI-5009
Lambda exonuclease Epicentre Biotechnologies LE032K 2500 U, 10U/μl
FluChip primer mix InDevR Inc. N/A not yet available for sale
Orbital Shaker Madell Technology ZD-9556-A
Wash Bins InDevR Inc. MI-4002
Wash Racks InDevR Inc. MI-4003
2x Hybridization Buffer InDevR Inc. MI-5004
Calibration Chips InDevR Inc. AP-5006
Wash Buffers A-D InDevR Inc. MI-5005
ampliRED InDevR Inc. AP-5004
ampliTAG InDevR Inc. AP-5001
2x ampliTAG Buffer InDevR Inc. AP-5002
ampliPHY, ampliPHY enhancer InDevR Inc. AP-5003

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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Comments

1 Comment

  1. nice

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 14, 2012 - 11:34 AM

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